微生物檢驗(yàn)第十二章真菌演示文稿

微生物檢驗(yàn)第十二章真菌演示文稿當(dāng)前1頁，總共117頁。微生物檢驗(yàn)第十二章真菌當(dāng)前2頁，總共117頁。原核細(xì)胞型微生物與真核細(xì)胞型微生物比較

原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物細(xì)胞核結(jié)構(gòu)核膜無有核仁無有分裂方式主要以二分裂有絲分裂，減數(shù)分裂細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)質(zhì)膜常缺乏固醇常有固醇內(nèi)膜較簡單，有中介體復(fù)雜，有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體核糖體70S80S呼吸系統(tǒng)質(zhì)膜或中介體線粒體當(dāng)前3頁，總共117頁。Dimorphism（二相性真菌）機(jī)體內(nèi)寄生37℃UnicellularMulticellular含動物蛋白培養(yǎng)基yeast沙保氏培養(yǎng)基25℃ 普通培養(yǎng)基25℃mold當(dāng)前4頁，總共117頁。當(dāng)前5頁，總共117頁。真菌繁殖結(jié)構(gòu)，一條菌絲可生成多個孢子MorphologyofSpore

孢子芽胞作用真菌繁殖結(jié)構(gòu)細(xì)菌休眠結(jié)構(gòu)，抵御不良環(huán)境低抗力不強(qiáng)，加熱60~70℃短時間即可死亡強(qiáng)，有的可耐100℃數(shù)小時當(dāng)前6頁，總共117頁。Categoriesofsporesexualspore:asexual

spore分生孢子葉狀孢子孢子囊孢子芽生孢子厚膜孢子關(guān)節(jié)孢子大分生孢子小分生孢子當(dāng)前7頁，總共117頁。芽生孢子當(dāng)前8頁，總共117頁。厚膜孢子當(dāng)前9頁，總共117頁。關(guān)節(jié)孢子當(dāng)前10頁，總共117頁。孢子囊孢子當(dāng)前11頁，總共117頁。標(biāo)本（1）皮膚的角質(zhì)性物質(zhì)（2）各種分泌物和排泄物（3）血液和體液（4）膿汁及滲出物（1）采集的標(biāo)本要適宜（2）在用藥前采集標(biāo)本（3）采集的標(biāo)本量要足（4）嚴(yán)格無菌操作（5）采集的標(biāo)本立即送檢注意當(dāng)前12頁，總共117頁。鏡檢真菌形態(tài)真菌抗原檢測真菌分離培養(yǎng)與鑒定真菌核酸檢測真菌毒素檢測

實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)當(dāng)前13頁，總共117頁。癬病標(biāo)本多用KOH濕片檢查法

當(dāng)前14頁，總共117頁。意義③判斷某些真菌種的致病性等,如皮膚癬菌、曲霉等。直接鏡檢陽性表示：①有診斷意義。②看到的就是真菌的形態(tài)，可確定某些致病性真菌的屬或種。②有假陽性結(jié)果。局限性：①陰性結(jié)果不能排除真菌感染；當(dāng)前15頁，總共117頁。常用的染色方法常用的染色方法有革蘭染色、瑞氏染色、熒光染色，乳酸酚棉藍(lán)染色、還有墨汁負(fù)染色等。對檢測骨髓和外周血中的莢膜組織胞漿菌，需作瑞氏染色或姬氏染色后鏡檢。檢測病人腦脊液標(biāo)本中新生隱球菌，需作墨汁負(fù)染色后檢查，背景為黑色，新生隱球菌和莢膜不著色

當(dāng)前16頁，總共117頁。（二）、真菌抗原檢測白假絲酵母菌甘露聚糖抗原、隱球菌多糖莢膜抗原、組織胞漿菌循環(huán)多糖抗原常用的方法有膠乳凝集試驗(yàn)、ELISA、半定量放射免疫法

當(dāng)前17頁，總共117頁。（三）、真菌的分離培養(yǎng)

