臨床血液學(xué)檢驗(yàn)：血液病MICM檢驗(yàn)

血液病MICM檢驗(yàn)背景介紹

血液病是原發(fā)于造血系統(tǒng)的疾病，或影響造血系統(tǒng)伴發(fā)血液異常改變，以貧血、出血、發(fā)熱為特征的疾病。

出血性疾病貧血癥白細(xì)胞疾病常見血液病造血系統(tǒng)惡性腫瘤白血病的診斷分型：MICM分型發(fā)展由來1827年，法國的AlfredVelpeau描述第一例白血病1847年，Virchow首次提出了“白血病”這個(gè)名稱1976年，法、美、英3國7位血液學(xué)家以光鏡下的形態(tài)為主，參照細(xì)胞化學(xué)染色，制定了FAB分型標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)志著現(xiàn)代白血病診斷與分型的開端

80年代末至90年代初，隨著免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子生物學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了MICM（形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)）分型WHO造血和淋巴組織腫瘤分類方案（2001，2008）FAB分型及WHO分類FAB：主要建立在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上WHO(2001和2008)骨髓或外周血原始細(xì)胞比例≥20%將一些有明確診斷及預(yù)后指導(dǎo)意義的細(xì)胞或分子遺傳學(xué)異常作為診斷和分型的重要標(biāo)志將患者診斷之前的疾病狀態(tài)和治療措施納入考量FAB和WHO分類方案的主要區(qū)別急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）和相關(guān)腫瘤WHO分型伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AML伴MDS相關(guān)改變的AML繼發(fā)于MDS或MDS/MPN伴有MDS相關(guān)細(xì)胞遺傳學(xué)異常2或3系50%以上的細(xì)胞有發(fā)育異常治療相關(guān)性AML不另作分類的AML髓細(xì)胞肉瘤Down’s綜合征相關(guān)髓系增生疾病母細(xì)胞性漿細(xì)胞樣樹突細(xì)胞腫瘤伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AMLAMLwitht(8;21)(q22;q22) RUNX1-RUNX1T1AMLwithinv(16)(p13.1q22)ort(16;16) CBFB-MYH11APLwitht(15;17)(q22;q12) PML-RARAAMLwitht(9;11)(p22;q23) MLLT3-MLLAMLwitht(6;9)(p23;q34) DEK-NUP214AMLwithinv(3)(q21q26.2)ort(3;3) RPN1-EVI1AML-M7witht(1;22)(p13;q13) RBM15-MKL1?AMLwithmutatedNPM1?AMLwithmutatedCEBPA通常AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)，原始細(xì)胞比例>20%，但如果t(8;21)、t(15;17)或inv(16)陽性，則不論原始細(xì)胞比例為多少，AML診斷成立MICMFAB形態(tài)學(xué)診斷(Morphology)免疫學(xué)檢查(Immunology)細(xì)胞遺傳學(xué)檢查(Cytogenetics)分子遺傳學(xué)檢查(Molecular)MICM分型原則中各檢測技術(shù)簡介形態(tài)學(xué)：外周血涂片、骨髓涂片±骨髓活檢免疫表型檢測：多參數(shù)流式細(xì)胞儀細(xì)胞遺傳學(xué)檢測常規(guī)核型分析，分子核型分析FISH分子遺傳學(xué)檢測融合基因檢測（RT-PCR）：PML-RARA、AML1-ETO、CBFB-MYH11、MLL-…、BCR-ABL……基因突變：FLT3-ITD、CEBPA、NPM1、TET2、IDH1、NOTCH1、IKZF1、FBXW7……拷貝數(shù)變化（CNV）:SNP-array高通量測序技術(shù)……病史形態(tài)學(xué)：結(jié)構(gòu)：活檢細(xì)胞學(xué)：涂片骨髓血凝塊免疫分型：流式細(xì)胞或免疫組化細(xì)胞遺傳學(xué)：核型分析、FISH分子遺傳學(xué)：融合基因（RT-PCR\Q-PCR)/基因突變（測序）白血病MICM診斷程序及技術(shù)白血病診斷的任務(wù)—不僅僅是FAB分類是不是白血??？急性？慢性？系來源FAB分類預(yù)后分層治療、療效判斷MRD

病史+形態(tài)形態(tài)+免疫形態(tài)+免疫+遺傳+分子形態(tài)+免疫+遺傳+分子為什么需要MICM綜合診斷？

形態(tài)或病理或加細(xì)胞化學(xué)分析受觀察者個(gè)體經(jīng)驗(yàn)及分辨力的限制，一致率僅50-70%；在此基礎(chǔ)上增加免疫組化和/或FCM分析大大增加了分型的準(zhǔn)確率，可達(dá)90%以上；染色體、FISH及基因分析，進(jìn)一步提高分型的準(zhǔn)確率

