臨床免疫學(xué)檢驗：13 Ⅲ型超敏反應(yīng)及檢測

Ⅲ型超敏反應(yīng)及檢測

P267當(dāng)Ag在體內(nèi)持續(xù)存在或由微生物與宿主細(xì)胞不斷釋放入細(xì)胞外液時，可引起特異性Ab產(chǎn)生，從而形成免疫復(fù)合物。一.免疫復(fù)合物含義及形成：（一）含義：immunecomplex,IC它主要指AgAb復(fù)合物及AgAbC復(fù)合物兩種。（二）IC的形成：1.Ag持續(xù)存在于體內(nèi)：（產(chǎn)生Ab，形成AgAb或AgAbC）感染：是Ag持續(xù)存在于體內(nèi)的最常見原因，如細(xì)菌、病毒、寄生蟲感染；組織Ag：自身組織的部分成分如DNA、IgG等發(fā)生變異；外源性Ag：在生活、工作環(huán)境中接觸的外來性物質(zhì)如粉塵、藥物等；腫瘤Ag：如白血病等2.IC的清除受阻：形成的IC一般分為大分子IC、中等大小的IC及小分子IC三種：大分子IC：沉降系數(shù)為19S，MW>100萬，易被巨噬細(xì)胞吞噬而清除；小分子IC：可溶性，沉降系數(shù)<6.6S，MW<50萬，易被腎小球濾過而排除；中等大小的IC：沉降系數(shù)在8.8S－19S間，MW在50－100萬間，既不易被巨噬細(xì)胞吞噬也不易被腎小球濾過，而沉積在血管壁或腎小球基底膜處，形成免疫復(fù)合物病。二.免疫復(fù)合物?。海ㄒ唬┲虏C(jī)理：中等大小的IC沉積在體內(nèi)，通過激活補(bǔ)體、激活血小板、中性粒細(xì)胞作用而致病。激活補(bǔ)體：激活C3a、C5a、C567→趨化嗜中性粒細(xì)胞→釋放溶酶體酶→引起組織損傷；激活C3a、C5a（過敏毒素）→作用于肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞→釋放血管活性介質(zhì)→血管通透性增加→引起組織水腫；

激活血小板：與血小板上的IgGFc受體結(jié)合→使血小板聚集→微血栓形成→局部出血缺血、壞死中性粒細(xì)胞作用：中性粒細(xì)胞在吞噬IC同時，釋放蛋白水解酶、膠原酶等，使血管基底膜及周圍組織損傷常見病損部位血管、腎臟、肺部、關(guān)節(jié)、皮膚（二）所致疾病內(nèi)臟毛細(xì)血管炎：如急性腎小球腎炎、變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎、潰瘍性結(jié)腸炎關(guān)節(jié)炎：風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；皮膚：皮膚炎、脈管炎；全身：SLE血清病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎體內(nèi)變性IgG刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體(稱為類風(fēng)濕因子,IgM類)，形成IC，沉積于全身小關(guān)節(jié)滑膜處，引起小關(guān)節(jié)紅腫、變形、僵直、失去運動功能。系統(tǒng)性紅斑狼瘡

細(xì)胞核物質(zhì)(如DNA、RNA、核內(nèi)可溶性蛋白)刺激機(jī)體產(chǎn)生抗核抗體，形成IC，沉積于周身毛細(xì)血管、關(guān)節(jié)滑膜、心臟瓣膜等處，引起全身性損傷。三.IC檢測方法的分類：有兩種

(一)局部組織中IC的檢測：制備局部組織切片，用光學(xué)顯微鏡或電鏡檢測IC所致典型病理改變；或用IF、免疫酶技術(shù)檢測IC在組織中的沉著。（二）循環(huán)中IC的檢測：

