食品安全快速檢測技術(shù)

食品安全快速檢測技術(shù)第一頁，共二十七頁，2022年，8月28日基本概念樣品前處理=樣品制備樣本分析測定前的一系列準(zhǔn)備工作，包括：樣本的整理、清洗、勻化、縮分、粉碎、勻漿、消化、提取、凈化、濃縮、衍生化等第二頁，共二十七頁，2022年，8月28日一般方法提取：待測組分與樣品分離的過程靜置法、勻漿法、振蕩提取法、專用裝置提取法等凈化：待測組分與雜質(zhì)分離的過程固相萃取法、液液分配法、化學(xué)處理法、低溫冷凍凈化法等

濃縮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、氮?dú)獯蹈傻谌摚捕唔摚?022年，8月28日固相萃取和固相微萃取技術(shù)Solid

Phase

Extraction

SPE

AndSolid

phase

Micro-Extraction

SPMESPE是發(fā)展于上世紀(jì)70年代的一種樣品預(yù)處理技術(shù)，主要用于樣品的分離、凈化和濃縮一個(gè)液-固的物理萃取過程。在SPE過程中，固相對分析物的吸附力大于樣品母液，當(dāng)樣品通過SPE柱時(shí)，分析物被吸附在固體表面，其他組分則隨樣液通過柱子，最后用適當(dāng)?shù)娜軇⒎治鑫锩撓聛碓?003版的“食品衛(wèi)生檢測方法”標(biāo)準(zhǔn)系列中，有很多項(xiàng)目，尤其是農(nóng)藥項(xiàng)目的前處理普遍使用了固相萃取技術(shù)

經(jīng)典的真空固相萃取裝置第四頁，共二十七頁，2022年，8月28日SPE的分類及一般操作程序正相固相萃取所用的吸附劑都是極性的．取決于目標(biāo)化合物的極性官能團(tuán)與吸附劑表面的極性官能團(tuán)之間相互作用，其中包括了氫鍵，π—π鍵相互作用，偶極－偶極相互作用和偶極－誘導(dǎo)偶極相互作用以及其他的極性－極性作用。反相固相萃取所用的吸附劑和目標(biāo)化合物通常是非極性的或極性較弱的，主要是靠非極性－非極性相互作用，是范德華力或色散力。

離子交換固相萃取是靠目標(biāo)化合物與吸附劑之間的相互作用是靜電吸引力固相萃取的一般操作程序：活化吸附劑、上樣、洗滌和洗脫第五頁，共二十七頁，2022年，8月28日課后思考題請比較2003年前后農(nóng)殘檢測方法標(biāo)準(zhǔn)中的樣品預(yù)處理步驟，并談?wù)劜捎肧PE后，檢測時(shí)間可縮短至多少？（是指從樣品預(yù)處理到最后檢測結(jié)果出來）

第六頁，共二十七頁，2022年，8月28日SPE的操作第七頁，共二十七頁，2022年，8月28日SPE的操作第八頁，共二十七頁，2022年，8月28日試樣20g加入內(nèi)標(biāo)，劇烈搖均后放置10min萃取丙酮15ml液-液萃?。弘姶艛嚢?min+15min；靜置分層（時(shí)間視情況而定）水300mlNaCl3g正己烷3.5ml小心吸取獲得有機(jī)相40攝氏度，氮?dú)獯蹈梢宜嵋阴ト芙釭C/MS微量液-液萃取操作步驟第九頁，共二十七頁，2022年，8月28日SPME的發(fā)展歷史在SPE基礎(chǔ)上，迅速發(fā)展的新型的、環(huán)境友好的樣品前處理技術(shù)具有便于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、易于與色譜、電泳等高效分離檢測手段聯(lián)用等突出的優(yōu)點(diǎn)1989年，Pawliszyn提出1993年，商品化Fiber-SPME1993年，In-Tube-SPME-GC1996年，商品化Fiber-SPME-HPLC1997年，商品化Fiber-SPME-GC1997年，In-Tube-SPME-HPLC1999年，PatSandra提出SBSE技術(shù)2001年，一種新形式In-TubeSPME-GC第十頁，共二十七頁，2022年，8月28日SPME裝置裝置外型如一只微量進(jìn)樣器，由手柄（holder）和萃取頭或纖維頭（fiber）兩部分構(gòu)成，萃取頭是一根1㎝長，涂有吸附劑（萃取相）的熔融纖維，接在不銹鋼絲上，外套細(xì)不銹鋼管（保護(hù)纖維不被折斷），纖維頭在鋼管內(nèi)可伸縮或進(jìn)出，細(xì)不銹鋼管可穿透橡膠或塑料墊片進(jìn)行取樣或進(jìn)樣。手柄用于安裝或固定萃取頭，可永遠(yuǎn)使用第十一頁，共二十七頁，2022年，8月28日SPEM原理當(dāng)萃取達(dá)到平衡時(shí)，進(jìn)入萃取相的分析物的量為：N=KfsV1CoV2/KfsV1+V2其中，Co為萃取前分析物在樣品中的濃度；Kfs為分析物在萃取相和試樣間的分配系數(shù)；V1

