中藥飲片及檢驗知識培訓(xùn)課件

中藥飲片鑒別及檢驗相關(guān)

知識培訓(xùn)肇慶市食品藥品檢驗所2012.04《中華人民共和國藥品管理法》第二章第十條第二款規(guī)定“中藥飲片必須按照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)炮制；國家藥品標(biāo)準(zhǔn)沒有規(guī)定的，必須按照省、自治區(qū)、直轄市人民政府藥品監(jiān)督管理部門制定的炮制規(guī)范炮制。省、自治區(qū)、直轄市人民政府藥品監(jiān)督管理部門制定的炮制規(guī)范應(yīng)當(dāng)報國務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門備案?！敝兴庯嬈侵嗅t(yī)臨床方劑的基本組成部分，也是中成藥的基本原料，其質(zhì)量的優(yōu)劣將直接影響到中醫(yī)藥臨床療效的體現(xiàn)，直接關(guān)系到人們用藥的安全、有效。但是，隨著中藥飲片的市場需求量不斷增長，及部分外來中藥飲片的沖擊，致使出現(xiàn)了大量的不按規(guī)定炮制方法炮制的中藥飲片流入市場，從而導(dǎo)致了中藥飲片的整體質(zhì)量有所下降。為進(jìn)一步提升從藥人員業(yè)務(wù)能力，進(jìn)一步加大對藥品生產(chǎn)、經(jīng)營、使用的中藥飲片質(zhì)量監(jiān)督力度，提高真?zhèn)舞b別能力，有效打擊制售假劣中藥飲片違法違規(guī)行為，確保轄區(qū)群眾用藥安全，市局組織人員在藥品生產(chǎn)企業(yè)舉行涉藥人員中藥飲片鑒別及檢驗相關(guān)知識培訓(xùn)。

近年來，中藥材抽驗不合格率居高不下，在這當(dāng)中有大部分是一些不法分子故意造假（重金屬超標(biāo)的蟲草、模具壓制的人參、土豆染色做成的天麻等），售假。有的則是中藥材保管發(fā)生變質(zhì)。中藥材的鑒別不具有一定中藥鑒別常識是很難鑒別真?zhèn)蔚摹０才胚@次培訓(xùn)的目的，為了方便從藥人員能夠?qū)χ兴幉倪M(jìn)行簡單的快速鑒別，根據(jù)中藥的某些成分的特性，快速鑒別一些中藥。