真菌的培養(yǎng)特點(diǎn)：三低兩高真菌培養(yǎng)是目前準(zhǔn)確鑒定真菌的可靠方法平皿培養(yǎng)大試管培養(yǎng)玻片培養(yǎng)當(dāng)前18頁，總共117頁。①菌落性質(zhì)：酵母菌還是霉菌②菌落大?。翰≡哉婢湫?，而條件致病性真菌菌落大④致病性真菌菌落下沉，有時使培養(yǎng)基開裂；污染性真菌菌落不下沉,很少引起開裂。③菌落顏色

病原性真菌顏色淡，污染真菌顏色深；菌落的性狀是鑒別真菌的重要特征當(dāng)前19頁，總共117頁。真菌鑒定1.糖(醇)類發(fā)酵試驗(yàn)2.同化碳源試驗(yàn)3.同化氮源試驗(yàn)菌種鑒定是一個復(fù)雜過程，僅觀察菌落形態(tài)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，還需作生化反應(yīng)，分子生物學(xué)鑒定，必要時將菌種送有關(guān)單位鑒定。當(dāng)前20頁，總共117頁。核酸檢測毒素的檢測

動物試驗(yàn)當(dāng)前21頁，總共117頁。1.多烯類抗生素，如兩性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等。2.吡咯類，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。3.其他類如氟胞嘧啶?？拐婢幬锓诸?-化學(xué)結(jié)構(gòu)分類當(dāng)前22頁，總共117頁。臨床標(biāo)本直接檢查檢測抗原直接鏡檢固定標(biāo)本染色墨汁負(fù)染色法KOH法毛發(fā)指甲皮屑腦脊液分離培養(yǎng)沙氏培養(yǎng)基25℃37℃觀察菌落分子生物學(xué)檢測動物實(shí)驗(yàn)檢測抗體病理檢查鏡檢、生化反應(yīng)當(dāng)前23頁，總共117頁。小結(jié)真菌的致病性真菌的基本特性：菌絲、孢子、培養(yǎng)特性標(biāo)本采集注意事項(xiàng)常用的檢查方法：顯微鏡檢查、分離培養(yǎng)、生化實(shí)驗(yàn)當(dāng)前24頁，總共117頁。思考題：1.簡述真菌的致病性特點(diǎn)。2.真菌標(biāo)本采集是有哪些注意事項(xiàng)？3.形態(tài)學(xué)檢查和培養(yǎng)在真菌檢查中的意義。當(dāng)前25頁，總共117頁。（一）掌握毛癬菌屬、表皮癬菌屬和小孢子絲菌生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)方法及鑒定。（二）熟悉淺部真菌感染的種類目的要求當(dāng)前26頁，總共117頁。皮下組織感染真菌毛癬菌屬表皮癬菌屬小孢子菌屬表面感染真菌皮膚癬真菌糠秕馬拉色菌著色真菌孢子絲菌當(dāng)前27頁，總共117頁。