MICM整合診斷的臨床意義

全面正確診斷與分型評估預(yù)后確立檢測MRD的標(biāo)志，追蹤MRD

幫助建立分層、個(gè)性化的治療定期追蹤幫助發(fā)現(xiàn)抗原丟失、克隆演變或突變幫助確定病因或發(fā)病機(jī)制MICM分型原則中各檢測技術(shù)簡介細(xì)胞形態(tài)及細(xì)胞化學(xué)分析的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：

直觀：鏡下直接觀察細(xì)胞形態(tài)，對MDS的診斷、一些少見的、大的惡性細(xì)胞的確定優(yōu)于流式細(xì)胞分析惡性細(xì)胞的比例更準(zhǔn)確：簡單快速，有顯微鏡即可完成報(bào)告缺點(diǎn)：

人為因素影響大難以鑒別細(xì)胞的成熟階段，B、T等系列的惡性細(xì)胞細(xì)胞較成熟時(shí)，難以鑒別良惡性不能提供太多的預(yù)后信息形態(tài)M病理及免疫組織化學(xué)的優(yōu)缺點(diǎn)

標(biāo)本直接固定，不容易損失信息，惡性細(xì)胞比例更客觀，對一些抽不出或少見細(xì)胞，仍可診斷。如伴骨髓纖維化、MM、淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞、何杰金細(xì)胞等可以直接觀察到組織結(jié)構(gòu)，容易確定惡性細(xì)胞的組織部位診斷慢、受診斷者個(gè)人經(jīng)驗(yàn)及知識水平影響大對一些組織結(jié)構(gòu)無破壞、細(xì)胞形態(tài)改變不大的細(xì)胞，難以鑒定良惡性及成熟度有些惡性細(xì)胞在液體中，難以獲取組織標(biāo)本，難以判斷組織結(jié)構(gòu)形態(tài)M流式細(xì)胞術(shù)流式IFCM檢測的參數(shù)FSC:細(xì)胞大小

SSC:細(xì)胞內(nèi)顆粒多少及細(xì)胞內(nèi)構(gòu)造的復(fù)雜性

FL：3-10多種（熒光素耦聯(lián)的單克隆抗體）流式IR8：幼稚細(xì)胞群，正常骨髓中此群細(xì)胞數(shù)量極低或空缺流式I

流式細(xì)胞免疫分型的作用確定系來源原理：不同系有特定的抗原表達(dá)髓系/B系/T/NK系/組織細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞確定細(xì)胞分化階段不同發(fā)育階段細(xì)胞，其抗原表達(dá)不同預(yù)后判斷有些抗原表達(dá)和淋巴瘤/白血病預(yù)后相關(guān)治療方法選擇-治療靶向療效判斷、復(fù)發(fā)監(jiān)測診斷雙表型、混合性，M0、未分化型等特殊類型白血病髓系分亞型與FAB分亞型有一定差異I：immunology,免疫學(xué)TypeofcellCDmarkersstemcellsCD34+,CD31-allleukocytegroupsCD45+GranulocyteCD45+,CD15+,CD24+,CD114+,CD182+MonocyteCD45+,CD14+,CD114+,CD11a,CD91+TlymphocyteCD45+,CD3+ThelpercellCD45+,CD3+,CD4+TregulatorycellCD4,CD25,andFoxp3CytotoxicTcellCD45+,CD3+,CD8+BlymphocyteCD45+,CD19+orCD45+,CD20+,CD24+ThrombocyteCD45+,CD61+NaturalkillercellCD16+,CD56+,CD3-,CD31,CD30

M0CD34,CD33,CD13M1MPO,CD34,CD33,CD13,HLA-DRM2MPO,CD34,CD15,CD13,HLA-DRM3MPO,CD33,CD13、CD9(HLA-DR、CD11b常陰性)