為萃取相的體積；V2為樣品的體積萃取原理：相似相溶機(jī)理FiberSPME第十二頁，共二十七頁，2022年，8月28日Fiber-SPME-HPLC第十三頁，共二十七頁，2022年，8月28日課后思考題SPE、SPME與液-液萃取相比，有何優(yōu)點(diǎn)？在應(yīng)用上，有何局限第十四頁，共二十七頁，2022年，8月28日

固體萃取和液－液萃取相比，其長處在于方便和消耗試劑少，短處在于批次間的重復(fù)性難以保證固相萃取對液體樣品有其額外的苛刻要求

SPME的一次提取水平大大低于常用的液-液萃取方法，但絕對進(jìn)樣量一般大于液-液萃取方法，靈敏度很高，也易于掌握，在一個(gè)簡單過程中同時(shí)完成了取樣、萃取和富集SPME商品化纖維種類較少，且容易破碎優(yōu)缺點(diǎn)第十五頁，共二十七頁，2022年，8月28日第十六頁，共二十七頁，2022年，8月28日微波溶樣技術(shù)大多數(shù)樣品是用液體狀態(tài)進(jìn)行定量分析的，因此,溶樣技術(shù)的改革仍是分析化學(xué)中的重大研究課題微波溶樣技術(shù)是使用微波加速酸消化的一種技術(shù)，速度是常規(guī)消化法的10-100倍特點(diǎn)：溶樣速度快溶樣效果好、重現(xiàn)性好操作簡便、安全、易于控制和自動(dòng)化不易污染或損失