位置：寄居于人體皮膚和毛干的最表層。因不接觸組織細(xì)胞，很少引起宿主細(xì)胞反應(yīng)。嗜脂性酵母樣菌代表：秕糠馬拉色菌(Malasseziafurfur)癥狀：皮膚表面出現(xiàn)花斑癬（汗斑）當(dāng)前28頁，總共117頁。微生物檢驗(yàn)1．直接顯微鏡檢查可采用透明膠帶粘貼取材法，將透明膠帶直接貼于皮膚表面，數(shù)分鐘后揭下，直接貼于載玻片上鏡檢或經(jīng)棉藍(lán)染色或革蘭染色后鏡檢。可見孢子和菌絲。孢子為圓形或卵形，厚壁，芽頸較寬，常成簇分布；菌絲粗短，呈臘腸樣。2．分離培養(yǎng)與鑒定當(dāng)前29頁，總共117頁。毛癬菌屬毛癬菌屬（Trichophyton）屬半知菌亞門－絲孢菌目－叢梗孢菌科，有20余種，其中14種能引起人和動物的感染。臨床上常見的有紅色毛癬菌(trichophytonrubrum)須癬毛癬菌(T.mentagrophytes,又稱石膏樣毛癬菌)許蘭毛癬菌(T.schoenleinii,又稱黃癬菌)紫色毛癬菌（T.violaceum）斷發(fā)毛癬菌（T.tonsurans）當(dāng)前30頁，總共117頁。毛癬菌：菌落灰白、紅、橙或棕色,表面呈絨毛狀、粉粒狀或蠟樣。大分生孢子細(xì)長棒狀薄壁。菌絲有螺旋狀、球拍狀、鹿角狀和結(jié)節(jié)狀當(dāng)前31頁，總共117頁。微生物檢驗(yàn)1．標(biāo)本采集采集新發(fā)生的皮膚損害邊緣皮屑；指甲近尖端下面甲屑；拔取無光澤病發(fā)。2．直接顯微鏡檢查皮屑10%KOH液；指甲25%KOH/25%NaOH處理鏡檢可見透明、有隔，常有分支的菌絲及成鏈的關(guān)節(jié)孢子。當(dāng)前32頁，總共117頁。皮膚癬菌感染的毛發(fā)當(dāng)前33頁，總共117頁。三.分離培養(yǎng)標(biāo)本70%乙醇或在青、鏈霉素混合液內(nèi)處理5min生理鹽水洗3次接種沙氏瓊脂斜面25℃培養(yǎng)觀察菌落特征。四.其他鑒定試驗(yàn)毛發(fā)穿孔試驗(yàn)脲酶試驗(yàn)特殊營養(yǎng)需要試驗(yàn)當(dāng)前34頁，總共117頁。毛發(fā)穿孔試驗(yàn)將頭發(fā)發(fā)剪成lcm長，置于已加入25ml蒸餾水和2—3滴10％酵母浸膏液的平皿內(nèi)，高壓滅菌。將待檢皮膚真菌接種于平皿內(nèi)，置25℃孵育四周，每周檢查一次，每次取數(shù)根毛發(fā)置載玻片上，經(jīng)乳酚棉藍(lán)染色后，置低倍鏡下觀察。若毛發(fā)有裂口或陷凹者為陽性，否則為陰性。當(dāng)前35頁，總共117頁。藥物敏感試驗(yàn)對灰黃霉素、伊曲康唑等藥物敏感。當(dāng)前36頁，總共117頁。表皮癬菌屬