M4MPO,CD33,CD15,CD14,CD13

M5CD68,CD33,CD14,CD13,HLA-DR,CD36，CD64

M6CD33,CD235a,CD71

M7CD33,CD41,CD42b,CD61急性髓系白血病免疫表型與FAB分型相關(guān)性形態(tài)與免疫表型的符合性不足80%，不能脫離形態(tài)學(xué)單純依賴免疫表型進(jìn)行白血病的診斷與分型。FAB基于形態(tài)，兩者不符以形態(tài)為主。流式I髓系MPO+（用FCM，免疫組織化學(xué)染色，細(xì)胞化學(xué)染色證實(shí)）或單核細(xì)胞（至少有以下標(biāo)志中的2項(xiàng)陽性：NSE、CD11c、CD14、CD64、CD36*、溶酶體T細(xì)胞系cCD3+(用抗CD3ε鏈的單抗及FCM分析，不能用免疫組化的抗CD3ζ鏈多克隆來檢測，因?yàn)楹笳卟皇荰細(xì)胞特異性抗原)或sCD3+B細(xì)胞系CD19強(qiáng)陽性并同時(shí)有以下標(biāo)志中的至少1項(xiàng)陽性：CD79a、cCD22、CD10或CD19弱陽性并同時(shí)有以下標(biāo)志中的至少2項(xiàng)陽性：CD79a、cCD22、CD10混合性白血病的判定如有2系或以上的特異性標(biāo)志，可診斷為急性混合性白血病流式IMRD流式細(xì)胞學(xué)檢測腫瘤細(xì)胞與正常起源細(xì)胞免疫表型不同跨系表達(dá)抗原表達(dá)不同步抗原表達(dá)丟失抗原表達(dá)減弱其它抗原表達(dá)初始免疫分型結(jié)果、白血病相關(guān)表型特點(diǎn)抗體組合越多覆蓋率越高、敏感性越高假陽性、假陰性均存在隨訪、動態(tài)觀察更有意義流式IFCM的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：一次可檢測數(shù)萬至數(shù)十萬個(gè)細(xì)胞上的數(shù)十種標(biāo)記，可同時(shí)檢測每個(gè)細(xì)胞的六個(gè)以上參數(shù)，敏感性高，分析全面

更容易區(qū)分良惡性，惡性細(xì)胞的系列及成熟度可幫助確定免疫治療的靶點(diǎn)并監(jiān)測療效，如CD20、CD19是監(jiān)測MRD覆蓋面最廣的方法?？焖?、簡便、重復(fù)性好缺點(diǎn)：不能確定組織結(jié)構(gòu)，一些罕見的大細(xì)胞不能分析到，一些細(xì)胞粘附性高，難以抽出。因此對HL等難以確診。判斷惡性細(xì)胞的比例不如形態(tài)準(zhǔn)確，對M6、MDS的診斷不如形態(tài)預(yù)后價(jià)值不如染色體和基因的檢測流式I診斷誤區(qū)舉例原始細(xì)胞增多是診斷前體惡性血液病尤其AL的重要指標(biāo)，但原始細(xì)胞應(yīng)根據(jù)免疫學(xué)標(biāo)志/基因/染色體證實(shí)為惡性造血前體細(xì)胞一些形態(tài)上的原始細(xì)胞可以是正常造血細(xì)胞（尤其見于兒童感染后，G-CSF,GM-CSF等刺激或化療后或移植后）病例3兒童B-ALL,化療3年后停藥，來我院復(fù)查，骨髓涂片8%的幼稚細(xì)胞流式幼稚B淋巴細(xì)胞增生，未見異常表型病例4NK細(xì)胞白血病移植后40天，骨髓涂片8%的幼稚細(xì)胞流式:未見表型異常細(xì)胞，CD34陽性細(xì)胞為幼稚B淋巴細(xì)胞即染色體異常包括染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)量異常根據(jù)這些特征性的異常，對惡性血液病進(jìn)行診斷和分類、預(yù)后分層及指導(dǎo)治療。細(xì)胞遺傳學(xué)C1950196019701980199020002010確定染色體數(shù)目=46發(fā)現(xiàn)Ph；發(fā)現(xiàn)+21各種顯帶技術(shù)出現(xiàn)；發(fā)現(xiàn)多數(shù)AL患者伴有染色體異常FISH出現(xiàn)；闡明某些染色體異常的分子學(xué)改變SKYCGHPCR技術(shù)FLT3-ITD(1996)c-KIT突變（1993）…………..芯片技術(shù)：cDNAarray、SNP-array、測序技術(shù)的發(fā)展大量基因突變的發(fā)現(xiàn)：JAK2、NPM、CEBPA、PAX5、IKZF1、FLT3、RUNX1、WT1、RAS、NOTCH1…………..新一代高通量測序技術(shù)；各種遺傳學(xué)改變間的相互作用白血病遺傳學(xué)研究的歷史細(xì)胞遺傳學(xué)C多數(shù)AML患者有非隨機(jī)性染色體改變，包括易位、倒位、插入、缺失、擴(kuò)增、等臂染色體等染色體異常在AML診斷、分型、預(yù)后評價(jià)、發(fā)病機(jī)制研究及靶向治療藥物研發(fā)方面有重要價(jià)值一些特殊的細(xì)胞遺傳學(xué)異常在WHO分型建議中已被列為特殊亞型對不同細(xì)胞遺傳學(xué)類型的血液腫瘤患者進(jìn)行個(gè)體化治療可以獲得更好的療效細(xì)胞遺傳學(xué)CAML的WHO分型伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AML伴多系發(fā)育異常的AML

