血型系統(tǒng)疑難定型及配血不合分析

前言臨床輸血是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中診治疾病，挽救生命的重要醫(yī)療手段。同時，輸血可能引起多種不良反應(yīng)，直接危機到患者生命，稍有不慎將可能發(fā)生無法彌補的過失。所以，每個細小環(huán)節(jié)都必須做到安全、準確、有效。血型鑒定、交叉配血、抗體篩選是輸血前的最后一道防線，要求輸血科從業(yè)人員必須有高度的責(zé)任感、嚴謹?shù)目茖W(xué)作風(fēng)，確保試驗結(jié)果準確無誤。我們在臨床工作中經(jīng)常遇見血型鑒定、交叉配血、抗體篩查不符及各種干擾情況。下面把在血型血清學(xué)臨床實踐中的一點體會做如下匯報，供大家參考。第1頁/共49頁第一頁，共50頁。ABO正定型必備的試劑及意義疑難定型中正定血型所用抗血清抗-A及抗-B抗-AB:確認弱A和弱B抗原,與弱A及弱B抗原親和力強,會產(chǎn)生強反應(yīng)抗-H:用于檢查亞型等,A亞型紅細胞上的H抗原多于正常A型抗-A1:用于A亞型(如A2,A3)檢測第2頁/共49頁第二頁，共50頁。ABO反定型中必備的試劑及意義A及B細胞:確認抗-A或抗-B抗體O型紅細胞:檢查是否存在ABO系統(tǒng)以外抗體自身對照:用于確認正反定型結(jié)果的有效性,排除自身抗體對定型的干擾(如冷凝集等)A2細胞:用于亞型的鑒定,尤其是在懷疑是A亞型且又存在抗-A1抗體的情況下第3頁/共49頁第三頁，共50頁。ABO疑難血型檢測項目正反定型：正定型：-A,-B，-AB,-H,-A1反定型：Ac,Bc,Oc,自身對照型物質(zhì)檢查（唾液）吸收抑制試驗放散試驗家系調(diào)查第4頁/共49頁第四頁，共50頁。吸收抑制試驗原理：本試驗用以間接證明紅細胞上的抗原。如全凝聚或多凝聚細胞無法用標準血清檢查血型，但紅細胞加入血清后，若有相應(yīng)抗原，便吸收血清中抗體。吸收后的血清再用相應(yīng)紅細胞測定效價并與吸收前血清效價比較。當(dāng)血清效價顯著下降或不凝聚相應(yīng)紅細胞時，便可證明受檢紅細胞含有這一抗原，間接推測受檢紅細胞的血型第5頁/共49頁第五頁，共50頁。放散試驗原理：抗體與相應(yīng)的抗原在適合條件下發(fā)生凝聚或致敏但這種結(jié)合是可逆的，如改變某些物理條件時抗體又可以從結(jié)合的紅細胞上解脫下來。通過檢測放散出來的抗體，可以證明弱A或弱B抗原的存在。可根據(jù)需要決定方法第6頁/共49頁第六頁，共50頁。型ABH物質(zhì)測定意義原理：某些血型抗原以可溶解形式存在于血清、血漿、唾液、尿液等體液中，稱為可溶性血型物質(zhì)；有分泌型和非分泌型之分.A型人唾液含A型物質(zhì)、B型含B物質(zhì)、AB型含A及B物質(zhì)。H型在A、B、O、AB四型均存在，但以O(shè)型人含量最多。唾液中血型物質(zhì)為多糖類－－半抗原，能特異地與相應(yīng)抗體結(jié)合，從而抑制該抗體與相應(yīng)紅細胞發(fā)生凝聚。意義：可作為判斷血型的輔助依據(jù)?？设b定抗體性質(zhì)。第7頁/共49頁第七頁，共50頁。O型篩選紅細胞的應(yīng)用抗原組成:三組合細胞,要求必須具備全部的Rh因子I:O型(CDe/Cde);II:O型(cDE/cDE);III:O型(cde/cde)