表皮癬菌屬（Epidermophyton）目前只有一個種，即絮狀表皮癬菌（E.floccosum）,能引起人類感染。絮狀表皮癬菌是一種常見的皮膚癬菌，可引起皮膚感染如股癬、足癬、體癬、手癬和甲癬。當(dāng)前37頁，總共117頁。絮狀表皮癬菌生物學(xué)性狀皮屑和甲屑經(jīng)+10%KOH液消化鏡檢可見分枝斷裂的有隔菌絲，少見孢子培養(yǎng)后，菌落初為白色鵝毛狀，以后轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色粉末狀。鏡下可見球拍狀菌絲、卵圓形或巨大棒狀薄壁大分生孢子，無小分生孢子，在陳舊培養(yǎng)物中可見厚膜孢子。當(dāng)前38頁，總共117頁。表皮癬菌：菌落初為白色鵝毛狀,以后變?yōu)辄S綠色粉末狀。粗棒狀薄壁大分生孢子。菌絲球拍狀當(dāng)前39頁，總共117頁。小孢子菌屬

我國常見的有鐵銹色小孢子菌、石膏樣小孢子菌和狗小孢子菌等。小孢子菌屬感染皮膚和毛發(fā)，很少感染甲。

當(dāng)前40頁，總共117頁。小孢子菌生物學(xué)特性皮屑和毛發(fā)+10%KOH處理鏡檢，皮屑中有分枝斷裂菌絲，在毛發(fā)中呈現(xiàn)小孢子鑲嵌的鞘包裹著發(fā)干。在沙氏培養(yǎng)基中可見白色、棕黃色或黃褐色、粉末或絨毛狀菌落。鏡下可見梳狀、球拍狀或結(jié)節(jié)狀菌絲，卵圓形小分生孢子、厚壁梭形（紡錘形）大分生孢子。當(dāng)前41頁，總共117頁。小孢子癬菌：菌落為灰色、橘紅色或棕黃色，厚壁大分生孢子，菌絲有結(jié)節(jié)狀、梳狀和球拍狀當(dāng)前42頁，總共117頁。當(dāng)前43頁，總共117頁。當(dāng)前44頁，總共117頁。毛癬菌屬當(dāng)前45頁，總共117頁。表皮癬菌屬當(dāng)前46頁，總共117頁。小孢子癬菌屬當(dāng)前47頁，總共117頁。皮下組織真菌感染主要有著色真菌和孢子絲菌著色真菌感染發(fā)生在暴露部位，稱著色真菌病?？ㄊ现︽呙购团崾现可Ｉ昕随咦咏z菌，屬腐生性真菌，常因外傷接觸帶菌的花草等引起感染。此菌可引起孢子絲菌下疳。此菌也可引起深部感染。是一種二相性真菌。當(dāng)前48頁，總共117頁。著色真菌分生孢子：①樹枝型、②劍頂型、③花瓶型：當(dāng)前49頁，總共117頁。當(dāng)前50頁，總共117頁。多發(fā)生四肢暴露部位，開始為小丘疹，表面干燥或濕潤，有鱗屑或鱗痂，逐漸形成斑塊結(jié)節(jié)，呈疣狀增殖。當(dāng)前51頁，總共117頁。直接顯微鏡檢查：單個或成群厚壁孢子，有橫隔或中間十字分隔。培養(yǎng)：沙氏培養(yǎng)基，生長緩慢，菌落從灰黑色至黑色，有氣生菌絲。菌落涂片鏡檢可見三種類型的分生孢子，有鑒定價值。生化反應(yīng)：不能水解淀粉，不凝固牛奶，能同化硝酸鹽，需維生素B1。對5-FC、伊曲康唑、氟康唑敏感，易產(chǎn)生耐藥性當(dāng)前52頁，總共117頁。孢子絲菌申克孢子絲菌傳染源：人和動物傳播途徑：經(jīng)破損皮膚接觸感染。二相性真菌。當(dāng)前53頁，總共117頁。微生物檢驗(yàn)：(1)直接顯微鏡檢查：卵圓形的孢子。當(dāng)前54頁，總共117頁。(2)、分離培養(yǎng)與鑒定：將標(biāo)本接種于沙氏培養(yǎng)基上25℃培養(yǎng)，2-3d開始生長，初為白色濕潤的酵母型菌落，以后變?yōu)榈Х壬辽詈稚?7℃培養(yǎng)2-3d，可形成乳白色或淡褐色酵母型菌落。（3）、對碘化鉀、伊曲康唑、特比萘芬等藥物敏感。當(dāng)前55頁，總共117頁。腳氣

腳氣是一種常見的真菌感染性皮膚病。多見于趾間,足底及足緣,有深在性水皰,糜爛及鱗屑,伴有瘙癢等癥狀.多見于成人,夏秋重,冬春輕,足多汗及常穿膠鞋者易患本病主要致病菌為紅色毛癬菌、石膏樣毛癬菌和絮狀表皮癬菌。當(dāng)前56頁，總共117頁。醫(yī)學(xué)上通常將腳氣分三型：糜爛型、水皰型、角化型