繼發(fā)于MDS；無MDS病史治療相關(guān)性AML烷化劑相關(guān)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑相關(guān)；其它無法分類的AML髓細(xì)胞肉瘤Down’s綜合征相關(guān)AML細(xì)胞遺傳學(xué)C伴再現(xiàn)性遺傳學(xué)異常的AMLAMLwitht(8;21)(q22;q22)AMLwithinv(16)(p13.1q22)ort(16;16)APLwitht(15;17)(q22;q12)AMLwitht(9;11)(p22;q23)AMLwitht(6;9)(p23;q34)AMLwithinv(3)(q21q26.2)ort(3;3)AML-M7witht(1;22)(p13;q13)RUNX1-RUNX1T1CBFB-MYH11PML-RARAMLLT3-MLLDEK-NUP214RPN1-EVI1RBM15-MKL1?AMLwithmutatedNPM1?AMLwithmutatedCEBPA

通常AML的診斷標(biāo)準(zhǔn)，原始細(xì)胞比例為20%，但如果t(8;21)、t(15;17)

或inv(16)陽性，則不論原始細(xì)胞比例為多少，白血病診斷成立細(xì)胞遺傳學(xué)C細(xì)胞遺傳學(xué)C——染色體核型分析正常核型：男：46，XY女：46，XX異常核型：46，XY，t(8;21)(q22;q22)46，XX，t(15;17)(q22;q21.1)47,XY,del(6)(q15),+11,-15,add(17)(p13),+mar[16]……MICM分型原則中各檢測技術(shù)簡介標(biāo)本采集細(xì)胞接種阻留中期分裂相收獲細(xì)胞低滲、固定制片、染色染色體分離顯帶的步驟1.Collectionofspecimen5mlBonemarrowisnecessaryforpatientwithHematologicMalignancies

Peripheralbloodmaybeusewhenblastcellsaremorethan10%andthenumberofLeukocyteismorethan10×109/LHeparinannticoagulantofspecimenSpecimenmustbetreatedin24h標(biāo)本采集2.Howtogetcellsinmetaphasedirectmethod

Cellculture50ng/mlColchicine

1h細(xì)胞接種阻留中期分裂相3.Howtoisolatechromosome?

0.075mol/LkclLowPermeability

Methanol:aceticacid(3:1)

Fixation

FISHChromosomeexamination收獲細(xì)胞低滲、固定MountingTechniqueforStudyingCellChromosome

FixedcellsDiffusionFixationAging制片ChromosomeBandingtechnologyConceptionMethodofChromosomeBanding

GBandingtechnology

(EDTA-胰蛋白酶法)

R

Bandingtechnology

RoastsliceEDTA-trypsinGiemsastainingMountedsliceMountedsliceEarle’sliquidGiemsastaining顯帶、染色

G帶

R帶StructureandNomenclatureofchromosomebandRegion1Region2Region3pqStructureNomenclature縮寫addaceCcencpdelderdicdminduphsriidemider:::意義不明來源的額外物質(zhì)無著絲粒碎片體質(zhì)性異常著絲粒混合性核型缺失衍生染色體雙著絲粒染色體雙微體重復(fù)均勻染色體等臂染色體同前的等臂衍生染色體斷裂斷裂后重接縮寫idicinsinvmarmnrrobmlslsdlttac？/

意義等臂雙著絲粒染色體插入易位倒位標(biāo)記染色體眾數(shù)環(huán)狀染色體羅伯遜易位主系干系旁系易位端粒聯(lián)合表示不確定用來分隔兩個(gè)克隆多拷貝重排染色體GroupandKaryotypefornormalChromosomeFemale

:46，XXMale

:46，XYAbnormalChromosomeanddiseases

約55%的AML患者可檢出克隆性染色體異常分子遺傳學(xué)技術(shù)的進(jìn)展使得多數(shù)AML患者檢出基因水平的異常，如FLT3、CEBPα及NPM1基因的突變遺傳學(xué)異常對于理解AML發(fā)病機(jī)制、建立新的診斷方法、研發(fā)治療藥物或指導(dǎo)臨床治療有重要的價(jià)值在WHO分型建議中，一些特殊的遺傳學(xué)異常被列為診斷和分型的依據(jù)AML：50%~90%的患者細(xì)胞遺傳學(xué)可檢出異?？寺LL：大約60%～85%的患者可檢出克隆性染色體畸變細(xì)胞遺傳學(xué)CAbnormalnumberAbnormalstructureAbnormalstructureofKaryotype：CongenitalandAcquired