用途:用于受血者、獻血員及孕產(chǎn)婦等的ABO系統(tǒng)以外不規(guī)則抗體的篩選目的:在配血之前,有針對性、病人相配合的血第8頁/共49頁第八頁，共50頁。自身冷凝集血樣的ABO定型正定型用紅細胞的準備:血樣采集后,立即離心,獲得壓積紅細胞用37℃溫鹽水洗滌紅細胞45℃熱放散3分鐘巰基試劑處理(或2-ME):破壞IgM第9頁/共49頁第九頁，共50頁。獲得性B及多凝集現(xiàn)象獲得性B:腸紊亂及感染病人,細菌酶影響A抗原的受體腸內(nèi)壁通透性增加,而后細菌多糖吸附在紅細胞表面特點：1、因紅細胞上的類B抗原是獲得的，病情好轉(zhuǎn)，類B消失。2、AB型人血清中一般沒有抗體，而類B一般是A型紅細胞獲得的，所以血清中沒有抗B抗體。3、多凝聚現(xiàn)象:異?；蜃冃蔚腞BC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隱蔽受體(多凝集血樣中的血清不與自身反應(yīng))第10頁/共49頁第十頁，共50頁。獲得類B解決辦法詢問病史：是否有腸道感染用自身血清檢查紅細胞，獲得性類B抗原其血清不凝聚自身紅細胞。唾液型物質(zhì)檢測：如是分泌型，其唾液只含有A物質(zhì)而不含B物質(zhì)

第11頁/共49頁第十一頁，共50頁。ABO正反定型不符事例-A -B -AB Ac Bc Oc

自身

- - - - - - -可能血型:O新生兒或老年人,丙球蛋白缺乏或服用免疫抑制劑解決方案:檢查年齡及丙球水平,室溫30分鐘或4度15分鐘第12頁/共49頁第十二頁，共50頁。ABO正反定型不符事例-A -B -AB Ac Bc Oc 自身4+- 4+ 1+ 4+ - -可能血型:亞型,可能是A2型有抗-A1解決方案:使用抗-A1血清鑒定第13頁/共49頁第十三頁，共50頁。ABO正反定型不符事例-A -B -AB Ac Bc Oc 自身4+4+ 4+ 2+ 2+ 2+ 2+可能血型:AB型，但有緡錢形成(多發(fā)骨髓瘤,白蛋白:球蛋白比例失調(diào),血漿蛋白紊亂),冷自家抗體(AB型有抗-I),解決方案:洗滌紅細胞(鹽水替代試驗),自家吸收第14頁/共49頁第十四頁，共50頁。ABO正反定型不符事例-A -B -AB Ac Bc Oc 自身4+- 4+ - 4+ 3+ -可能血型:A1可能有抗-H解決方案:使用抗-A1確認A抗原,抗-H驗證H抗原第15頁/共49頁第十五頁，共50頁。ABO正反定型不符事例

-A -B -AB Ac Bc Oc 自身3+4+ 4+ 1+ - - -可能血型:AB亞型,可能是A2B有抗-A1解決方案:使用抗-A1第16頁/共49頁第十六頁，共50頁。ABO正反定型不符事例-A-B-ABAcBcOc自身4+2+4+-4+--可能血型:A型有獲得性B原解決方案:詢問病史,用酸化的抗-B(pH6.0)檢查第17頁/共49頁第十七頁，共50頁。ABO正反定型不符事例-A-B-ABAcBcOc自身4+4+4+2+-2+-可能血型:AB型有同種抗體解決方案:進行抗體篩選及抗體鑒定第18頁/共49頁第十八頁，共50頁。ABO正反定型不符事例

-A -B -AB Ac Bc Oc 自身

+ + + 4+ 4+ + +可能血型:O型有問題抗體或有輸血反應(yīng),引起RBC包被抗體解決方案:直接抗球蛋白試驗及抗體鑒定第19頁/共49頁第十九頁，共50頁。ＡＢＯ定型不一致的原因分析（一）

弱反應(yīng)或缺失抗體１、新生兒２、老人３、低球蛋白癥的白血病人４、低球蛋白的淋巴瘤病人（惡性）５、使用免疫抑止藥物而導(dǎo)致低球蛋白的病人６、先天丙球缺乏的病人７、免疫缺陷病人８、骨髓移植病人（由于治療導(dǎo)致球蛋白缺乏，且移植入的骨髓制造另一群紅細胞９、雙胞胎嵌合體第20頁/共49頁第二十頁，共50頁。弱或缺失抗體導(dǎo)致的正反定型不符

正定型反定型抗Ａ抗Ｂ抗ＡＢＡ細胞Ｂ細胞－３＋４＋－－

＊：可能血型：Ｂ（老年人）第21頁/共49頁第二十一頁，共50頁。ＡＢＯ定型不一致的原因分析（二）弱反應(yīng)或缺失抗原１、Ａ亞型、Ｂ亞型或ＡＢ亞型２、白血病導(dǎo)致Ａ或Ｂ抗原減弱３、何杰金病（Hodgkin’s）有時會抑制抗原表達，與白血病類似４、由于某種疾病（如腹腔癌、胰腺癌）導(dǎo)致血漿中存在大量的型物質(zhì)，中和抗－Ａ或抗－Ｂ抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。通過洗滌紅細胞可解決此問題。５、獲得性Ｂ