本病是由皮膚癬菌所引起的。足部多汗潮濕或鞋襪不通氣等都可誘發(fā)本病。皮膚癬菌常通過污染的澡堂、游泳池邊的地板、浴巾、公用拖鞋、洗腳盆而傳染。當(dāng)前57頁，總共117頁。預(yù)防1．要保持腳的清潔干燥，勤換鞋襪，鞋子要通氣良好。2．不要用別人的拖鞋、浴巾、擦布等，不要在澡堂、游泳池旁的污水中行走。3．公用澡堂、游泳池要做到污水經(jīng)常處理，以防相互傳染。當(dāng)前58頁，總共117頁。治療灰黃霉素、伊曲康唑派瑞松:曲安奈德益康唑乳膏達(dá)克寧:硝酸咪康唑軟膏當(dāng)前59頁，總共117頁。第三十章深部感染真菌當(dāng)前60頁，總共117頁。（一）掌握深部感染真菌概念、分類、檢驗(yàn)程序；掌握假絲酵母、隱球菌、卡氏肺孢菌微生物學(xué)特性、檢驗(yàn)方法及鑒定要點(diǎn)。（二）熟悉莢膜組織胞漿菌孢子鑒別要點(diǎn)。（三）了解抗真菌藥物分類及臨床應(yīng)用。目的要求當(dāng)前61頁，總共117頁。（一）假絲酵母菌屬：分類、臨床意義、生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)。（二）隱球菌屬；分類、臨床意義、生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)。（三）曲霉菌屬：分類、臨床意義、生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)。（四）組織胞漿菌屬：分類、臨床意義、生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)。（五）卡氏肺孢菌：分類、臨床意義、生物學(xué)特性、微生物學(xué)檢驗(yàn)。

教學(xué)內(nèi)容當(dāng)前62頁，總共117頁。DEFINITION

是指能侵襲深部組織和內(nèi)臟及全身的真菌，主要有假絲酵母菌、隱球菌、曲霉、毛霉、組織胞漿菌和卡氏肺孢菌等。組織胞漿菌為二相性真菌，假絲酵母菌、曲霉菌、毛霉菌和卡氏肺孢菌等為條件致病性真菌，只有在一定條件下才引起機(jī)體致病。當(dāng)前63頁，總共117頁。第一節(jié)假絲酵母菌屬假絲酵母菌（Candida），俗稱念珠菌，生物學(xué)分類為半知菌亞門、半知菌綱、隱球菌目、假絲酵母菌屬。本屬菌有81個種，其中有11種對人有致病性，其中白假絲酵母菌最為常見。當(dāng)前64頁，總共117頁。(一)白假絲酵母菌條件致?。浩つw粘膜感染鵝口瘡，陰道炎內(nèi)臟感染：肺炎、關(guān)節(jié)炎、膀胱炎，腎盂腎炎中樞神經(jīng)感染：腦膜（腦）炎、腦膿腫當(dāng)前65頁，總共117頁。圓形或卵圓形，直徑3-6μm。革蘭陽性，著色不均勻。出芽方式繁殖，在組織內(nèi)可見芽生孢子、假菌絲，在玉米粉培養(yǎng)基中可產(chǎn)生假菌絲和厚膜孢子。MicrobiologyCharacteristics當(dāng)前66頁，總共117頁。將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上，25℃或37℃培養(yǎng)1～４d后，可出現(xiàn)奶油色類酵母型菌落。鏡檢可見假菌絲和芽生孢子。當(dāng)前67頁，總共117頁。1)直接顯微鏡檢查：取膿汁、痰和局部炎癥性分泌物直接涂片，革蘭染色后鏡檢，顯微鏡見到革蘭陽性(著色不均勻)、圓形或卵圓形菌體或孢子及假菌絲，可確認(rèn)為假絲酵母菌感染。2)抗原檢測：取病人血清作ELISA、免疫印跡法等檢測白假絲酵母菌抗原。3)核酸檢測：用PCR法將白假絲酵母菌DNA分子擴(kuò)增后以分子探針檢測，具有較好的敏性和特異性。MicrobiologyExamination