2、植物組織的類型２.１分生組織：頂端分生組織、側(cè)生分生組織、居間分生組織位于植物體生長的部位，由于分生組織細(xì)胞不斷分裂、分化，使植物體得以生長２.２薄壁組織：基本薄壁組織、同化薄壁組織、貯薄壁組織藏、吸收薄壁組織、通氣薄壁組織在植物體內(nèi)擔(dān)負(fù)著同化、貯藏、吸收、通氣等營養(yǎng)功能，又稱營養(yǎng)組織２.３保護(hù)組織：表皮(毛茸（腺毛非腺毛）、氣孔（平軸式直軸式不等式不定式環(huán)式）)周皮（由木栓層、木栓形成層和栓內(nèi)層三種不同的組織的復(fù)合體）保護(hù)著植物的內(nèi)部組織，控制和進(jìn)行氣體交換，防止水分的過度散失，病蟲的侵害以及機(jī)械損傷等。２.４機(jī)械組織：厚角組織厚壁組織：纖維、石細(xì)胞２.５輸導(dǎo)組織：管胞與導(dǎo)管；篩管、伴胞與篩胞２.６分泌組織：外部分泌組織腺毛蜜腺內(nèi)部分泌組織:分泌細(xì)胞分泌腔（分泌囊）分泌道和乳汁管3、植物細(xì)胞的后含物３.１淀粉粒三種類型單粒淀粉復(fù)粒淀粉及半復(fù)粒淀粉３.２菊糖：多含在菊科和桔?？浦参锏募?xì)胞中，山茱萸果皮中亦有。能溶于水，不溶于乙醇?？蓪⒕仗遣牧辖胍掖贾兄破?，置鏡下觀察看見球狀、半球狀或扇形的菊糖結(jié)晶。３.３蛋白質(zhì)以糊粉粒狀態(tài)存于細(xì)胞的任何部分，糊粉粒和淀粉粒常在同一細(xì)胞中互相混雜。３.４脂肪和脂肪油：它是由脂肪酸和甘油結(jié)合而成的脂。在常溫下呈固態(tài)或半固態(tài)稱為脂。如柯柯豆脂；呈液體的稱為油，如大豆油、芝麻油、花生油等。存在于植物種子里，可達(dá)種子干重的45%-60%；脂肪和脂肪油加蘇丹Ⅲ試劑顯橘紅色、紅色或紫紅色；加紫草試液顯紫紅色；加四氧化鋨顯黑色。４、晶體：草酸鈣結(jié)晶和碳酸鈣結(jié)晶４.１草酸鈣結(jié)晶：４.１.１單晶又稱方晶或塊晶豆科植物（甘草、苦參、葛根．紅芪、合歡花等）、蕓香科（黃柏）中常見４.１.２針晶一般存在于含粘液的細(xì)胞中如薯蕷科、天南星科半夏白附子蘭科白及石斛天麻百合科知母麥冬玉竹４.１.３簇晶蓼科（大黃、何首烏、拳參）——棱角短鈍；五加科（人參、竹節(jié)參、三七）——棱角堅；毛茛科（白芍、赤芍、牡丹皮）、桑科桑葉——簇晶排行４.１.４砂晶茄科（顛茄、地骨皮）莧科（牛膝）４.１.５柱晶鳶尾科（射干）４.２碳酸鈣結(jié)晶多存在于植物葉的表層細(xì)胞中二、中藥鑒定學(xué)知識1、中藥的加工及貯藏１.１常用的加工方法：揀洗切片蒸煮燙發(fā)汗熏硫（山藥、白芷、干燥前用硫磺熏制，防止霉?fàn)€）干燥１.２貯藏保管中發(fā)生的變質(zhì)現(xiàn)象１.２.１蟲蛀：果實種子類，花、葉類及含糖類易蟲蛀。一般含脂肪油（苦杏仁桃仁等)淀粉（白芷山藥）或蛋白質(zhì)（蘄蛇等）易蟲蛀，而含辛辣成分的藥材，一般不易蟲蛀如蓽茇、胡椒、花椒等。通常溫度在16-35℃、濕度在60%以上、藥材含水量在11%以下是蟲害生長的有力條件。１.２.２生霉：大氣中從有多量霉菌孢子，如散落在藥材表面。在適當(dāng)溫度和濕度下，溶蝕藥材內(nèi)部組織，促使腐敗、變質(zhì)、失去藥性。１.２.３變色各種藥材都有其固有的顏色，貯藏不當(dāng)顏色改變，藥材也可能變質(zhì)。含鞣質(zhì)類藥材受到氧化，聚合等作用，產(chǎn)生大分子的有色化合物，使原來色澤加深。１.２.４走油：藥材受潮、變色、變質(zhì)后，表面呈現(xiàn)油樣物質(zhì)的變化；一般含脂肪油、揮發(fā)油或糖類成分的藥材，如苦杏仁、桃仁、當(dāng)歸、肉桂、麥冬、枸杞子等會產(chǎn)生“走油”現(xiàn)象。１.２.５其它。有些藥材在貯藏過程中所含有效成分會自然分解或起化學(xué)變化而降低療效，如綿馬貫眾，不能久貯。樟腦冰片易揮發(fā)；芒硝(Na2SO4·10H2O)膽礬(CuSO4·5H2O)容易風(fēng)化，應(yīng)密閉保存。1.3貯藏及保管：常溫0℃－30℃陰涼庫不超過20℃冷庫2℃－10℃（相對濕度45％－75％）１.３.１保管制度及保管經(jīng)驗應(yīng)有嚴(yán)格的日常保管制度，保持經(jīng)常性檢查，保證庫房干燥、清潔、通風(fēng)。注意外界溫濕度變化，及時采取有效措施，調(diào)節(jié)室內(nèi)溫濕度。藥材入庫前應(yīng)詳細(xì)檢查有無蟲蛀，生霉現(xiàn)象，要經(jīng)多名經(jīng)驗豐富的專業(yè)人員過四關(guān)：一看性狀，二聞氣味，三品嘗，四查藥材產(chǎn)地、藥用部位是否符合（也稱“放心”程序）。凡有問題的包件都應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，只有合格的包件才能入庫貯藏。貯藏的方法可根據(jù)藥材的特性分類保管。容易吸濕霉變的中藥特別注意通風(fēng)干燥，必要時可翻曬或烘烤；含淀粉、蛋白質(zhì)、糖類等營養(yǎng)成分易蟲蛀的中藥應(yīng)貯藏于容器中，放置通風(fēng)干燥處，并經(jīng)常檢查。（c）選擇密閉容器，防止氧化變色。中藥材的天然色澤是質(zhì)量好壞的標(biāo)志之一，色澤的變異，說明藥物內(nèi)在質(zhì)量已發(fā)生了變化。如含有苷類、羥基蒽醌類及鞣質(zhì)等成分的藥物，由于貯藏過久或經(jīng)常翻曬，其中所含有的酶在適宜溫度下，會發(fā)生氧化還原反應(yīng)，使藥材的色澤發(fā)生變化。含有蛋白質(zhì)的藥物，氨基酸與還原糖作用后也能引起中藥變色。容易變色的藥材如花類、全草、葉類等應(yīng)貯于避光密閉容器中。如蘇合香、藏紅花等必須保持濕潤狀，否則易變色。加酒、醋炮制的飲片，如大黃、黃芩、延胡素等，宜置密閉容器內(nèi)，以防酒、醋味揮散而失效。鹽制品易受潮或高溫后析出鹽分，故宜放陰涼干燥處，切忌用金屬容器存放。（d）避免高溫，克服走油現(xiàn)象。某些中藥飲片由于受潮或在高溫下表面溢出油狀物，俗稱走油。如含脂肪的杏仁、桃仁、郁杏仁、柏子仁等，含揮發(fā)油的當(dāng)歸、肉桂等，含有黏液性糖質(zhì)的麥冬、天冬、太子參、枸杞子等也容易走油。干燥時不宜用高溫烘烤或暴曬，宜貯于陰涼干燥處。又如種子、果實類含淀粉、脂肪油較多的薏苡仁、麥芽、萊菔子、蘇子等，炮制后可待蒸氣散盡趁熱裝入容器內(nèi)貯存；含油較多的藥物宜涼透干燥后，置容器內(nèi)蓋緊，放于陰涼干燥處。