6、抗－Ａ或抗－Ｂ試劑中存在低頻抗原的抗體第22頁/共49頁第二十二頁，共50頁。白血病人的血型血清定型的典型反應(yīng)

正定型反定型自身

病人血型抗Ａ，抗Ｂ，抗ＡＢＡ細胞，Ｂ細胞，O細胞Ａ+－2+３＋－－Ｂ－±/＋＋４＋－－第23頁/共49頁第二十三頁，共50頁。ABO定型不一致的原因分析（三）

蛋白或血漿不正常引起的正反定型不符1、某些疾病導(dǎo)致球蛋白水平增高（多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、Hodgkin’s淋巴瘤）引起緡錢狀凝集，纖維蛋白原水平的增高也會引起緡錢狀凝集，導(dǎo)致假陽性凝集。（洗滌紅細胞）２、血漿增溶劑（葡聚糖、PVP）也會引起緡錢狀凝集。（洗滌紅細胞）第24頁/共49頁第二十四頁，共50頁。緡錢狀假凝集特點：①在顯微鏡下紅細胞膜完整，細胞間界限清洗地成緡錢串聚集。②緡錢狀假凝集反應(yīng)不受溫度影響，室溫與37℃結(jié)果一樣。解決方法：被檢細胞先用鹽水洗滌后再作配血試驗第25頁/共49頁第二十五頁，共50頁。緡錢狀凝集引起的正反定型不符

正定型反定型自身

抗Ａ抗Ｂ抗ＡＢＡ細胞Ｂ細胞O細胞

４＋２＋４＋２＋４＋2+－第26頁/共49頁第二十六頁，共50頁。ABO定型不一致的原因分析（四）

其他原因引起的正反定型不符１、多凝集：當(dāng)病人感染細菌或病毒后，病毒或細菌產(chǎn)生的酶使紅細胞上掩蔽的Ｔ抗原暴露激活，由于正常人血清中都含有抗－Ｔ抗體，因此可與正常人血清產(chǎn)生凝集反應(yīng)，正定型試驗假陽性。（利用植物凝集素解決）２、冷自身抗體引起的自家凝集反應(yīng)：正反定型均可出現(xiàn)假陽性（自身吸收及巰基試劑處理）３、存在 ABO系統(tǒng)的意外抗體：如A2或A2B個體血清中可能存在天然抗－Ａ1，導(dǎo)致反定型試驗多出抗體。第27頁/共49頁第二十七頁，共50頁。ABO定型不一致的原因分析（四）

其他原因引起的正反定型不符４、被檢者血清中存在ABO系統(tǒng)以外的同種抗體，反定型時出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。（譜細胞鑒定抗體特異性）５、非抗－Ａ及抗－Ｂ的抗體與相應(yīng)抗原形成復(fù)合體吸附在紅細胞表面，引起正定型非特異性凝集。第28頁/共49頁第二十八頁，共50頁。ABO定型不一致的原因分析（五）

技術(shù)方面的原因引起的正反定型不符標準血清方面的原因：血清抗體效價過低、保存不當(dāng)細菌污染、試驗器皿不干凈等。操作方面的原因：紅細胞濃度、血清與紅細胞的比例不當(dāng)、離心過度或離心不足。錯誤的記錄。第29頁/共49頁第二十九頁，共50頁。Ｔ抗原活化引起正反定型不符

正定型反定型自身抗Ａ抗Ｂ抗ＡＢＡ細胞Ｂ細胞O細胞２＋１＋４＋４＋４＋－－

＊：可能血型：Ｏ在人的紅細胞上有一種不活動的T抗原，血清中又存在一種抗T抗體，正常時不會發(fā)生凝聚。但某些細菌或細菌酶污染紅細胞后，能激活原來不活動的T抗原，使成為有活性的T抗原，此時遇到抗T抗體，便與任何人的血清都能凝聚，所有把被激活的T抗原細胞叫全凝集細胞。第30頁/共49頁第三十頁，共50頁。自身冷抗體引起的正反定型不符

正定型反定型自身抗Ａ抗Ｂ抗ＡＢＡ細胞Ｂ細胞O細胞２＋４＋４＋４＋３＋２＋２＋＊：可能是Ｂ型第31頁/共49頁第三十一頁，共50頁。自身溫抗體或輸血反應(yīng)引起細胞

