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環(huán)素。PCR酶的酶切位點(diǎn),其中切割位點(diǎn)一樣的酶不重復(fù)標(biāo)注。請(qǐng)答復(fù)以下問(wèn)題:【考點(diǎn)定位】基因工程,限制酶,連接酶,重組質(zhì)?!久麕燑c(diǎn)睛】此題是對(duì)基因工程的考察,解答此題的關(guān)鍵在于理解重組質(zhì)粒中標(biāo)記基因的作用,在插入目的基因時(shí)不能破壞標(biāo)記基因,應(yīng)選擇限制酶須留意;PCR方向相反;限制酶具有特異性,不同的限制酶識(shí)別不同的序列,推斷某種限制酶能否切割某片段,應(yīng)依據(jù)該用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒,應(yīng)選用 兩種限制酶切割,酶切后的載體和目的基因片段,通過(guò) 酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒,需將其轉(zhuǎn)入處的大腸桿菌。為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌,應(yīng)在篩選平板培育基中添加 ,平板上長(zhǎng)出的菌落,常用PCR鑒定,所用的引物組成為圖2中 。假設(shè)BamHI酶切的DNA末端與BclI酶切的DNA末端連接,連接部位的6個(gè)堿基對(duì)序列為 ,對(duì)于該部位,這兩種酶 〔填“都能“都不能”或“只有一種能〕切開。假設(shè)用Sau3AI切圖1質(zhì)粒最多可能獲得 種大小不同的DNA片段?!敬鸢浮?〕BclI和HindⅢ連接感受〔2〕四環(huán)素 引物甲和引物丙〔3〕 都不能 〔4〕7〔2〕為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌,依據(jù)質(zhì)粒上的抗性基因,應(yīng)在篩選平板培育基中添加四

片段中是否含有限制酶的識(shí)別序列。2.〔20231.40〕某一質(zhì)粒載體如下圖,外源DNAAmprTetr中會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活A(yù)mprTer表示四環(huán)素抗性基因BamHIBamHI酶切獲得的目的基因混合,參加DNA菌有的未被轉(zhuǎn)化,有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌。答復(fù)以下問(wèn)題:質(zhì)粒載體作為基因工程的工具,應(yīng)具備的根本條件有 〔答出兩點(diǎn)即可。而作為基因表達(dá)載體,除滿足上述根本條件外,還需具有啟動(dòng)子和終止子。假設(shè)用含有氨芐青霉素的培育基進(jìn)展篩選,在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中,未被轉(zhuǎn)化的和僅含有環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的,其緣由是 ;并且 和 細(xì)胞也是不能區(qū)分的,其緣由是 。在上述篩選的根底上,假設(shè)要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落,還需使用含有是 的固體培育基?;蚬こ讨?,某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體,其DNA復(fù)制所需的原料來(lái)自于 〔1〕能夠自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)〔答出兩點(diǎn)即可〕二者均不含氨芐青霉素抗性基因,在該培育基上都不能生長(zhǎng) 含有質(zhì)粒載體 含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒〔或答含有重組質(zhì)?!?二者都含氨芐青霉素抗性基因,在該培育基上均能生長(zhǎng)四環(huán)素受體細(xì)胞

經(jīng)BamHI酶切割得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被 酶切后的產(chǎn)物連接,理由是 。基因的重組子,如圖〔c〕所示。這三種重組子中,不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有 ,不能表達(dá)的緣由是 。DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶,常見的有 和 ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是 ?!究键c(diǎn)定位】基因工程【名師點(diǎn)睛】此題以圖文結(jié)合的形式,綜合考察同學(xué)對(duì)基因工程技術(shù)的熟記和理解力氣。解決此類問(wèn)題的關(guān)鍵是,熟記并理解相關(guān)的根底學(xué)問(wèn)、形成學(xué)問(wèn)網(wǎng)絡(luò),從題圖中挖掘出隱含的信息,據(jù)此結(jié)合每個(gè)