Circleimmunecomplex，簡稱CIC。

1.抗原特異性方法：利用IC中Ag的特異性而設(shè)計的方法，特異性強(qiáng)。但由于每一種Ag性質(zhì)不同，就需不同的方法檢測，造成檢測方法不統(tǒng)一，因此臨床上不常用。2.抗原非特異性方法：利用CIC與游離的Ag或Ab相比較，在物理性質(zhì)、生物學(xué)活性上的差異而設(shè)計的方法。CIC檢測方法大致分為兩類：根據(jù)物理性質(zhì)上的差異而設(shè)計的方法：A.根據(jù)CIC與游離的Ag或Ab分子大小不同而設(shè)計的方法：凝膠過濾超濾法、蔗糖密度超速離心法B.根據(jù)CIC與游離的Ag或Ab溶解度不同而設(shè)計的方法：聚乙二醇（PEG）沉淀試驗根據(jù)生物學(xué)性質(zhì)的差異而設(shè)計的方法：A.根據(jù)C1q+CIC（AgAb)而設(shè)計的方法：抗補(bǔ)體試驗、C1q結(jié)合試驗；B.根據(jù)IgGFc受體＋CIC（AgAb)而設(shè)計的方法：血小板凝集試驗；C.根據(jù)C3b受體＋CIC（AgAbC)而設(shè)計的方法：Raji細(xì)胞試驗四.IC檢測方法概述：1.聚乙二醇（PEG）比濁試驗：原理：PEG為水溶性多聚體，在3％-4％低濃度時，能使IC沉降下來。方法：PEG＋待測血清

↓

使PEG終濃度達(dá)到3－4％

↓4℃過夜離心，取出沉淀

↓

將沉淀用NaOH溶解

↓在721分光光度計上測OD值優(yōu)缺點：該試驗不但可檢測IC，還可獲得IC（收集沉淀），簡單，快速；特異性差，易受血清中大分子物質(zhì)干擾；常作為IC檢測的粗篩試驗2.抗補(bǔ)體試驗：原理：C1q+IC方法：豚鼠血清（其中含有C1q)+待測血清(56°1h滅活其中補(bǔ)體）↓再加入EA（致敏羊紅細(xì)胞）↓

不溶血溶血（IC陽性）（IC陰性）優(yōu)缺點：該試驗敏感，干擾因素多，易出現(xiàn)假陽性凡引起補(bǔ)體失活的原因都可引起假陽性，因此豚鼠血清必須保持新鮮；待測血清在56°1h滅活補(bǔ)體時，對其中的Ig構(gòu)型有改變，易引起Ig聚集，它可代替IC而與C1q結(jié)合，出現(xiàn)抗補(bǔ)體活性。3.C1q結(jié)合試驗：原理：C1q＋I(xiàn)C方法：待測血清（滅活補(bǔ)體）＋同位素標(biāo)記的C1q↓PEG(使IC沉降）

測定沉淀物中的放射活性

優(yōu)點：對IC的檢測既可定性又可定量，重復(fù)性好，結(jié)果客觀；缺點：易出現(xiàn)假陽性C1q不但能與IC結(jié)合，還能與魚精蛋白、C反應(yīng)蛋白結(jié)合

4.Raji細(xì)胞試驗：原理：Raji細(xì)胞是一種有B細(xì)胞特征的淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞，由Burkitt氏淋巴瘤衍變而來，其表面無SmIg，含有大量的補(bǔ)體受體，尤其是C3b受體。該法僅適用于檢測AgAbC復(fù)合物。方法：待測血清+Raji細(xì)胞孵育→洗滌，加入同位素標(biāo)記的抗人IgG→離心、洗滌→檢測沉淀細(xì)胞的放射活性。IC檢測的臨床意義：

CIC升高主要見于自身免疫性疾病及感染性疾病

CIC量的消長可反映病情的嚴(yán)重程度、監(jiān)測治療效果五.IC檢測的有關(guān)技術(shù)問題：到目前為止，所有檢測IC的試驗，還沒有另人滿意的標(biāo)準(zhǔn)化措施;

在體外制備的IC還很不穩(wěn)定，因此用人工合成的復(fù)合物作為定量標(biāo)準(zhǔn)不適宜。目前普遍應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)品是HAHG——熱聚合人IgG（不是IC）。檢測IC的理想方法：