包被抗體導(dǎo)致的正反定型不符

正定型反定型自身抗Ａ抗Ｂ抗ＡＢＡ細胞Ｂ細胞O細胞＋＋＋４＋４＋１＋１＋＊：可能血型Ｏ第32頁/共49頁第三十二頁，共50頁。亞型抗體引起的正反定型不符

正定型反定型自身抗Ａ抗Ｂ抗ＡＢＡ細胞Ｂ細胞O細胞４＋４＋４＋１＋－－－＊：可能血型A2B抗A1抗體第33頁/共49頁第三十三頁，共50頁。

疑難配血及原因分析

第34頁/共49頁第三十四頁，共50頁。常規(guī)配血技術(shù)選擇的技術(shù)不僅要能檢查出不配合的IgM抗體，還必須能檢查出盡可能多的不配合的IgG抗體。最大限度的減少抗體的漏檢。立即離心技術(shù)配血法：用于檢查ABO的不配合及室溫反應(yīng)活性抗體引起的不配合。抗人球蛋白配血法：用于檢查不規(guī)則抗體(IgG)引起的交叉配血不配合。第35頁/共49頁第三十五頁，共50頁。特殊配血技術(shù)預(yù)溫配血技術(shù)：主要用于解決室溫反應(yīng)活性的無臨床意義的抗體引起的交叉配血不配合。冷型自家溶貧病人的配血試驗，用于解決自身冷凝集引起的配血困難。溫型自家溶貧病人的配血試驗，用于解決自身溫抗體引起的配血困難。纖原未完全析出的血樣，如腎透析、凝血功能差的病人，在配血時引起假陽性。－－－

第36頁/共49頁第三十六頁，共50頁。主側(cè)交叉配血不相合的原因病人或供血者ABO定型不正確，或二者的ABO血型不配合。病人血清中存在同種抗體，與供血者紅細胞上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。病人血清中存在自身抗體，與供血者紅細胞上的相應(yīng)抗原反應(yīng)。第37頁/共49頁第三十七頁，共50頁。主側(cè)交叉配血不相合的原因供血者紅細胞上已經(jīng)包被了抗體，導(dǎo)致抗球蛋白試驗陽性。病人血清不正常，如白蛋白／球蛋白比例不正常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合物的血漿擴容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗來解決）。試驗系統(tǒng)被污染。第38頁/共49頁第三十八頁，共50頁。次測交叉配血不相合的原因（一）供血者血漿中存在針對病人紅細胞抗原的抗體。病人與供血者的ABO血型不相合。病人的紅細胞已經(jīng)包被了抗體，直接抗人球蛋白試驗陽性。第39頁/共49頁第三十九頁，共50頁。主側(cè)配血不相符原因分析（一）現(xiàn)象

可能原因解決方案主側(cè)：＋病人或供血者ABO錯誤重新定型自身：—

病人血清可能含ABO抗體檢查病人亞型、輸血/移植史抗體篩選：—

病人血清中有抗體，但篩選對病人血清進行抗體鑒定細胞上無相應(yīng)抗原供血者紅細胞直接抗球蛋白檢查供血者直接抗球蛋白試驗試驗陽性

第40頁/共49頁第四十頁，共50頁。主側(cè)配血不相合原因的分析（二）現(xiàn)象可能原因解決方案主側(cè)：＋自身：—抗體篩選：+病人血清中的同種抗體與供血者紅細胞上相應(yīng)抗原反應(yīng)病人血清進行抗體鑒定選擇無對應(yīng)抗原的血主側(cè)：＋自身：＋抗體篩選：+病人血清中可能同時存在自身抗體和同種抗體病人血清不正常白蛋白/球蛋白比例不正常使用血漿擴容物樣本被污染對病人血清自身吸收及體鑒定，用吸收后血清配血鹽水添加法解決緡錢凝集抽取新樣本使用新器具第41頁/共49頁第四十一頁，共50頁。溫型自家溶貧病人的配血對WAIHA病人最好避免輸血，必須輸血時，應(yīng)給以維持足夠攜氧能力的最少量的紅細胞。由于找不到血清學(xué)配合的血液，確實存在著由伴隨的同種抗體引起嚴重的溶血性輸血反應(yīng)的危險。因此除非病人的生命處在危險中，否則應(yīng)該盡量避免輸血。在交叉配血時應(yīng)該遵循下列規(guī)程：用單特異性的抗－IgG與抗－C3抗人球蛋白確定WAIHA是補體還是IgG引起。如果存在IgG引起的WAIHA，則應(yīng)該用試劑譜細胞鑒定抗體的特異性（包括自身抗體及同種抗體）。如果能鑒定出同種抗體或自身抗體的特異性，則用缺少相應(yīng)抗原的獻血員紅細胞作交叉配血。如果同種抗體被排除而所有交叉配血是不相合的，則選擇凝集反應(yīng)強度弱于自身對照的血液供輸血使用。第42頁/共49頁第四十二頁，共50頁。冷型自家溶貧病人的配血使用預(yù)溫間接抗人球蛋白方法配血如果冷自身抗體效價很高，則需要對病人的血清進行處理，用處理后血清配血：