【答案〔1〕Sau3AⅠ 兩種梅切割后產(chǎn)生的片段具有一樣的黏性末端甲和丙 甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游, 丙中目的基因插入在終止子的下游,兩者目的基因均不能轉(zhuǎn)錄E·coliDNA連接酶 TDNA連接酶 TDNA連接酶4 4問(wèn)題情境進(jìn)展圖文轉(zhuǎn)換、實(shí)現(xiàn)對(duì)學(xué)問(wèn)的整合和遷移。3.〔2023.40〕圖〔a〕中的三個(gè)DNAEcoRI、BamHISau3AI種限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn),圖〔b〕為某種表達(dá)載體示意圖〔載體上的EcoRI、Sau3AI的切點(diǎn)是唯一的〕?!究键c(diǎn)定位】基因工程的原理及技術(shù)【名師點(diǎn)睛】1.確定限制酶的種類依據(jù)基因工程的有關(guān)學(xué)問(wèn),答復(fù)以下問(wèn)題:A.人血細(xì)胞啟動(dòng)子 B.水稻胚乳細(xì)胞啟動(dòng)子C.大腸桿菌啟動(dòng)子D.農(nóng)桿菌啟動(dòng)子〔3〕利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過(guò)程中需添加酚類物質(zhì)其目的是 。依據(jù)目的基因兩端的限制酶切點(diǎn)確定限制酶的種類①應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶,如圖甲可選擇PstⅠ。②不能選擇切點(diǎn)位于目的基因內(nèi)部的限制酶,如圖甲不能選擇SmaⅠ。③為避開目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和任憑連接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒,如圖甲也可選擇用PstEcoRⅠ兩種限制酶(但要確保質(zhì)粒上也有這兩種酶的切點(diǎn))。依據(jù)質(zhì)粒的特點(diǎn)確定限制酶的種類①所選限制酶要與切割目的基因的限制酶相全都,以確保具有一樣的黏性末端。SmaⅠ會(huì)破壞標(biāo)記基因;假設(shè)所選酶的切點(diǎn)不止一個(gè),則切割重組后可能喪失某些片段,假設(shè)喪失的片段含復(fù)制起點(diǎn)區(qū),則切割重組后的片段進(jìn)入受體細(xì)胞后不能自主復(fù)制。2.基因表達(dá)載體中啟動(dòng)子、終止子的來(lái)源假設(shè)目的基因是從自然界中已有的物種中分別出來(lái)的,在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),不需要在質(zhì)粒上目的基因的前后端接上特定的啟動(dòng)子、終止子,由于目的基因中已含有啟動(dòng)子、終止子。假設(shè)目的基因是通過(guò)人工方法合成的,或通過(guò)cDNA的。假設(shè)只將基因的編碼序列導(dǎo)入受體生物中,目的基因沒有啟動(dòng)子、終止子,是無(wú)法轉(zhuǎn)錄的,因此,在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),需要在與質(zhì)粒結(jié)合之前,在目的基因的前后端接上特定的啟動(dòng)子、終止子。(12(HSA)基因工程技術(shù)獵取重組HSA〔rHSA〕的兩條途徑。獵取HSA基因,首先需采集人的血液,提取 合成總cDNA,然后以cDNA為模板,承受PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。以下圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向,請(qǐng)用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向。啟動(dòng)子通常具有物種及組織特異性,構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體,需要選擇的啟動(dòng)子是 〔填寫字母,單項(xiàng)選擇。