CongenitalAcquiredDescriptionofAbnormalKaryotype

themodeofrecordingChromosome1p33.111號染色體短臂3區(qū)3帶1亞帶1DescriptionofKaryotype46,XX,t(8;21)(q22;q22)[20]AML常見染色體異常t(8;21)10%t(15;17)8%inv(16)/t(16;16)5-10%11q23異常3-5%30％45％20％5％單一異常：45%≥2種異常：55%-5/5q-；-7/7q-；＋8；-Y；+11；+13；+21;+223q26；del(9q)t(6;9)；t(9;22)等t(8;21)(q22;q22)見于約10%AML，形成8號染色體上的AML1-ETO融合基因CR率高，EFS長，預(yù)后相對較好20%-30%伴KIT突變，復(fù)發(fā)率增高，預(yù)后較差≥75%伴性染色體丟失及del(9q)等附加異常，伴性染色體丟失不影響預(yù)后，伴del(9q)提示預(yù)后不良AML-M2t(8;21)(q22;q22),9q-,-Yt(8;21)(q22;q22)模式圖CommonabnormityofAMLchromosomet(15;17)(q22;q12)見于8-10%AML對全反式維甲酸敏感，生存期長分子生物學(xué)特征：易位形成PML/RARα融合基因，是APL特異性的分子生物學(xué)標(biāo)志PML/RARα對APL診斷具有高度特異性，也是治療的分子基礎(chǔ)AML-M3+8,t(15;17)

AML-M3t(11;17)17q22(RARA)4q12FIP1L15q35NMP111q13NuMA115q22PML17q11STAT5b17q24PRKAR1A11q11PLZFATRA敏感ATRA耐藥ATRA相對耐藥對ATRA敏感性未定

CMLt(9;22)(q34;q11)inv(16)(p13;q22)/t(16;16)(p13;q22)見于約5%AML、20%AML-M4及100%AML-M4Eo遺傳學(xué)特點(diǎn)：因16號染色體較小及帶型的限制，常規(guī)核型分析容易漏診有典型形態(tài)學(xué)改變及常見繼發(fā)性異常的患者須行FISH或PCR檢測CBFβ/MYH11融合基因常伴繼發(fā)性異常：+8，+21，+22約30%患者亦存在KIT突變，復(fù)發(fā)率增高、預(yù)后欠佳化療敏感，預(yù)后相對好，易發(fā)生CNSLAML-M4Eo骨髓象AML-M4Eo+8,inv(16)FISH檢測inv(16)inv(16)模式圖一些染色體有診斷價(jià)值:如重現(xiàn)性染色體異常，如t(8;21)，inv(16)、t（16；16）、

t(15;17)（q22;q12），t(5;14)(q31;q32)，t(3;3),t(4;11)可直接診斷急性白血??；一些染色體和/或基因有輔助診斷價(jià)值，如5q31、CEP7、7q31、CEP8、20q、CEPY、P53高度疑似MDS等；

有-7、5q-、t(3;3)、t(4;11)、t(9;22)、復(fù)雜染色體等的急性白血病預(yù)后不好染色體的診斷價(jià)值細(xì)胞遺傳學(xué)C有絲分裂相少或缺如染色體質(zhì)量低劣，顯帶不佳染色體異常復(fù)雜如果惡性細(xì)胞不分裂，其結(jié)果是假陰性由于分析的細(xì)胞少，有部分白血病患者無染色體異常，監(jiān)測殘留白血病不敏感白血病染色體分析存在的問題：細(xì)胞遺傳學(xué)C熒光原位雜交（FISH）利用已知核酸序列作為探針，以熒光素直接標(biāo)記后與靶DNA進(jìn)行雜交，最后在熒光顯微鏡下觀察雜交信號，從而對標(biāo)本中待測核酸進(jìn)行定性、定位和定量分析細(xì)胞遺傳學(xué)C熒光原位雜交(FISH)生命科學(xué)中的“釣魚”技術(shù)原理：通過熒光標(biāo)記的DNA探針與細(xì)胞核內(nèi)的DNA靶序列雜交目的：獲得細(xì)胞內(nèi)多條染色體或多種基因狀態(tài)的信息