2.中藥飲片性狀鑒定法２.１形狀指干燥藥材的形態(tài)。主要有片、絲、塊、段、粒等性狀，如觀察皺縮的全草、葉或花類，可先浸濕使軟化，展平。２.２大小指藥材的長短、粗細(xì)和厚度，測量多用毫米刻度尺。如澤瀉片比黃芪片大，當(dāng)歸頭片比當(dāng)歸片大；甘草的斜片比直片大。對細(xì)小的種子，可放在毫米方格線的紙上，每１０粒為一組測量平均值。２.３色澤應(yīng)在日光燈下或常光下觀察。如用復(fù)色，以后一種色調(diào)為主。藥材的色澤不但幫助鑒別真?zhèn)?，其色澤深淺，有時也反映其質(zhì)量優(yōu)略，如丹參色紅；黃柏色黃；玄參色黑。紫草深紫色者，紫草素含量較高。桔梗皮部白色，木部黃色，習(xí)稱“金井玉欄”等。２.４表面特征：樣品不作處理，直接觀察或借助于放大鏡觀察。觀察表面特征時，特別是附屬物，要注意其顏色、性狀、紋理、分布等特點。如片面上何首烏的“云錦花紋”、銀柴胡的“珍珠盤”、粉防己的“車輪紋”、黃芪的“菊花心”；段上的縱紋、縱溝；絲、塊上的毛、刺等各種附生物的形態(tài)、分布等。必要時可對光透視。２.５質(zhì)地指藥材的軟硬、堅韌、疏松、致密、黏性或粉性等。軟硬堅韌多憑手感而定，疏松致密黏性粉性等全憑眼睛仔細(xì)觀察。如山藥片粉性足，郁金片堅硬，通草質(zhì)松軟，蜜炙飲片黏性大等。２.６斷面包括折斷時橫斷面的紋理特征。如杜仲折斷有橡膠絲（鹽炙后橡膠絲不明顯）；甘草易折斷，斷面纖維性等。２.７氣味；一般可直接嗅聞或口嘗。氣味較弱者可采用折斷或揉搓的方法，也有的需要熱水濕潤后才能聞到。２.８水試將藥材浸泡一定量水中，觀察形態(tài)變化。菟絲子的吐絲現(xiàn)象２.８.１觀察在水中的沉浮如：丁香沉于水中為佳；進(jìn)口沉香能沉于水或半浮半沉于水中，國產(chǎn)沉香大多不能沉于水中。２.８.２觀察顏色變化如：西紅花浸入水中，可見橙黃色成直線下降并逐漸擴(kuò)散，水被染成橙黃色，柱頭呈喇叭狀；熊膽粉末投入清水，即在水面旋轉(zhuǎn)，并呈現(xiàn)黃線下沉而不擴(kuò)散；梔子水浸液為鮮黃色；玄參水浸液為淡黑色；秦皮水浸液日光下顯碧藍(lán)色熒光。２.８.３觀察有無粘性如：海藻水浸后藻體表面粘滑；葶藶子、車前子加水浸泡種子表面粘滑，水煮后溶液有粘性。２.８.４觀察膨脹情況如：胖大海水浸泡迅速膨大成海綿狀，達(dá)原體積4倍，假胖大海水浸泡膨脹較慢，僅能達(dá)原體積的2倍；蛤蟆油水浸可膨脹至１０~１５倍。２.８.５觀察其他特殊變化如：菟絲子水浸加溫后便逐漸出現(xiàn)吐絲現(xiàn)象（種皮開裂可露出黃白色卷旋狀的胚，形如吐絲。）；水牛角熱水浸泡有腥臭氣；蟾酥遇水即泛出白色乳狀液等。3其他鑒別方法3.1顯微鑒別指用顯微鏡來觀察飲片的組織結(jié)構(gòu)和粉末中的組織形態(tài)及內(nèi)含物特征等等，從微觀角度鑒別飲片的真?zhèn)蝺?yōu)劣。3.2理化鑒別指用物理、化學(xué)或儀器分析方法，對飲片中所含成分進(jìn)行定性。主要是通過顯色、沉淀、升華物等飲片成分的特殊反應(yīng)，從內(nèi)在質(zhì)量方面鑒別飲片的真?zhèn)蝺?yōu)劣。3.3含量測定指對飲片中有效成分或主要成分的含量測定，這是鑒別飲片和評價飲片質(zhì)量的最可靠、最準(zhǔn)確的方法。對藥效成分明確的飲片，規(guī)定其含量指標(biāo)，并進(jìn)行檢測非常必要。三、中藥飲片商品知識：中藥材品種據(jù)全國中藥資源普查記載已達(dá)12807種，其中植物藥11146種，動物藥1581種，礦物藥80種；2010版藥典收載個品種《廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》第一版、第二版收載個品種，《廣東省中藥飲片炮制規(guī)范》第一冊收載個飲片品種。1、中藥飲片的概念所謂中藥飲片，是指在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，可直接用于調(diào)配或制劑的中藥材及中藥材的加工炮制品。這個概念表明，中藥材、中藥飲片并沒有絕對的界限，中藥飲片包括了部分經(jīng)產(chǎn)地加工的中藥切片（包括切段、塊、瓣)，原形藥材飲片以及經(jīng)過切制（在產(chǎn)地加工的基礎(chǔ)上)、炮炙的飲片。對于前兩類，管理上應(yīng)視為中藥材，只是根據(jù)中醫(yī)藥理論在配方、制劑時作飲片理解。而管理意義上的飲片概念應(yīng)理解為:“根據(jù)調(diào)配或制劑的需要，對經(jīng)產(chǎn)地加工的凈藥材進(jìn)一步切制、炮炙而成的成品稱為中藥飲片”。目前，中藥飲片的概念大致有三種觀點：（１）根據(jù)“飲片”一詞的出處，即清代吳儀洛在《本草從新》中“藥肆中俱切為飲片”的說法，很多人認(rèn)為“凡動過刀的即為飲片”；（２）某些中藥材專業(yè)市場和城鄉(xiāng)集貿(mào)市場藥材經(jīng)營戶認(rèn)為只有經(jīng)過復(fù)雜加工炮炙工序的成品才是飲片，僅經(jīng)凈制、切制方法加工而成的應(yīng)稱為“切片”，而不應(yīng)按“飲片”管理；三、根據(jù)《藥典》定義，“飲片是指經(jīng)過加工炮制的中藥材，可直接用于調(diào)配或制劑”。中藥飲片是中藥材經(jīng)過按中醫(yī)藥理論、中藥炮制方法，經(jīng)過加工炮制后的，可直接用于中醫(yī)臨床的中藥。

