TCACM 1326.24-2019 倒地鈴種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程

ICS11.120.01C23團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/CACM1326.24—2019倒地鈴種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程TechnicalcodeofpracticeforcryopreservationofCardiospermumhalicacabumL.seeds2019-10-17發(fā)布 2019-10-17實(shí)施中 華 中 醫(yī) 藥 學(xué) 會(huì) 發(fā)布T/CACM1326.24—2019T/CACM1326.24—2019II目 次前言 II112范引文件 13語(yǔ)定義 14子收選擇 14.1種采收 24.2種選擇 25子處理 25.1活力 25.2含量圍 26子存量 37子凍式 38復(fù)養(yǎng) 3種解處理 3凍種活檢測(cè) 38.3萌成苗 3附錄規(guī)性錄）試劑配和存法 4參考獻(xiàn) 5T/CACM1326.24—2019T/CACM1326.24—2019鏈鏈鏈鏈前 言本標(biāo)準(zhǔn)是藥用植物頑拗性種子超低溫保存系列標(biāo)準(zhǔn)之一，該系列標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)和名稱(chēng)如下：——T/CACM1326.1藥用植物頑拗性種子超低溫保存技術(shù)通則；——T/CACM1326.2白木香種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程；——T/CACM1326.3——T/CACM1326.4——T/CACM1326.5——T/CACM1326.6——T/CACM1326.7——T/CACM1326.8——T/CACM1326.9樟種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程；——T/CACM1326.10兩面針?lè)N子超低溫保存技術(shù)規(guī)程；………………。GB/T1.1－2009本標(biāo)準(zhǔn)由中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)歸口。倒地鈴種子超低溫保存技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了倒地鈴（CardiospermumhalicacabumL.）種子超低溫保存過(guò)程中的術(shù)語(yǔ)和定義、種子的選擇、種子前處理、種子保存量、種子冷凍方式、恢復(fù)培養(yǎng)等內(nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于倒地鈴種子的超低溫長(zhǎng)期貯藏。GB/T3543.6農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程水分測(cè)定下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1倒地鈴 CardiospermumhalicacabumL.（Cardiospermum）3.2倒地果實(shí) CardiospermumhalicacabumL.fruits果實(shí)為蒴果，梨形、陀螺狀倒三角形或有時(shí)近長(zhǎng)球形，高1.5cm～3cm，寬2cm～4cm，褐色，被短柔毛。3.3倒地種子 CardiospermumhalicacabumL.seeds倒地鈴的播種材料為完整種子，貯藏特性判斷為頑拗性種子。種子黑色，有光澤，直徑約5mm，種臍心形，鮮時(shí)綠色，干時(shí)白色。3.4種子超低溫保存seedofcryopreservation將經(jīng)過(guò)前處理的倒地鈴種子置于液氮（-196℃）中保存。18月～12月，果皮由綠色變褐色時(shí)，即可采收，去除果皮，取出種子。個(gè)月）?；盍Γ˙TB）法測(cè)定倒地鈴種子生活力。待測(cè)種子在30℃～35℃溫水中浸種h，隨后取吸脹種子20粒，整1.5％BTB35℃溫箱中12hBTB的配制和保存方法見(jiàn)附錄A的A.1。在光下用放大鏡對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行觀察鑒定。凡種胚周?chē)霈F(xiàn)黃色暈圈的種子為有活力的種子，否則為無(wú)活力的種子。待保存的倒地鈴種子生活力應(yīng)≥70%。計(jì)算生活力按照公式（1）進(jìn)行計(jì)算：式中：A——生活力；y——有活力的種子數(shù)；x——總的種子數(shù)。用尼龍網(wǎng)袋包裹倒地鈴種子，置于盛有變色硅膠的干燥器內(nèi)，硅膠與種子的體積比為60：1，室溫條件下干燥處理0h～18h，在干燥過(guò)程可定期測(cè)定種子含水量，將種子含水量由25％～30％降至20％～25％。按照GB/T3543.6（130℃烘干1（2）2式中：W0M1（g）；M2（g）倒地鈴種子保存量不少于500粒，以便后期的活力檢測(cè)使用。倒地鈴種子超低溫保存的冷凍方式為玻璃化冷凍法，即將裝有種子的5mL凍存管（每管90粒種子）置于裝載液（LS）中并于25℃處理種子20min，再用玻璃化保護(hù)溶液（PVS2）冰浴處理種子30min，換上預(yù)冷新鮮的PVS2后迅速投入液氮中進(jìn)行超低溫保存。LS和PVS2的配制及保存方法見(jiàn)附錄A的A.2和A.3。液氮中至少凍存24h后，取出1個(gè)凍存管，立即放入40℃水浴中快速解凍5min，而后用洗滌液（DS）浸泡15min，并用純凈水洗滌3次。DS的配制及保存方法見(jiàn)附錄A的A.4。取出45粒解凍后的種子，按照5.1活力檢測(cè)方法，進(jìn)行超低溫保存后的初始生活力檢測(cè)。當(dāng)種子生活力≥60％時(shí)視為保存成功。將剩下45粒解凍后的倒地鈴種子，播種到帶有無(wú)菌濾紙的帶蓋發(fā)芽盒中，溫度25℃～30℃，濕度70％～85％條件下培養(yǎng)。倒地鈴種子出芽周期大概15d～35d。3附 錄 A（）BTB精密稱(chēng)取BTB0.1g，溶解于煮沸過(guò)的100mL純水中，然后用濾紙去殘?jiān)V液若呈黃色，可加數(shù)滴氫氧化鈉溶液，使之變?yōu)樗{(lán)色或藍(lán)綠色，置于棕色瓶中長(zhǎng)期貯存。1.5％BTB0.1％BTB溶液40mL0.5gcm（LS）13.711.9MSpH至100mL，4（PVS2）精密量取甘油23.8mL、乙二醇13.6mL、二甲亞砜13.6mL，稱(chēng)取蔗糖13.7g，溶于MS溶液中，調(diào)pH至5.8后，定容至100mL，高溫高壓滅菌，4℃冷藏。注：配置時(shí)需戴手套，并在通風(fēng)廚內(nèi)操作。（DS）精密稱(chēng)取蔗糖41.1g溶于MS溶液中，調(diào)pH至5.8后，定容至100mL，高溫高壓滅菌，4℃冷藏。4參考文獻(xiàn)[1]中國(guó)植物志委員會(huì).《中國(guó)植物志》第47(1)卷[M].科學(xué)出版社.1985：004XiaNianhe,PaulA.Gadek.Sapindaceae[M]//FloraOfChinaBeijing:Sci