當(dāng)前68頁，總共117頁。將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上，25℃或37℃培養(yǎng)1～４d后，可出現(xiàn)奶油色類酵母型菌落。鏡檢可見假菌絲和芽生孢子。當(dāng)前69頁，總共117頁。鑒定1)芽管形成試驗(yàn)：將假絲酵母菌接種于0.2～0.5m|血清中，37℃孵育1.5～４h觀察有無芽管形成。白假絲酵母菌可形成芽管，其他假絲酵母菌不形成芽管。當(dāng)前70頁，總共117頁。將假絲酵母菌接種于玉米粉培養(yǎng)基25℃孵育1-2d后，白假絲酵母菌在菌絲頂端、側(cè)緣或中間形成厚膜孢子。2)厚膜孢子形成試驗(yàn)：當(dāng)前71頁，總共117頁。3)糖同化或發(fā)酵試驗(yàn)商品化的產(chǎn)色培養(yǎng)基可快速鑒定白假絲酵母菌和其他假絲酵母菌。當(dāng)前72頁，總共117頁。(4)藥物敏感試驗(yàn)：對二性霉素B、5-FC等藥物敏感，但對5-FC極易產(chǎn)生耐藥性。(5)抗體檢測：可用ELlSA夾心法、免疫酶斑點(diǎn)試驗(yàn)，方法簡便。也可用乳膠凝集試驗(yàn)和對流免疫電泳試驗(yàn)等檢測血清中抗白假絲酵母菌抗體。(6)動物試驗(yàn)：將假絲酵母菌懸液注射1ml于家兔耳靜脈或注射0.2ml于小白鼠尾靜脈，觀察5-7天，有無臟器小膿腫。當(dāng)前73頁，總共117頁。當(dāng)前74頁，總共117頁。(二)熱帶假絲酵母菌

廣泛分布于自然界，在人體表和外界相通的腔道中也存在。熱帶假絲酵母菌可引起皮膚、粘膜和內(nèi)臟假絲酵母菌病。它除可在粘膜細(xì)胞上增殖引起感染外，其產(chǎn)生的毒素可引起過敏反應(yīng)及產(chǎn)生的水解酶類引起組織損傷。當(dāng)前75頁，總共117頁。微生物檢驗(yàn)(1)直接顯微鏡檢查：將標(biāo)本作涂片革蘭染色后鏡檢，觀察Ｇ+假絲酵母菌。(2)分離培養(yǎng)與鑒定：將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上形成色暗而干燥的菌落,取菌落作TZC反應(yīng)。當(dāng)前76頁，總共117頁。當(dāng)前77頁，總共117頁。TZC反應(yīng)即在葡萄糖蛋白胨瓊脂內(nèi)加入0．05g／L氯化三苯基四氮唑(TZC)，熱帶假絲酵母菌在此培養(yǎng)基上生長后使培養(yǎng)基變?yōu)樯罴t色或紫色，而白假絲酵母菌不使培養(yǎng)基變色(淡紅)。當(dāng)前78頁，總共117頁。案例分析主訴：患白血病女童，10歲，發(fā)熱2天。

病史：病兒既往健康，1年前被診斷為白血病，經(jīng)化療后有緩解。入院前1個月開始出現(xiàn)進(jìn)行性疲乏，體重減輕，骨髓象呈現(xiàn)50%未成熟細(xì)胞。曾給予化療，并使用甾醇類藥物，2天前體溫升至39℃，無特異性定位體征。

查體：T39℃，BP100/60mmHg，P100次/分，R20次/分，病人消瘦，呈慢性病面容。皮膚：蒼白，有幾處瘀斑，未見瘀點(diǎn)及黃疸；肺部：無異常。

實(shí)驗(yàn)室檢查：血：紅細(xì)胞壓積20%，WBC：600；分類：桿狀核30%，淋巴細(xì)胞55%，單核細(xì)胞5%。尿無異常。

病程記錄：病人靜脈注射替卡西林(ticarcillin)、奈夫西林(nafcillin)和妥布霉素(tobramycin)。入院后2天仍持續(xù)發(fā)熱，第3天病人自訴左眼痛，視力模糊，眼底檢查，在黃斑周邊區(qū)域有白色、絮狀病變。自訴喉痛，檢查發(fā)現(xiàn)咽后壁有幾處白色、粘附的斑塊。

當(dāng)前79頁，總共117頁。問題：

1.你將采集何種標(biāo)本做培養(yǎng)?

2.根據(jù)上述結(jié)果，最有可能是哪一類的病原體?

3.第四天血培養(yǎng)有卵圓形、無莢膜、革蘭陽性病原體生長，體積是葡萄球菌的2~3倍，某些細(xì)胞有出芽。

4.你如何鑒別該病原體的不同種類?