2、講究使用道地藥材：道地藥材是藥材中精華，它是指那些歷史悠久，品種良好生產(chǎn)及加工技術(shù)成熟，質(zhì)量優(yōu)良的著名藥材。產(chǎn)于河南懷慶府的“四大懷藥”懷地黃懷牛膝懷山藥懷菊花產(chǎn)于浙江的“浙江八味”浙貝母浙玄參杭菊花杭白芍杭麥冬山茱萸延胡索白術(shù)產(chǎn)于東北的“三寶”人參遼細(xì)辛北五味子產(chǎn)于云南的“云藥”云木香云茯苓產(chǎn)于貴州的“貴藥”貴天麻朱砂產(chǎn)于四川的“川藥”川烏川厚樸川黃柏產(chǎn)于廣東廣西及海南的“廣藥”廣豆根陽春砂產(chǎn)于陜西甘肅青海新疆及內(nèi)蒙西部的“西藥”西大黃岷當(dāng)歸藏蟲草產(chǎn)于湖北湖南江蘇安徽江西福建臺灣的“南藥”江枳殼宣木瓜建澤瀉產(chǎn)于河北山東山西內(nèi)蒙的道地藥材“北藥”潞黨參北柴胡多倫赤勺麻醉中藥有罌粟殼；使用時必須按照國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定進(jìn)行特殊管理。5、了解進(jìn)口藥材品種的主產(chǎn)地區(qū)西洋參、鹿茸、“乳香、沒藥及血竭”是我國主要的進(jìn)口藥材。經(jīng)云南瑞麗口岸進(jìn)入我國的緬產(chǎn)藥材主要有：補(bǔ)骨脂、檳榔、大腹皮、酸棗仁、殼綠砂、綠凈砂、蔓荊子、黃草、郁金、木蝴蝶、姜黃、干姜、白扁豆、兒茶等30余種，我國需求量較大的品種有十幾個。

