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專(zhuān)題1

基因工程基因工是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),通過(guò)體外NA重和轉(zhuǎn)基因技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品程是在DNA分水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施的做DNA重組技術(shù)。限制酶要是從原核生物中分離純化出來(lái)能夠識(shí)別雙鏈分的某種特定的核苷酸序列,并使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi),形成黏性末端和平末端,具有專(zhuān)一性。3.DNA連接酶有兩種E?連酶和T4-DNA連酶縫合磷酸二酯鍵E?連酶來(lái)源于噬菌體,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái);而T4DNA連接酶能縫合兩種末端,但連接平末端的之間的效率較低;運(yùn)載體三種包括質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒。最常用的載體是它是一種裸露的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的、獨(dú)立于細(xì)菌染色體之外,并具有自我復(fù)制能力的雙鏈環(huán)狀分。運(yùn)載體體具備的條件:①能在受體細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存。②具有一至個(gè)限制酶切點(diǎn),供外源DNA片插入。③具有標(biāo)記基因,供重組的定和選擇?;蚬さ幕静僮鞒?一步:目的基因的獲??;第二步:基因表達(dá)載體的構(gòu)(核心三:將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞;第四步:目的基因的檢測(cè)和表達(dá)。目的基主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因,原核基因采取直接分離獲得,真核因是人工合,人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。技擴(kuò)增目的基因原理是雙復(fù)制,過(guò)程包括第一步:加熱至9095℃DNA解;第二步:卻到~℃,引結(jié)合到互補(bǔ)鏈;第三步:加熱至70~75℃,熱穩(wěn)定合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。基因表載體的構(gòu)建目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并且可以傳至下一代,使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用?;虮磔d體組成:目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因。10.啟動(dòng)子是一段有特殊構(gòu)的片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA最終獲得所需的蛋白質(zhì)。終止子:也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片,位基因的尾端。12.標(biāo)基因的作用:是了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)。常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因。13.轉(zhuǎn)化是目的基因進(jìn)入體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程。14.將目的基因?qū)胫参锇捎米疃嗟姆椒ㄊ寝r(nóng)桿轉(zhuǎn)化法,其次還有基槍法和花粉管通道法等。15.將目的基因?qū)雱?dòng)物胞最常用的方法是顯微注射技術(shù)。此方法的受體細(xì)胞是受精卵。16.將目的基因?qū)胛⑸?xì)胞:原核生物作為受體細(xì)胞的原因是繁殖、多為單細(xì)胞、傳物質(zhì)相對(duì)較少,最常用的原核細(xì)胞是大腸桿菌,其轉(zhuǎn)化方法是:先用處細(xì)胞,使其成為感受態(tài)細(xì)胞,再將重組表達(dá)載體分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收NA分,完成轉(zhuǎn)化過(guò)程。17.目的基因?qū)胧荏w細(xì)后形成重組細(xì)胞,篩選含有基因表達(dá)載體受體細(xì)胞的依據(jù)是標(biāo)記基因是否表達(dá)。18.目的基因是否導(dǎo)入檢:要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體D上否插入了目的基因,方法是采用分雜交技術(shù)。19.目的基因?qū)胧欠褶D(zhuǎn)檢測(cè):目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了,法是采用用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜

交。20.目的基因是否翻譯成白質(zhì)方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì),用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交。21.有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生學(xué)水平的鑒定。如轉(zhuǎn)基抗蟲(chóng)植物是否出現(xiàn)抗蟲(chóng)性狀。22.植物基因工程應(yīng)用有蟲(chóng)、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物,利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。23.動(dòng)物基因工程應(yīng)用有高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物(乳腺生物反應(yīng)器:xx用目的基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一......)。24.基因治療即把正常的源基因?qū)氩∪梭w內(nèi)基表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用體基治療和體外基因治(正?;?、反義基因、自殺基因。25.蛋質(zhì)工程是指以蛋質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ),通過(guò)基因修飾或基因合成,對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造,或制造一種新的蛋白質(zhì),以滿(mǎn)足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需求因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì))專(zhuān)題2細(xì)胞工程26.植物細(xì)胞工程理論基(原理)是細(xì)胞全能性。27.植組織培養(yǎng)是指在菌和人工條件下,將離體的植物器官、組織、細(xì)胞,培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上,給予適宜的培養(yǎng)條件,誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽,最終形成完整的植株。28.全能性表達(dá)的難易程:受精卵>生殖細(xì)胞>干細(xì)胞>體細(xì)胞;植物細(xì)胞>動(dòng)物細(xì)胞29.植物組織培養(yǎng)技術(shù)過(guò):離體的植物器官、組織或細(xì)胞→脫分化(無(wú)光)→愈傷組織→再分(有)→叢芽→試管苗→植物體30.植物組織培用途包括型繁殖、作物脫毒、制造人工種子、單倍體育種、細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)。31.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)將不同種的植物體細(xì)胞,在一定條件下(用纖維素酶和果膠酶除去細(xì)胞壁形成原生質(zhì)體,用物理法包括離心、振動(dòng)、電刺激等方法或化學(xué)法一般是用聚乙二醇PEG)作為導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞融合)融合形成雜種細(xì)胞,經(jīng)再生出細(xì)胞壁及組織培養(yǎng),最終形成雜種植物。32.植物體細(xì)胞雜交術(shù)意在于克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙。33.當(dāng)長(zhǎng)素含量高于細(xì)分裂素時(shí),主要誘導(dǎo)植物組織脫分化和根原基的形成,當(dāng)細(xì)胞分裂素的效應(yīng)高于生長(zhǎng)素時(shí),主要誘導(dǎo)植物再分化與芽原基的形成。34.動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)就是從物機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖。35.動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)的流程取動(dòng)物組織塊(動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織)→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿(mǎn)瓶壁的細(xì)胞重新用胰白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。36.細(xì)貼壁和接觸抑制懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上,稱(chēng)為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞數(shù)目不斷增多,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互抑制時(shí),細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞的接觸抑制。37.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿(mǎn)以下條:無(wú)菌、營(yíng)養(yǎng)、溫度PH氣體環(huán)境38.動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)菌、毒的環(huán)境:培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素,以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。此外,應(yīng)定期更換培養(yǎng)液,防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。39.動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)包合成培養(yǎng)基成分:糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常需加入血清、血漿等天然成分。40.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)溫度:宜溫度:哺乳動(dòng)物多是℃+℃pH7.2~7.441.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)氣體環(huán)95%空氣+O2細(xì)胞代謝所必需的CO2的要作用是維持培養(yǎng)液的pH。42.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的用:制備病毒疫苗、制備單克隆抗體、檢測(cè)有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞。43.動(dòng)核移植是將動(dòng)物一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中,使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)析的胚胎最終將發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。44.哺乳動(dòng)物核移植可分胚胎細(xì)胞核移植(比較容易)和體細(xì)胞核移植(比較難代多莉羊

45.哺乳動(dòng)物核移植選用核(MII期卵母細(xì)胞的原因:卵母)細(xì)胞比較大,容易操;卵母)細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)多,營(yíng)養(yǎng)豐富。46.體胞核移植技術(shù)的用:①加速家畜遺傳改良進(jìn)程,促進(jìn)良畜群繁育;②保護(hù)瀕危物種,增大存活數(shù)量;③生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白;④作為異種移植的供體;⑤用于組織器官的移植等。47.體細(xì)胞核移植技術(shù)存的問(wèn)題:克隆動(dòng)物存在著健康問(wèn)題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等。48.動(dòng)細(xì)胞融合也稱(chēng)細(xì)雜交,是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞,稱(chēng)為雜交細(xì)胞。49.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物生質(zhì)體融合的原理基本相同,誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法類(lèi)似,常用的誘導(dǎo)因素有聚乙二醇、滅活的病毒、電刺激等。50.動(dòng)細(xì)胞融合的意義克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親和性,成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。51.動(dòng)細(xì)胞融合與植物細(xì)胞雜交的比較:植物體細(xì)胞雜交原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞全能性,方法:去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離、電刺激、振動(dòng),聚乙二醇等試劑誘導(dǎo),克服了遠(yuǎn)緣雜交的不親性,用法:獲得雜種植株;動(dòng)物細(xì)胞融合原理:細(xì)胞膜的流動(dòng)性,方法:使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合,除應(yīng)植物細(xì)胞雜交手段外,再加滅活的病毒誘導(dǎo),用法:制備單克隆抗體的技術(shù)之一52.一個(gè)B淋細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。53.單隆抗體的制備過(guò)幾個(gè)專(zhuān)有名詞:骨髓瘤細(xì)胞、親本細(xì)胞、同種核的細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞、雜種細(xì)胞、克隆化培養(yǎng)、單克隆抗體。54.雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn):能大量繁殖,又能產(chǎn)生專(zhuān)一的抗體。55.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn):異性強(qiáng),靈敏度高,并能大量制備。56.單克隆抗體的作用:作診斷試劑:準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異,并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合,具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。②于治療疾病和運(yùn)載藥物:主要用于治療癌癥治療,可制“生物導(dǎo)彈也有少量用于治療其它疾病。專(zhuān)題3胚工程57.胚工程是指對(duì)動(dòng)物期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù),如胚胎移植、體外受精、胚胎分割、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)。經(jīng)過(guò)處理后獲得的胚胎,還需移植到雌性動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)后代,以滿(mǎn)足類(lèi)的各種需求。58.幾個(gè)專(zhuān)有名詞:排卵精子獲能、透明帶反應(yīng)、卵細(xì)胞膜反應(yīng)、合子。59.受精場(chǎng)所是母體的輸管上段。60.卵裂期特點(diǎn):細(xì)胞有分裂,細(xì)胞數(shù)量不斷增加,但胚胎的總體體積并不增加,或略有減小。61.桑椹胚特點(diǎn):胚胎細(xì)數(shù)目達(dá)到32個(gè)右時(shí),胚胎形成致密的細(xì)胞團(tuán),形似桑椹。是全能細(xì)胞。62.囊胚特點(diǎn)細(xì)開(kāi)始出現(xiàn)分該時(shí)期細(xì)胞的全能性仍比較高在胚胎一端個(gè)體大的細(xì)胞稱(chēng)為內(nèi)細(xì)胞團(tuán),將來(lái)發(fā)育成胎兒的各種組織。中間的空腔稱(chēng)為囊胚腔(透明帶破裂、孵63.原腸胚特點(diǎn):有了三層的分化,具有囊胚腔和原腸腔。64.哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)簡(jiǎn)稱(chēng)或EK細(xì)來(lái)于早期胎或從原始性腺中分離出,具有胚胎細(xì)胞的特性在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小,細(xì)胞核大,核仁明顯;在功能上,具有發(fā)育的全能性,可分化為成年動(dòng)體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。65.胚干細(xì)胞的主要用是:①可用于研究哺乳動(dòng)物個(gè)體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律;②是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料在培養(yǎng)液中加入分化誘因子牛黃酸等化學(xué)物質(zhì)時(shí)就可以誘導(dǎo)胞向不同類(lèi)型的組織細(xì)胞分化,這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡的機(jī)理提供了有效的手段;③可以用于治療人類(lèi)的某些頑疾,如金森綜合癥、少年糖尿病等;④利用可以被誘導(dǎo)分化形成新的組織細(xì)胞的特性,移植ES細(xì)胞可使壞死或退的部位得以修復(fù)并恢復(fù)正常功能;⑤隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展,通過(guò)ES細(xì)體外誘導(dǎo)分化,定向培育出人造組織器官,用于器官移植,解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問(wèn)題。