熒光標(biāo)記探針探針變性樣本DNA變性雜交熒光原位雜交（Fluorescenceinsituhybridization,FISH）細(xì)胞遺傳學(xué)C細(xì)胞遺傳學(xué)C——熒光原位雜交（FISH）探針類型雙色單融合（DualColor,SingleFusion）雙色雙融合（DualColor,DualFusion）雙色分離（DualColor,BreakApart）額外信號（ExtraSignal）建議與染色體核型分析同時(shí)送檢細(xì)胞遺傳學(xué)C雙色單融合示意圖細(xì)胞遺傳學(xué)C細(xì)胞遺傳學(xué)CFISH檢測BCR/ABL融合基因BCR/ABL基因正常BCR/ABL基因融合9號22號雙色單融合探針，檢測染色體易位ablbcr細(xì)胞遺傳學(xué)CBCR/ABL雙色雙融合探針細(xì)胞遺傳學(xué)CBCR/ABL額外信號探針RoleofSexChromosomeinALLO-BMT(異基因骨髓移植)X，XX，Y細(xì)胞遺傳學(xué)C有獨(dú)立的診斷及預(yù)后價(jià)值可以檢測出顯微鏡下人眼難以分辨的染色體異常診斷時(shí)間比染色體短與染色體分析比較，對診斷人員的經(jīng)驗(yàn)依賴程度低對不分裂的細(xì)胞也可以分析，分析的細(xì)胞數(shù)量比染色體多，更能反映正常和惡性細(xì)胞的比例，監(jiān)測殘留白血病比染色體敏感可以對既往的骨髓片回顧分析，進(jìn)一步明確或排除診斷探針昂貴，每次只能分析1-2種異常，只能分析已知的染色體或基因異常FISH的優(yōu)缺點(diǎn)細(xì)胞遺傳學(xué)CFISH檢測可以彌補(bǔ)染色體不足，染色體檢測為陰性，F(xiàn)ISH可能為陽性。細(xì)胞遺傳學(xué)C1）染色體是獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)并有助與治療方案的選擇

與急白預(yù)后相關(guān)的細(xì)胞遺傳學(xué)亞型預(yù)后等級

核型AMLALL低危t(8;21)、t(15;17)、inv(16)正常核型、+8、+21、+22、11q23>50的超二倍體、t(12;21)中危異常、del(9q)、del(12p)、-y正常核型、6q-、t(10;14)、t(11;14)高危-5、-7、del(5q)、3q重排、復(fù)雜異常（≥3種異常）t(9;22)、t(8;14)、t(4;11)、亞二倍體/近單倍體細(xì)胞遺傳學(xué)C2）鑒別白血病微小殘留病灶

(minimalresidualleukemia，MRL)白血病化療或骨髓移植后達(dá)到完全緩解體內(nèi)殘存微量白血病細(xì)胞106-108檢測到原已消失的克隆性染色體異常和(或)新的克隆性染色體異常時(shí)，往往預(yù)示疾病將復(fù)發(fā)3)在骨髓增生異常綜合征(MDS)中的應(yīng)用

積分值21.510.50染色體核型好（正常，-y，5q-，20q-）中間（其他異常）

預(yù)后不佳（-7，或復(fù)雜染色體異常）

國際預(yù)后積分系統(tǒng)（IPSS）4)在淋巴瘤中的應(yīng)用5）在其他血液病中的應(yīng)用真性紅細(xì)胞增多癥（PV）常見的染色體異常有del(2v)(q11)，+8和+9，可見于PV病程的始末。原發(fā)性骨髓纖維化常見的染色體異常為-7，-9，+8，+2或lq、13q等結(jié)構(gòu)異常。在多發(fā)性骨髓瘤（MM)中的應(yīng)用預(yù)后不良預(yù)后中等預(yù)后良好

del(17p13)、

1q21復(fù)制、t(4;14)、t(14;16)

del(13q14)只有t(11;14)、＋6，＋9，＋17或沒有細(xì)胞遺傳學(xué)異常TheroleofchromosomeinDiseaseMonitoring2×Ph，+8，i（17q）

noAbnormalchromosomerecurrenceCMLinblasticphase:

6）新的異常染色體的出現(xiàn)常提示復(fù)發(fā)有獨(dú)立的診斷及預(yù)后價(jià)值可以檢測出染色體或FISH不能檢測出的異常，聯(lián)合染色體和FISH，增加了對疾病預(yù)后的判斷能力。診斷時(shí)間比染色體及FISH短與染色體及FISH分析比較，對檢測人員的經(jīng)驗(yàn)依賴程度低