第十七頁，共二十七頁，2022年，8月28日微波溶樣技術(shù)分子內(nèi)加熱原理，離子傳導(dǎo)和偶極旋轉(zhuǎn)機(jī)理同時(shí)起作用樣品消化過程的運(yùn)行參數(shù)選擇非常重要樣品用量、酸用量、消化的溫度、壓力及微波的輸出功率等因素起始溫度升溫時(shí)間保溫時(shí)間及磁控管的最大輸出功率選擇應(yīng)根據(jù)樣品與酸液之間反應(yīng)的劇烈程度而定第十八頁，共二十七頁，2022年，8月28日思考題微波溶樣技術(shù)可用于哪些檢測項(xiàng)目上？第十九頁，共二十七頁，2022年，8月28日其他技術(shù)使用含有干粉培養(yǎng)基和冷水可溶性凝膠的細(xì)菌培養(yǎng)平板進(jìn)行微生物測定——減少了培養(yǎng)基配置的時(shí)間涂抹棒快速取樣技術(shù)疏水性柵格濾膜過濾樣品——微生物檢測時(shí)，方便計(jì)數(shù)采用分子印跡或親和層析——快速捕捉目標(biāo)物第二十頁，共二十七頁，2022年，8月28日圖示【大腸菌群】123456平面凹面第二十一頁，共二十七頁，2022年，8月28日大腸菌群測試片是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng)，含有VRB培養(yǎng)基，冷水可溶性凝膠和TTC指示劑，可增強(qiáng)菌落計(jì)數(shù)效果。表面覆蓋的膠膜，可截留發(fā)酵乳糖的大腸菌群產(chǎn)生的氣體。培養(yǎng)結(jié)束后計(jì)數(shù)紅點(diǎn)周圍有氣泡的菌落為大腸菌群數(shù)。培養(yǎng)24h2h后應(yīng)立即計(jì)數(shù)，可目測、用標(biāo)準(zhǔn)菌落計(jì)數(shù)器、顯微鏡、或自動(dòng)判讀儀來計(jì)數(shù)。紅色有氣泡的菌落確認(rèn)為大腸菌群數(shù)。培養(yǎng)圓形面積邊緣上及邊緣以外的菌落不作計(jì)數(shù)。當(dāng)培養(yǎng)區(qū)域出現(xiàn)大量氣泡，大量不明顯小菌落或培養(yǎng)區(qū)呈暗紅色三種情況，表明大腸菌群的濃度較高，需要進(jìn)一步稀釋樣品來獲得準(zhǔn)確的讀數(shù)。第二十二頁，共二十七頁，2022年，8月28日3MTM快速涂抹棒（QuickSwab)干式取樣——當(dāng)待測表面潮濕時(shí)1.標(biāo)記每個(gè)涂抹棒2.擰扭管子使球莖末端和涂抹棒管相連處分開3.30度角緩慢并全面涂抹待測表面,每涂抹一次注意翻轉(zhuǎn)涂抹棒頭的方向4.取樣后,完整地把涂抹棒放回管中5.用大拇指掰斷球莖中的紅色閥門,聽到啪的一聲,閥門打開,Leetheen肉湯流入管中和浸濕涂抹棒6.用力擠壓球莖末端,使Leetheen肉湯流入管中7.在實(shí)驗(yàn)室里,充分振蕩涂抹棒至少10分鐘,使菌與涂抹棒分離8.在管壁上擠擰出涂抹棒頭上的內(nèi)容物,按通常工業(yè)用標(biāo)準(zhǔn)方法處置棄去涂抹棒9.小心地傾注管中的全部內(nèi)容物到3MPetrifilmTM測試片上10.按包裝內(nèi)說明培養(yǎng)測試片第二十三頁，共二十七頁，2022年，8月28日3MTM快速涂抹棒（QuickSwab)濕式取樣——當(dāng)待測表面干燥時(shí)1.標(biāo)記每個(gè)涂抹棒4.擰扭管子使球莖末端和涂抹棒管相連處分開5.30度角緩慢并全面涂抹待測表面,每涂抹一次注意翻轉(zhuǎn)涂抹棒頭的方向6.取樣后,完整地把涂抹棒放回管中2.用大拇指掰斷球莖中的紅色閥門,聽到啪的一聲,閥門打開,Lee－theen肉湯流入管中和浸濕涂抹棒3.用力擠壓球莖末端,使Leetheen肉湯流入管中7.在實(shí)驗(yàn)室里,充分振蕩涂抹棒至少10分鐘,使菌與涂抹棒分離8.在管壁上擠擰出涂抹棒頭上的內(nèi)容物,按通常工業(yè)用標(biāo)準(zhǔn)方法處置棄去涂抹棒9.小心地傾注管中的全部內(nèi)容物到3MPetrifilmTM測試片上10.按包裝內(nèi)說明培養(yǎng)測試片第二十四頁，共二十七頁，2022年，8月28日Hygicult瓊脂載片是一塊兩面覆有為特定細(xì)菌生長的瓊脂培養(yǎng)基的塑料載片并根據(jù)歐盟（EU）相關(guān)法規(guī)而設(shè)計(jì)，用來檢測各類表面、原材料、食品原料中的微生物（菌落總數(shù)、大腸菌群、霉菌和酵母菌）存在狀況（其使用不會(huì)影響被采樣本的質(zhì)量）。該培養(yǎng)基上另含有吐溫和卵磷脂以中和殘留的消毒劑對微生物生長的影響。Hygicult瓊脂載片檢測微生物介紹TPC：菌落總數(shù)CF：大腸菌群E：大腸桿菌Y&F：霉菌和酵母第二十五頁，共二十七頁，2022年，8月28日

操作步驟接種培養(yǎng)判讀①②③①②第一步第二步第三步第二