5.該病原菌的自然定居部位是什么?

當(dāng)前80頁，總共117頁。第二節(jié)隱球菌屬廣泛分布于自然界，也存在于人體表、口腔和腸道中，鴿糞中大量存在。人因吸入鴿糞污染的空氣而感染，特別是免疫功能低下者主要引起肺腦的急性或亞急性或慢性感染

當(dāng)前81頁，總共117頁。形態(tài)：圓形，有肥厚莢膜，出芽繁殖，不形成假菌絲染色：墨汁負(fù)染培養(yǎng)特性：沙?；蜓傊囵B(yǎng)基，25℃和37℃酵母型，表面黏稠、渾濁，乳白色菌落生化特性：分解尿素莢膜多糖抗原：A～D4個血清型，我國約70%屬A型MicrobiologyCharacteristics當(dāng)前82頁，總共117頁。新生隱球菌（墨汁負(fù)染色）當(dāng)前83頁，總共117頁。新生隱球菌菌落當(dāng)前84頁，總共117頁。微生物檢驗(yàn)1、標(biāo)本直接鏡檢（1）腦脊液作墨汁負(fù)染色(2)抗原檢測(3)核酸檢測2、分離培養(yǎng)病原性隱球菌在25℃和37℃生長，而非病原性隱球菌在37℃時不生長。培養(yǎng)2—5d后觀察菌落形態(tài)特點(diǎn)，并取菌落作印度墨汁負(fù)染色鏡檢。當(dāng)前85頁，總共117頁。3、鑒定1）酚氧化酶試驗(yàn)：接種L-多巴枸櫞酸鐵和咖啡酸培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，呈棕黑色菌落。2）脲酶試驗(yàn)：培養(yǎng)基可由黃色變粉紅色，而白假絲酵母菌為陰性。3）糖同化及發(fā)酵試驗(yàn)：非致病性隱球菌不能同化肌醇。4、藥敏對兩性霉素B、5-FC、氟康唑等敏感，臨床應(yīng)用時常聯(lián)合應(yīng)用。當(dāng)前86頁，總共117頁。第三節(jié)曲霉菌曲霉菌是條件致病菌，人體對其有極強(qiáng)免疫力，只有在人體免疫功能降低時才能致病。曲霉可引起呼吸系統(tǒng)曲霉?。蝗硇郧共?；曲霉可產(chǎn)生毒素引起機(jī)體食物中毒；致癌作用。當(dāng)前87頁，總共117頁。當(dāng)前88頁，總共117頁。直接顯微鏡檢查取痰液等被檢材料涂于載玻片上，在鏡下可見分枝的菌絲、較粗的分生孢子頭，頂端膨大形成頂囊，頂囊上有小梗，小梗上有許多小分生孢子?？乖瓩z測、抗體檢測、藥敏試驗(yàn)、皮膚試驗(yàn)。分離培養(yǎng)與鑒定：標(biāo)本接種沙氏瓊脂，室溫培養(yǎng)后菌落形成快，呈毛狀，一般為黃綠色。將菌落涂片鏡檢可見特征性的分子孢子頭和足細(xì)胞。根據(jù)不同的曲霉的形態(tài)和菌落特征確定菌種。當(dāng)前89頁，總共117頁。曲霉結(jié)構(gòu)圖當(dāng)前90頁，總共117頁。當(dāng)前91頁，總共117頁。曲霉菌返回當(dāng)前92頁，總共117頁。煙曲霉菌落煙曲霉,光鏡X400當(dāng)前93頁，總共117頁。黃曲霉菌落黃曲霉,光鏡X200