薄層鑒別相關(guān)知識一、概述薄層色譜法，系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。1.儀器與材料(1)玻板除另有規(guī)定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格,要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。(2)固定相或載體最常用的有硅膠G、硅膠GF[254]、硅膠H、硅膠HF[254],其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F[254]等。其顆粒大小,一般要求直徑為10～40μm。薄層涂布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時)，混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5～0.7％)適量調(diào)成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。(3)涂布器應(yīng)能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。(4)點樣器。(5)展開室應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸，并有嚴(yán)密的蓋子，除另有規(guī)定外，底部應(yīng)平整光滑，應(yīng)便于觀察。2.操作方法(1)薄層板制備除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后，倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.2～0.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺上于室溫下晾干，后在110℃烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度（可通過透射光和反射光檢視）。(2)點樣除另有規(guī)定外，用點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊2.0cm，樣點直徑應(yīng)小于或等于3mm,點間距離可視斑點擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。(3)展開展開室如需預(yù)先用展開劑飽和，可在室中加入足夠量的展開劑，并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封室頂?shù)纳w，使系統(tǒng)平衡。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中）,密封室蓋,待展開至規(guī)定距離(一般為10～15cm),取出薄層板，晾干，按各品種項下的規(guī)定檢測。(4)如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出，或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量，則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法，除另有規(guī)定外，可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點及使用說明，結(jié)合具體情況，選擇吸收法或熒光法，用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多，故應(yīng)在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下，將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描，進(jìn)行比較并計算定量，以減少誤差。各種供試品，只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜，才能獲得滿意的結(jié)果。2.薄層板2.1手工自制玻璃板的要求:用于制備薄層板的玻璃板要求表面光潔、平整，最好使用厚薄1~2mm的優(yōu)質(zhì)平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄層板，玻璃板需洗凈至不掛水，晾干，貯存于干燥潔凈處備用。玻璃板反復(fù)使用時，應(yīng)注意經(jīng)常用洗液及堿液清洗，保持玻璃板面的光潔是保證薄層板質(zhì)量的最基本要求2.2制作方法:除另有規(guī)定外，將1份吸附劑加適量的水（如1份硅膠G一般加3份水），在研缽中用研缽沿一個方向小心研磨至成均勻的有適當(dāng)粘稠度的膠漿,立即傾入涂布器中,均勻地向前推進(jìn)涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的規(guī)定操作涂布;涂布好的薄層板于室溫下在水平臺上晾干,再在規(guī)定的溫度(一般為105℃~110℃)下烘約30分鐘活化,貯于干燥器中備用。薄層板的厚度一般為0.25~0.5mm.。2.2.1鋪板

鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點樣易過載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。2.2.2點樣

盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。2.2.3展開劑配制

選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑。混合不均勻和沒有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達(dá)到實驗室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，移液管應(yīng)符合計量認(rèn)證要求，盡管多數(shù)時候這不是必須的。2.2.4展開系統(tǒng)的飽和

一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動作應(yīng)該盡量輕、快5.參數(shù)5.1溫度