66.卵細(xì)胞的采集和培主要方法:用促性腺激素處理,使其排出更多的卵子,然后,從輸卵管中沖取卵子,直接與獲能的精子在體外受精二方法剛宰母畜的卵巢中采集卵母細(xì)胞三種方法是借助超聲波探測(cè)儀、腹腔鏡等直接從活體動(dòng)物的卵巢中吸取卵母細(xì)胞。采集的卵母細(xì)胞,都要在體外經(jīng)人工培養(yǎng)成后,才能與獲能的精子受精。67.體外受精是指獲能的子和培養(yǎng)成熟的卵細(xì)胞在獲能溶液或?qū)S玫氖芫芤褐型瓿墒芫^(guò)程。68.胚的早期培養(yǎng):精與卵子在體外受精后,應(yīng)將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),以檢查受精狀況和受精卵的發(fā)育能力。培養(yǎng)液成分較復(fù)雜,除一些無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽外,還需添加維生素、激素、氨基、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分,以及血清等物質(zhì)。當(dāng)胚胎發(fā)育到適宜的階段時(shí),可將其取出向受體移植或冷凍保存。不同物胚胎移植的時(shí)間不同。69.胚移植是指將雌性物的早期胚胎,或者通過(guò)體外受精及其它方式得到的胚胎,移植到同種的、生理狀態(tài)相同的其它雌性動(dòng)物的體內(nèi),使之繼續(xù)發(fā)育為新個(gè)體的技術(shù)。其中提供胚胎的個(gè)體稱(chēng)為“供體受胚胎的個(gè)體稱(chēng)為“受體為優(yōu)良品種,為受體的雌性動(dòng)物應(yīng)為常見(jiàn)或存量大的品種70.轉(zhuǎn)基因、核移植,或外受精等任何一項(xiàng)胚胎工程技術(shù)所生產(chǎn)的胚胎,都必須經(jīng)過(guò)胚胎移植技術(shù)才能獲得后代,是胚胎工程的最后一道“工序71.胚胎移植的意義:大縮短了供體本身的繁殖周期,充分發(fā)揮雌性?xún)?yōu)良個(gè)體的繁殖能力。72.胚移植生理學(xué)基礎(chǔ)①動(dòng)物發(fā)情排卵后,同種動(dòng)物的供、受體生殖器官的生理變化是相同的。這就為供體的胚胎移入受體提供了相同的生理環(huán)境。②早期胚胎在一定時(shí)間內(nèi)處于游離狀態(tài)。這就為胚胎的集提供了可能。③受體對(duì)移入子宮的外來(lái)胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)為胚胎在受體的存活提供了可能供體胚可與受體子宮建立正常的生理和組織聯(lián)系,但供體胚胎的遺傳特性在孕育過(guò)程中不受影響。73.胚移植過(guò)程:①對(duì)、受體的選擇和處理。選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體,有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體,供體和受體是同一物種。并用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理,用促性腺激素對(duì)供體母牛超數(shù)排卵處理。②配種或人工授精。③對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。配種或輸精后天用特制的沖卵裝置,把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(lái)(也叫沖卵。對(duì)胚胎進(jìn)行

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