是最敏感的監(jiān)測殘留白血病的指標(biāo)對試驗(yàn)設(shè)計(jì)、試驗(yàn)質(zhì)控要求高對無基因異常的疾病難以診斷疾病是復(fù)雜的，僅有基因異常未必完全決定預(yù)后基因檢測的優(yōu)缺點(diǎn)分子生物學(xué)MDohner,H.etal.Blood2010;115:453-474在AML中,基因突變與細(xì)胞遺傳學(xué)異常一樣普遍AML基因突變分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M凝膠電泳檢測定性檢測定量檢測RQ-PCR檢測分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M——融合基因BCR/ABL：t(9;22)(q34;q11)PML/RARα：t(15;17)(q22;q21)AML1/ETO：t(8;21)(q22;q22)TEL/AML1：t(12;21)(p13;q22)E2A/PBX1：t(1;19)(q23;p13)……分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M血液病分子診斷的意義補(bǔ)充MIC檢查的不足檢測相關(guān)微小殘留病灶（MRD）發(fā)現(xiàn)新的亞型研究各類血液病發(fā)病機(jī)制分子生物學(xué)M31種白血病融合基因(122種變異體)篩查1.AML1/EAP(1)2.AML1/ETO(1)3.AML1/MDS1(2)4.BCR/ABL(4)5.CBFβ/MYH11(8)6.DEK/CAN(1)7.dupMLL(5)8.E2A/HLF(3)9.E2A/PBX1(2)10.FIP1L1/PDGFRα(4)11.MLL/AF10(18)12.MLL/AF17(1)13.MLL/AF1p(4)14.MLL/AF1q(4)15.MLL/AF4(12)16.MLL/AF6(4)17.MLL/AF9(8)18.MLL/AFX(4)19.MLL/ELL(8)20.MLL/ENL(4)21.NPM/ALK(1)22.NPM/MLF1(1)23.NPM/RARα(2)24.PLZF/RARα(2)25.PML/RARα(5)26.SET/CAN(1)27.SIL/TAL1(1)28.TEL/ABL(2)29.TEL/AML1(2)30.TEL/PDGFR(1)31.TLS/ERG(5)分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)MFLT3ITD–NPM1+預(yù)后較好FLT3ITD+NPM1+或FLT3ITD–NPM1–預(yù)后中等FLT3ITD+NPM1–預(yù)后較差急髓相關(guān)突變檢測CEBPA基因位于19q13.11，CCAAT盒/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白，粒細(xì)胞分化過程中起重要作用，預(yù)后良好c-KIT基因位于4q11-21，t(8;21)和inv(16)伴c-KIT突變在AML預(yù)后危險(xiǎn)分級中由“低?！鄙墳椤爸形！盢-Ras為Ras基因家族成員之一，見于10%左右的M4、M5、M6，該突變預(yù)后意義尚不明FLT3-TKD，F(xiàn)ms樣酪氨酸激酶3-TK區(qū)域點(diǎn)突變，13q12，預(yù)后不良分子生物學(xué)MAML患者常見基因突變和異常表達(dá)的預(yù)后意義分子生物學(xué)M骨髓增殖性腫瘤檢測項(xiàng)目檢測平臺檢測意義JAK2V617F突變熒光PCR90%以上PV以及50%ET/PMF有JAK2V617F突變，鑒別診斷JAK2539-544突變測序少數(shù)PV患者有JAK2539-544突變MPLW515K/L突變測序少數(shù)ET/PMF患者有MPL突變BCR/ABLP210定量BCR/ABLP230定量定量PCR區(qū)分CML和MPNFIP1L1/PDGFRα定量定量PCR見于嗜酸性粒細(xì)胞增多綜合征，判斷TKI治療效果31種融合基因篩查多重PCR適合臨床情況不明的患者分子生物學(xué)M骨髓增生異常綜合征NCCN提及的MDS分子檢測項(xiàng)目TET2突變，見于20%MDS，預(yù)后較好ASXL1突變，見于15%MDS，預(yù)后較差RUNX1突變、EZH2突變、ETV6突變，預(yù)后較差CBL突變、IDH2突變、U2AF1/U2AF35突變、SF3B1突變SRSF2突變、ZRSR2突變，預(yù)后較差，增加白血病轉(zhuǎn)化率分子生物學(xué)M分子生物學(xué)M分子生物學(xué)MMRD主要檢測方法比較方法覆蓋范圍敏感度備注實(shí)時(shí)定量PCR30-40%10-5-10-6只能針對特定的融合基因或基因突變流式細(xì)胞術(shù)微小殘留檢測大于90%10-3-10-4不適用于CMPDFISH30%10-3需要特定的染色體或基因異常，且有相應(yīng)探針染色體核型分析50%10-2需要培養(yǎng)細(xì)胞到分裂中期報(bào)告時(shí)間較長血液腫瘤初診檢測方案建議