薄層色譜分析一般在室溫中進(jìn)行。在這過程，溫度在20-25oC算不上是臨界值。在這過程中無短期的溫度波動才是更為重要（避免抽風(fēng)）。展開室應(yīng)放置在無直射陽光和不通風(fēng)處。溫度波動對層析結(jié)果不利，故將展開室放在靠近窗口或熱源處是欠妥的。5.2空氣濕度

空氣濕度極高或極低主要影響有非極性溶劑體系的無機(jī)涂層。相對空氣濕度高于70-80%會影響薄層鈍化，使Rf值增加。樣品點樣后，TLC薄層可置放在適當(dāng)?shù)牧蛩岷退幕旌衔锏纳厦娌簧儆?0分鐘，調(diào)整至指定的相對濕度。有關(guān)這方面的更多資料可從HPTLCVario系統(tǒng)的操作手冊中獲得。

另一方面，在樣品點樣前，TLC/HPTLC板可在105oC再活化30分鐘進(jìn)行干燥。然后薄層必須用一塊玻璃板保護(hù)起來，只有起點區(qū)露出以便于樣品點樣。

若空氣太干燥，可在干燥器中將TLC/HPTLC薄層置于水的上方以達(dá)到所要求的狀況。

確定合適的層析條件的有效方法（用規(guī)定的濕度，溶劑蒸汽或溶劑調(diào)整使薄層達(dá)到要求的狀況）是使用HPTLCVario體系。

控制相對濕度用的硫酸溶液下表：

相對濕度所需硫酸濃度（V/V）

硫酸（ml）+水（ml）

32%47%42%58%65%72%88%68.010050.010057.010039.510034.010027.510010.81006．層析后衍生作用

若層析板分離的物質(zhì)肉眼看不見又不能被紫外光活化，需加試劑方能顯色或發(fā)射熒光者，則需使用適當(dāng)?shù)脑噭┙n或均勻噴灑于薄層板面上，直接觀察或加熱顯色后觀察。加熱顯色者須注意加熱時間和溫度，尤其含羧甲基纖維素鈉的薄層板，加熱溫度過高或時間過長，容易引起板面的焦化，如用硫酸等顯色劑更易造成板面的炭化而影響顯色效果。有的成分加試劑后，如揮發(fā)油成分經(jīng)香草醛硫酸顯色，加熱溫度和時間長短不同或放置時間不同均可能使斑點的顯色有所改變。

有的品種可熏以試劑或試液的蒸氣（如碘蒸氣、氨蒸氣）顯色。6.1噴霧試劑溶液以氣溶膠的形式均勻地噴灑在薄層上。電動的TLC噴霧器用最少的試劑溶液產(chǎn)生幾近理想的氣溶膠。6.2浸漬使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備如色譜浸漬設(shè)備III（ChromotogramImmersionDeviceIII）,TLC/HPTLC板浸漬具有重現(xiàn)的結(jié)果。通過設(shè)定垂直方向速度（進(jìn)入，抽出）和規(guī)定停留時間，浸漬條件可被精確地標(biāo)準(zhǔn)化。7．檢測7.1定性分析（同一性試驗）在相同的狀態(tài)下（相同類型的TLC/HPTLC板、相同的溶劑體系組成、相同的組份點樣體積和其它TLC設(shè)備系統(tǒng)），樣品成份的Rf值、顏色、與專用的或特殊基因衍生化試劑的反應(yīng)和參考物或標(biāo)準(zhǔn)物在同一TLC/HPTLC板同時層析所得的結(jié)果相符時，未知物就可認(rèn)為是存在而被鑒別出來。分析的結(jié)果可以采用照片，照片復(fù)制品，影像記錄（如：CAMAG薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)）或TLC掃描儀方法記錄下來。

為增加測試物與參照物同一性的可信度，采用TLC掃描儀實時記錄其紫外光和可見光圖譜并進(jìn)行比較。7.2定量分析

（儀器：CAMAGscanner-3；具體操作請參考操作手冊或教學(xué)軟件）定量分析采用光密度掃描法來評價。用winCATS軟件控制薄層色譜掃描儀以及進(jìn)行掃描結(jié)果的數(shù)據(jù)處理，計算出各成分的峰高和峰面積及其平均值和離散系數(shù)（CV）。通過單水平或多水平校準(zhǔn)計算出結(jié)果。最后以報告形式將所有掃描參數(shù)、原始資料及圖像結(jié)果保存及打印。

掃描狹縫寬度根據(jù)被測成份斑點的大小來調(diào)整（1）點狀點樣得到TLC中各成份，掃描其全寬度；（2）條帶狀點樣，通?？梢話呙杵渖V帶同心部分的50-70%。

