實(shí)驗(yàn)探究酵母菌數(shù)量變化

關(guān)于實(shí)驗(yàn)探究酵母菌數(shù)量變化第1頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三關(guān)注本實(shí)驗(yàn)中的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：酵母菌的計(jì)數(shù)利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)，是一種常用的微生物計(jì)數(shù)法，也叫做顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。優(yōu)點(diǎn)：直觀、快速。適用于稀釋的菌懸液（或孢子懸液），即液體培養(yǎng)基中菌體的計(jì)數(shù)。此法計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和，又稱為總菌計(jì)數(shù)法。第2頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三酵母菌的計(jì)數(shù)（1）計(jì)數(shù)工具——血球計(jì)數(shù)板實(shí)物圖正面圖側(cè)面圖計(jì)數(shù)室滴液處血球計(jì)數(shù)板是一種專門用于計(jì)算較大單細(xì)胞微生物的一種儀器。計(jì)數(shù)時(shí)，常采用樣方法。第3頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三酵母菌的計(jì)數(shù)（1）計(jì)數(shù)工具——血球計(jì)數(shù)板放大后的計(jì)數(shù)池每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計(jì)數(shù)池。每個(gè)計(jì)數(shù)池分為9個(gè)大方格。第4頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三25個(gè)中格16個(gè)小格16個(gè)中格25個(gè)小格25X16=400小格16X25=400小格每個(gè)計(jì)數(shù)室（大方格）共有400小格，總?cè)莘e為0.1mm3*********抽樣檢測(cè)：5×16=80個(gè)小格抽樣檢測(cè)：4×25=100個(gè)小格第5頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三酵母菌的計(jì)數(shù)（2）計(jì)算：

每毫升培養(yǎng)液中的酵母菌細(xì)胞數(shù)是多少？酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/mL=所數(shù)小方格中細(xì)胞總數(shù)x400x104x稀釋倍數(shù)所數(shù)的小方格數(shù)第6頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三例2:酵母菌的計(jì)數(shù)通常用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行，血球計(jì)數(shù)板每個(gè)大方格容積為0.1mm3，由400個(gè)小方格組成?，F(xiàn)對(duì)某一樣液進(jìn)行檢測(cè)，如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過多，難以計(jì)數(shù)，應(yīng)先

后再計(jì)數(shù)。若多次重復(fù)計(jì)數(shù)后，算得每個(gè)小方格中平均有5個(gè)酵母菌，則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有

個(gè)。例1:在用血球計(jì)數(shù)板（2mm×2mm方格）對(duì)某一稀釋50倍樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，發(fā)現(xiàn)在一個(gè)計(jì)數(shù)室內(nèi)（蓋玻片下的培養(yǎng)液厚度為0.1mm）酵母菌平均數(shù)為16，據(jù)此估算10mL培養(yǎng)液中有酵母菌

個(gè)。2x1072×108稀釋第7頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三例3

檢測(cè)員將1mL水樣稀釋10倍后，用抽樣檢測(cè)的方法檢測(cè)每毫升藍(lán)藻的數(shù)量；將蓋玻片放在計(jì)數(shù)室上，用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計(jì)數(shù)室，并用濾紙吸去多余液體。已知每個(gè)計(jì)數(shù)室由25×16＝400個(gè)小格組成，容納液體的總體積為0．1mm3?，F(xiàn)觀察到圖中該計(jì)數(shù)室所示a、b、c、d、e5個(gè)中格80個(gè)小格內(nèi)共有藍(lán)藻n個(gè)，則上述水樣中約有藍(lán)藻

個(gè)／mL。5n×105

第8頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三酵母菌的計(jì)數(shù)（3）計(jì)數(shù)的操作稀釋：將酵母菌培養(yǎng)液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尲訕悠罚涸谇鍧嵏稍锏难蛴?jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌細(xì)口滴管將稀釋的酵母菌液由蓋玻片邊緣滴入一小滴（將計(jì)數(shù)室充滿即可），讓菌液沿縫隙自行滲入計(jì)數(shù)室。注意不可有氣泡產(chǎn)生。第9頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三（3）計(jì)數(shù)的操作顯微計(jì)數(shù)：靜止5分鐘后，先用低倍鏡（16×10）找到計(jì)數(shù)室所在的位置。然后根據(jù)血球計(jì)數(shù)板規(guī)格，每個(gè)計(jì)數(shù)室選取5個(gè)（或4個(gè)）中方格中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。每個(gè)小方格內(nèi)約有5-10個(gè)菌體為宜。對(duì)于壓在小方格界線上的酵母菌應(yīng)取相鄰兩邊及頂角計(jì)數(shù)。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的值來計(jì)算樣品的含菌量。第10頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三酵母菌的計(jì)數(shù)（4）血球計(jì)數(shù)板的清洗：使用完畢后，將血球計(jì)數(shù)板在水龍頭上用水柱沖洗，切勿用硬刷洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每個(gè)小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。第11頁，共14頁，2023年，2月20日，星期三酵母菌的計(jì)數(shù)（5）注意事項(xiàng)：進(jìn)行計(jì)數(shù)前，應(yīng)先將試管搖勻，目的是使酵母菌在培養(yǎng)液中混合均勻，以減少計(jì)數(shù)誤差。顯微鏡計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)于壓在小方格界線上的酵母菌，應(yīng)取相鄰兩邊及頂角計(jì)數(shù)。若一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌數(shù)量過多，難以數(shù)清時(shí)，則可將培養(yǎng)液稀釋一定倍數(shù)后再計(jì)數(shù)。本實(shí)驗(yàn)無對(duì)照實(shí)驗(yàn)，酵母菌每天的數(shù)量變化可形成前后對(duì)照。血球計(jì)數(shù)板使用后，切勿用硬物洗刷，可采用浸泡和沖洗的方法清洗。第12頁，共14頁，2