MICM整合報(bào)告AL——系別不清形態(tài)學(xué)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型骨髓染色體核型分析分子生物學(xué)——白血病31種常見融合基因通篩血液腫瘤初診檢測方案建議-AL25個(gè)以上抗原，包括粒系、單核系、T系、B系、非系列特異性、干細(xì)胞（原始細(xì)胞）相關(guān)以及其他細(xì)胞等各種標(biāo)志；除可以進(jìn)行系別鑒定、亞型判斷外，還可進(jìn)行一定的預(yù)后評估。FAB分類CD13CD33CD11bCD14HLA-DRCD34CD117MPOM0++/---++++M1++-/+-++++M2++--++/-++M3++----++M4+++++/-+/-++M5a+++/-+/-+/-+-/+M5b+++++-/+M6+/-+/-+或--+/--+M7-+/---++?-可以宏觀、全面地檢查細(xì)胞內(nèi)所有染色體的各種異常，但對于一些微小異?；螂[匿性易位以及低含量的異常難以查出。此外，由于標(biāo)本本身等各種原因的影響，會有一定比例的無分裂相出現(xiàn)。建議必要時(shí)配合行FISH檢測。診斷相關(guān)類：AML1/ETO：多見于M2，少見于M4和M1；M2b中最多RARα相關(guān)融合基因：M3PML/RARαPLZF/RARαNPM/RARαCBFβ/MYH11：M4Eo用藥相關(guān)類：BCR/ABL：格列衛(wèi)PML/RARα：全反式維甲酸（ATRA）NPM/RARα：全反式維甲酸（ATRA）AML1/ETO：大劑量的阿糖胞苷CBFβ/MYH11：大劑量的阿糖胞苷ALL——T、B等不清骨髓形態(tài)學(xué)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型細(xì)胞遺傳學(xué)檢測基因診斷——急淋15種常見融合基因篩查或者融合基因BCR/ABL、E2A/PBX1、TEL/AML1、MLL/AF4定量檢測血液腫瘤初診檢測方案建議-ALL流式細(xì)胞術(shù)免疫分型：T系：CD1a、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、cCD3、TCRαβ、TCRγδ等B系：CD10、CD19、CD20、CD22、cIgM、cCD79a等NK系：CD16、CD56、CD57等ALL-FISH套系：t(9;22)：預(yù)后極差11q23重排：預(yù)后差t(12;21)：預(yù)后好+4：預(yù)后好+10：預(yù)后好ALL融合基因（建議查定量，但個(gè)別基因未開展定量檢測）：BCR/ABL：預(yù)后極差E2A/PBX1：常見于B-ALL，預(yù)后不良TEL/AML1：預(yù)后較好MLL/AF4：預(yù)后不良1p32染色體內(nèi)微缺失SIL/TAL1：常見于T-ALL淋巴瘤白血病形態(tài)學(xué)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型骨髓染色體核型分析/FISH套系基因診斷——TCR基因重排/IgH基因重排/t(11;14)bcl-1-JH融合基因定性/t(14;18)bcl-2-JH融合基因定性血液腫瘤初診檢測方案建議-淋巴瘤白血病CLL-FISH探針：ATM：缺失則中位生存期7-9個(gè)月P53：缺失中位生存期為32個(gè)月RB1：缺失則中位生存期133個(gè)月13q14：缺失則中位生存期133個(gè)月D13S2512cen正常FISH組合結(jié)果中位生存期111個(gè)月淋巴瘤FISH探針：Bcl-2重排t(8;14)：Burkitt’s淋巴瘤t(11;14)：套細(xì)胞淋巴瘤Bcl-6重排：彌漫大B淋巴瘤t(11;18)：結(jié)外邊緣帶淋巴瘤t(14;18)：濾泡型淋巴瘤、彌漫大B淋巴瘤IgH重排MDS骨髓形態(tài)學(xué)流式細(xì)胞術(shù)免疫分型骨髓染色體核型分析基因診斷——WT1基因定量、血液腫瘤初診檢測方案建議-MDSMDS-FISH探針套系：20q-：預(yù)后好+8：預(yù)后中等-7/7q-：預(yù)后差-5/5q-：單獨(dú)則預(yù)后好，伴其他則預(yù)后差-Y：預(yù)后好CMPD是一組造血干細(xì)胞異常增殖性疾病，在髓細(xì)胞普遍增生的基礎(chǔ)上有某個(gè)系列細(xì)胞尤其突出，呈現(xiàn)持續(xù)不斷地過度增殖，臨床上常有肝脾大，尤其以脾大多見，病程緩慢。主要介紹：真性紅細(xì)胞增多癥（PV）原發(fā)性血小板增多癥（ET）原發(fā)性骨髓纖維化（PMF）慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）血液腫瘤初診檢測方案