物質(zhì)的掃描波長可以通過光譜掃描來決定。

TLC/HPTLC板空白部位的漫射反射光用光電倍增器（PM）來收集并定其值為10%。掃描吸光物質(zhì)時，其吸收隨著物質(zhì)的量而增加。

對于具有熒光或可轉(zhuǎn)變成具旋光性衍生物的物質(zhì)的測定。光源一般使用發(fā)射光譜在254-578nm之間的高壓汞蒸汽燈，在254，302，313，366，405，436，546和578nm處有特別高強(qiáng)度的譜線。吸收了選擇性激發(fā)波長后TLC中各成份發(fā)射出的較長波長熒光由光倍增器記錄下來，使用銳截止濾波器或窄帶濾波器將會阻止TLC/HPTLC板反射的激發(fā)波長光到達(dá)光電倍增器。和吸附測定一樣，熒光強(qiáng)度作為板上定位的函數(shù)作圖得模擬曲線（熒光定位曲線）。TLC掃描儀的測定原理在有關(guān)的設(shè)備文獻(xiàn)中有報導(dǎo)。

熒光測定比吸收測定優(yōu)越在于如下幾點：（1）檢出極限低1-3個數(shù)量級；（2）在較寬的濃度范圍內(nèi)校準(zhǔn)曲線呈線性；（3）選擇性較高。8.影響薄層色譜分析的因素（１）樣品的預(yù)處理及供試液的制備制備樣品供試液所用的溶劑溶解度不宜太大，粘度不宜太高，沸點適中。如一捻金中人參二醇及人參三醇的鑒別，若用稀酸水解后直接用氯仿萃取，點樣層析，色譜因大黃成分干擾，斑點很難辨認(rèn)，經(jīng)堿性氧化鋁小住吸附凈化后，除去了大部分干擾，結(jié)果色譜清晰，人參二醇及人參三醇很容易辯認(rèn)。（２）薄層色譜的點樣技術(shù)點樣是薄層色譜分析非常關(guān)鍵的步驟。它既關(guān)系到能否得到可以重新的有良好分離度的薄層色譜，也關(guān)系到定量測定結(jié)果的準(zhǔn)確。（３）吸附劑的活性與相對濕度對薄層色譜的影響（４）溶劑蒸氣在薄層色譜中的作用應(yīng)注意：預(yù)平衡、預(yù)飽和、完全飽和三者的區(qū)別只需要展開劑的蒸氣在展開箱中預(yù)平衡一定時間，稱預(yù)平衡預(yù)吸附：薄層板的干燥板面對展開箱空間氣體分子的任何程度的吸附稱預(yù)飽和吸附飽和：薄層板的干燥板面與展開箱的飽和氣體空間達(dá)到平衡狀態(tài)稱完全飽和（５）薄層色譜的優(yōu)化及溶劑系統(tǒng)（６）溫度對薄層色譜的影響（７）影響薄層色譜的其它因素操作技巧和熟煉程度以及所有的器材、溶劑、試劑等的質(zhì)量。高效液相相關(guān)知識一、HPLC應(yīng)遵循幾條原則1、一次性原則：當(dāng)系統(tǒng)出現(xiàn)了故障，可試探地改變某些狀態(tài)，一次改變一個參數(shù)。例如限制峰拖尾問題，可依次改變流動相換保護(hù)柱換分析柱。2、二次比較原則：動手之前已經(jīng)找到解決方法。例如在進(jìn)樣過程中發(fā)現(xiàn)內(nèi)標(biāo)物的峰度值低，可重新進(jìn)樣，如果是偶然變低，是否定量管里進(jìn)了氣泡。此規(guī)則可用于考察系統(tǒng)改變后的情況。更換了流動相后在正式進(jìn)樣前可測定兩次標(biāo)準(zhǔn)品以檢查保留時間的穩(wěn)定情況和色譜峰的穩(wěn)定性。3、取代規(guī)則：用好的部件換下可疑的部件，是查找故障的最好方法。4、換回規(guī)則：此規(guī)則和取代規(guī)則一起運用，好部件取代可疑部件后情況并未得到改善，應(yīng)重新?lián)Q上原部件。這條規(guī)則僅適合單一的故障。換回規(guī)則不適應(yīng)于以下情況：（1）取下是新部件易損壞（如泵密封圈）；（2）部件價格低（如柱內(nèi)襯過濾片）（3）重新裝上原部件要冒損壞的風(fēng)險；（4）定期更換的部件。5參考條件規(guī)則：通常由兩種參考條件（1）標(biāo)準(zhǔn)參考條件（2）試驗參考條件。