當(dāng)前94頁，總共117頁。黑曲霉菌落黑曲霉,光鏡X200當(dāng)前95頁，總共117頁。土曲霉菌落

土曲霉，光鏡X200

當(dāng)前96頁，總共117頁。構(gòu)巢曲霉菌落

構(gòu)巢曲霉,光鏡X400當(dāng)前97頁，總共117頁。雜色曲霉菌落雜色曲霉,光鏡X400返回當(dāng)前98頁，總共117頁。第四節(jié)組織胞漿菌屬有兩個種：莢膜組織胞漿菌、組織孢漿菌的杜波變種。本菌傳染性極大，主要侵犯網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，有時也可由血行播散而侵犯全身各臟器。當(dāng)前99頁，總共117頁。MicrobiologyCharacteristics組織胞漿菌是一種雙相型真菌，在25℃培養(yǎng)時呈典型菌絲體，在37℃培養(yǎng)時為酵母型，位于細(xì)胞內(nèi)或外。

莢膜組織胞漿菌：孢子卵圓形，2-4μm，芽生孢子，一端較尖，芽頸較細(xì)，有莢膜。組織孢漿菌的杜波變種：孢子卵圓形，12-15μm，薄壁的芽生孢子當(dāng)前100頁，總共117頁。微生物檢驗(yàn)1.直接顯微鏡檢查應(yīng)涂片染色后檢查。痰液等標(biāo)本：涂片后先用甲醇固定10min，再用姬姆薩染色鏡檢。皮損、膿液等標(biāo)本：用20%KOH涂片后鏡檢2.抗原檢測、藥物敏感試驗(yàn)、抗體檢測3.分離培養(yǎng)與鑒定①標(biāo)本含抗生素的沙氏培養(yǎng)基25℃培養(yǎng)，生長緩慢，有時需4~6周才開始生長，逐漸形成白色至棕色絨毛狀菌落。

當(dāng)前101頁，總共117頁。②轉(zhuǎn)種于血瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)，很快形成酵母型菌落。③培養(yǎng)物顯微鏡特征：25℃沙氏培養(yǎng)，可以發(fā)現(xiàn)特征性的大分生孢子，但初代培養(yǎng)不典型，繼代培養(yǎng)可有典型大分生孢子。④鑒定：取可疑菌落涂片染色鏡檢，并作脲酶試驗(yàn)和明膠液化試驗(yàn)。當(dāng)前102頁，總共117頁。莢膜組織胞漿菌菌落為棉絮狀，鏡檢可見細(xì)長有隔菌絲，菌絲側(cè)面或孢子柄上長有特殊的圓形大分生孢子，厚壁，四周有棘突，排列如齒輪。血液標(biāo)本油鏡下鏡檢可見在中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞中有卵圓形或圓形的酵母細(xì)胞當(dāng)前103頁，總共117頁。第五節(jié)卡氏肺孢菌卡氏肺孢菌可寄生于多種動物，也可寄生于健康人體。廣泛分布于自然界，如土壤和水等?？ㄊ戏捂呔〉膫鞑ネ緩街饕强諝鈧鞑ィ诮】等梭w內(nèi)，多為無癥狀的隱性感染。當(dāng)宿主免疫力下降，如長期使用免疫抑制劑、器官移植、腫瘤、艾滋病等，潛伏的卡氏肺孢菌在病人肺內(nèi)大量繁殖擴(kuò)散，使肺泡上皮細(xì)胞受損，導(dǎo)致間質(zhì)性漿細(xì)胞肺炎，又稱卡氏肺孢菌性肺炎（PCP）。當(dāng)前104頁，總共117頁。直接顯微鏡檢查從病人痰液、支氣管肺泡灌洗液或肺活檢組織中檢查PC是確診本病的重要依據(jù)。常用的染色方法有姬姆薩染色、果氏環(huán)六亞甲基四胺銀染色（GMS）和亞甲胺藍(lán)染色。可以檢出包囊和滋養(yǎng)體兩種形態(tài)?？乖瓩z測，核酸檢測，抗體檢測等。當(dāng)前105頁，總共117頁。毛霉目真菌

毛霉目真菌屬于接合菌門、接合菌綱，有7個科，主要是毛霉科。本病是一種發(fā)病急，進(jìn)展快、病死率極高的系統(tǒng)性條件致病性真菌感染。當(dāng)前106頁，總共117頁。毛霉目真