人體合成的初始HSA多肽需要經(jīng)過(guò)膜系統(tǒng)加工形成正確的空間構(gòu)造才能有活性與途徑II相比,選擇途徑I獵取rHSA的優(yōu)勢(shì)是 。為證明rHSA具有醫(yī)用價(jià)值,須確認(rèn)rHSA與 的生物學(xué)功能全都?!?2分〔〕總RNA〔或mRN〕〔2〕B吸引農(nóng)桿菌移向水稻受體細(xì)胞,有利于目的基因成功轉(zhuǎn)化水稻是真核生物,具有膜系統(tǒng),能對(duì)初始rHSAHAS【考點(diǎn)定位】此題考察基因工程相關(guān)內(nèi)容?!久麕燑c(diǎn)睛】此題結(jié)合生產(chǎn)rHSA細(xì)胞的選擇、目的基因的檢測(cè)與鑒定。屬于簡(jiǎn)潔題。解題關(guān)鍵是明確PCR置和合成子鏈的方向相反。5.〔2023課標(biāo)2卷.40)〔15分〕以下圖表示通過(guò)核移植等技術(shù)獲得某種克隆哺乳動(dòng)物〔二倍體〕的流程。答復(fù)以下問(wèn)題:圖中A表示正常細(xì)胞核,染色體數(shù)為2n,則其性染色體的組成可為 。過(guò)程①表示去除細(xì)胞核,該過(guò)程一般要在卵母細(xì)胞培育至適當(dāng)時(shí)期再進(jìn)展,去核時(shí)常承受 的方法。②代表的過(guò)程是 。經(jīng)過(guò)屢次傳代后,供體細(xì)胞中 的穩(wěn)定性會(huì)降低,因此,選材時(shí)必需關(guān)注傳代次數(shù)。假設(shè)獲得的克隆動(dòng)物與供體動(dòng)物性狀不完全一樣,從遺傳物質(zhì)的角度分析其緣由。與克隆羊“多莉〔利〕”培育成功一樣,其他克隆動(dòng)物的成功獲得也證明白 。【答案】〔15分〕〔1〕XX或XY 顯微操作〔去核法〕 胚胎移植遺傳物質(zhì)卵母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會(huì)對(duì)克隆動(dòng)物的外形產(chǎn)生影響已經(jīng)分化的動(dòng)物體細(xì)胞核具有全能性?!究键c(diǎn)定位】核移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培育技術(shù)、胚胎移植【名師點(diǎn)睛】此題以“獲得某種克隆哺乳動(dòng)物〔二倍體〕的流程圖”為情境,綜合考察同學(xué)對(duì)核移植技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培育技術(shù)、胚胎移植的熟記和理解力氣。解決此類問(wèn)題的關(guān)鍵是,熟記并理解相關(guān)的根底學(xué)問(wèn)、形成學(xué)問(wèn)網(wǎng)絡(luò)對(duì)學(xué)問(wèn)的整合和遷移。6.〔2023.31〕基因工程又稱為DNA在基因工程中,獵取目的基因主要有兩大途徑,即 和從 中分別。有的基因數(shù)目比基因組文庫(kù)中的少,其緣由是 。在基因表達(dá)載體中,啟動(dòng)子是 聚合酶識(shí)別并結(jié)合的部位。假設(shè)承受原核生物作為基因表達(dá)載

體的受體細(xì)胞,最常用的原核生物是 。將目的基因通過(guò)基因槍法導(dǎo)入植物細(xì)胞時(shí)常用的攜帶目的基因的金屬顆粒有 和 顆粒。〔15〕人工合成 生物材料〔每空2分,共4分,其他合理答案可酌情給分〕cDNA〔或已表達(dá)〕的基因,而基因組文庫(kù)中含有該植物的全部基因分,其他合理答案可酌情給分〕RN2分〕 大腸桿菌〔或答細(xì)菌2分〕金粉 鎢粉〔每空1分,共2分〕【考點(diǎn)定位】基因工程〔1〕目的基因的獵取有從基因文庫(kù)中獵取和人工合成兩類方法。基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因。目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法;導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用顯微注射技術(shù),導(dǎo)入微生物細(xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法。7.〔2023〕答復(fù)以下有關(guān)遺傳信息傳遞與表達(dá)的問(wèn)題。27PZHZ11〔3.6kb,1kb=1000〕中,lacZ基因編碼β-半乳糖苷酶,后者催化生成的化合物能將白色的大腸桿菌染成藍(lán)色。假設(shè)先用限制酶BamHIpZHZ11,然后滅活BamHIDNA入足夠數(shù)量的大腸桿菌細(xì)胞中,則含3.1kb3.6kb假設(shè)將兩端分別用限制酶BamHIBglHIpZHZ110.5kbBamHI4.9kbkb。4.9kbBamHIEcoRI1.7kb3.2kbDNAkbkbDNA假設(shè)將人的染色體DNA入植物細(xì)胞中表達(dá),最終將產(chǎn)物的藥物蛋白注入小鼠體內(nèi)觀看其生物功能是否發(fā)揮,那么上述過(guò)程屬于

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