標(biāo)準(zhǔn)參考條件也叫標(biāo)準(zhǔn)試驗條件。是從一個系統(tǒng)到另一個系統(tǒng)易于驗證的條件。試驗參考條件適用于檢查正常系統(tǒng)每天的工作情況。每天可以打印兩張校正用色譜圖作對照，檢查保留時間，峰寬、系統(tǒng)壓力等方面的變化。發(fā)現(xiàn)峰的斜率、色譜柱塔板數(shù)和其他參考值與原來色譜圖相比有了變換，系統(tǒng)運行中可能發(fā)生了問題。6記錄規(guī)則：在每次維護(hù)和故障排除后都做記錄。每臺儀器都應(yīng)備有維護(hù)紀(jì)錄本，內(nèi)容包括日期故障部位現(xiàn)象產(chǎn)生的原因，解決的方法和結(jié)果等。試過的或換下的部件都要貼上標(biāo)志。7預(yù)測原則平時多保養(yǎng)，系統(tǒng)會減少故障，消除連鎖性地?fù)p壞。例如：因平時不注意保養(yǎng)，泵的密封圈壞了，造成流動相滲漏，會腐蝕泵和其它部件。每天開始工作或結(jié)束工作時發(fā)現(xiàn)燈壽命引起基線漂移時換燈，以免停機(jī)造成損失。8緩沖液規(guī)則：停機(jī)時一定要洗凈系統(tǒng)中的緩沖物。系統(tǒng)中緩沖液的殘留會造成腐蝕，磨損和阻塞。理想的沖洗液是不含緩沖物的相同組成的流動相。不要讓純水貯藏于系統(tǒng)中，以防生長細(xì)菌。沖洗程序：純水沖洗30－60（ml\min）再用甲醇沖洗30分鐘后關(guān)機(jī)。千萬不能一開機(jī)就用有機(jī)溶劑沖洗。否則無機(jī)鹽就會沉淀在系統(tǒng)中，造成不良后果。二、HPLC故障的預(yù)防1、可以定期更換密封墊圈（預(yù)防性的保養(yǎng)）；系統(tǒng)常因為保護(hù)柱問題而產(chǎn)生壓力升高，一旦發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)壓力升高，就可以換上新的保護(hù)柱（預(yù)防故障發(fā)生）。2、記錄的建立：（1）系統(tǒng)使用記錄（2）色譜柱記錄（3）個人實驗記錄或測定樣品記錄。雖然我們不可能完全預(yù)防故障的出現(xiàn)，但可以減少因此而造成的麻煩，每次實驗在系統(tǒng)記錄本上都要有儀器狀況與維護(hù)記錄。(1)系統(tǒng)使用情況：A．系統(tǒng)中各組件的商品牌號，型號，系列號，購進(jìn)日期，安裝日期，每個組件的許可證信息（自動進(jìn)樣器泵色譜柱檢測器數(shù)據(jù)處理裝置等）。B.依照表1－3的標(biāo)準(zhǔn)條件測量標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)色譜圖。要注意流動相流速壓力溫度檢測器的參數(shù)樣品量等。流動相極性大于固定相的極性的色譜（反相）流動相甲醇／水(70:30)色譜柱C18流速1ml／min檢測器UV254nm樣品苯酚苯乙酮硝基苯苯甲醚甲苯極性鍵合相流動相正己烷/異丙醇（75：25）色譜柱腈基流速1ml／min檢測器UV254nm樣品硝基苯卞醇2-4二硝基甲苯對硝基卞醇流動相極性小于固定相的極性的色譜（正相）流動相正己烷/二氯甲烷/異丙醇胺（95：4：1）色譜柱硅膠流速1ml／min檢測器UV254nm樣品2-苯-2-丙醇甲卞醇肉桂醇C、使用記錄：日期工作內(nèi)容開機(jī)時間樣品數(shù)儀器性能評價操作人員。D、維護(hù)紀(jì)錄：日期原因修理人員修理結(jié)果E、換色譜主：牌號種類尺寸系列號；與前一根柱子的標(biāo)準(zhǔn)參考色譜圖比較。F、換部件：日期原因型號系列號；做一次標(biāo)準(zhǔn)參考色譜圖比較。（2）色譜柱記錄A、種類牌號系列號啟用日期按照商家提供的標(biāo)準(zhǔn)參考條件測試記錄，注意樣品流動相流速壓力N值（色譜塔板數(shù)）t0(純流動相流過柱的