鹽析法分離蛋白質專業(yè)課件

第4章鹽析法知識點：鹽析法，等電點沉淀法，有機溶劑沉淀法，選擇性變性沉淀法，金屬離子沉淀法。重點：上述幾種沉淀方法的概念、原理及其適用范圍；鹽析法的影響因素對沉淀效果的影響，并能根據(jù)實際情況予以靈活應用和選擇。難點：常用沉淀方法的靈活運用。1沉淀定義沉淀特點應用范圍沉淀分類1.沉淀法概述2鹽析法

有機溶劑沉淀法選擇性變性沉淀法等電點沉淀法離子型聚合物沉淀法聚電解質沉淀法高價金屬離子沉淀法沉淀法分類3活性蛋白非活性蛋白理化性質溶解度提取方法蛋白質的理化性質的回顧

4鹽析沉淀步驟加沉淀劑方式陳化條件脫鹽處理2.鹽析沉淀5鹽析機理示意圖678①鹽離子與蛋白質分子爭奪水分子，降低了用于溶解蛋白質的有效水量，減弱了蛋白質的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導致蛋白質溶解度下降；②鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質溶解度下降；③鹽離子引起原本在蛋白質分子周圍有序排列的水分子的極化，使水活度降低。鹽析的機理9Cohn方程式logS=β-KsIKs鹽析β鹽析二次鹽析鹽析沉淀基礎109、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:50:13PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3圖1碳氧血紅蛋白的溶解度與硫酸銨離子強度的關系圖129、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:50:13PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2023/2/32023/2/303February202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/3不同蛋白質的溶解度曲線14蛋白質的鹽析分布曲線15溶解度曲線(a)和鹽析分布曲線(b)

16對β影響對Ks影響鹽種類鹽濃度溫度pH值鹽析影響因素17無機鹽種類的影響圖7不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強度的關系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)NH4)SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)檸檬酸三鈉18溫度的影響19pH對β的影響20蛋白質起始濃度的影響21二次鹽析22鹽析操作233等電點沉淀實例①從豬胰臟中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI＝8.9，可先于pH3.0左右進行等電點沉淀，除去共存的許多酸性蛋白質(pI=3．O)。工業(yè)生產(chǎn)胰島素(pI＝5.3)時，先調pH至8.0除去堿性蛋白質，再調pH至3.0除去酸性蛋白質(同時加入一定濃度的有機溶劑以提高沉淀效果)。②堿性磷酸酯酶的pI沉淀提取：發(fā)酵液調pH4.0后出現(xiàn)含堿性磷酸酯酶的沉淀物，離心收集沉淀物。用pH9.0的0.1mol/LTris-HCl緩沖液重新溶解，加入20～40%飽和度的硫酸銨分級，離心收集的沉淀Tris-HCl緩沖液再次沉淀，即得較純的堿性磷酸酯酶。244有機溶劑沉淀原理圖25有機溶劑沉淀實例26酵母干粉中加入0.066mol/L磷酸氫二鈉溶液，37℃水浴保溫2h，室溫攪拌3h，離心收集上清液，升溫至55℃，保溫20min后迅速冷卻離心去除熱變性蛋白，上清液中多為熱穩(wěn)定性較高的醇脫氫酶。5選擇性熱變性沉淀實例27（1）非離子型聚合物沉淀法（2）聚電解質沉淀法（3）金屬離子沉淀法（4）親和沉淀6其他沉淀法28凝聚技術絮凝技術7凝聚和絮凝技術29第五章沉淀法課后練習名詞解釋：

鹽析法，有機溶劑沉淀法，選擇性變性沉淀法，等電點沉淀法，鹽溶，鹽析，β鹽析，Ks鹽析，二次鹽析鹽析的機理

有機溶劑沉淀的機理

二次鹽析如何實現(xiàn)？

309、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。***2/3/20234:50:14PM11、人總是珍惜為得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。***Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一個人炫耀什么，說明他內心缺少什么。。二月23*03-2月-23*03February202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。**2/3/202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。***03-2月-23謝謝大家319、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20234:50:14PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一