藥物分析 第二章鑒別

第二章藥物的鑒別試驗(yàn)

基本要求一、掌握鑒別試驗(yàn)的原理、基本方法二、熟悉鑒別試驗(yàn)的影響因素與注意事項(xiàng)三、了解鑒別試驗(yàn)方法的驗(yàn)證。

它是藥檢工作的首藥檢工作中的首先項(xiàng)任務(wù)，只有在藥物鑒別無誤的情況下，才能進(jìn)行藥物的雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定。藥物鑒別試驗(yàn)是用來證實(shí)貯藏在有標(biāo)簽容器中的藥物是否為其所表示的藥物，而不是對(duì)未知物進(jìn)行定性分析，因?yàn)檫@些鑒別試驗(yàn)雖有一定的專屬性，但不具備進(jìn)行未知無確證的條件，故不能鑒別未知物。舉列:天麻鑒別要點(diǎn):鶯哥嘴橫點(diǎn)紋(市場(chǎng)有人有土豆做假)

第一節(jié)藥物鑒別試驗(yàn)的定義與目的

<中國(guó)藥典>2010版凡例中對(duì)藥物鑒別的定義為：鑒別項(xiàng)下規(guī)定的試驗(yàn)方法，僅反映該藥品某些物理、化學(xué)或生物學(xué)等性質(zhì)的特征，不完全代表對(duì)該藥品化學(xué)結(jié)構(gòu)的確證。

化學(xué)藥物的結(jié)構(gòu)確證是確認(rèn)所制備原料藥的結(jié)構(gòu)是否正確，適用于未知化合物的鑒別或目標(biāo)對(duì)象的結(jié)構(gòu)確認(rèn)。第二節(jié)藥物鑒別的項(xiàng)目藥物的鑒別試驗(yàn)包括：性狀和鑒別一、性狀（definition)聚集狀態(tài)、晶形

外觀色澤臭、味:、

極易溶：1份溶質(zhì)在不到1份溶劑中溶解易溶：1份溶質(zhì)在1份~不到10份溶劑中溶解溶解:1份溶質(zhì)在10份~不到30份溶劑中溶解溶解度略溶:1份溶質(zhì)在30份~不到100份溶劑中溶解微溶:…..在100份~不到1000份溶劑中溶解極微溶解:在1000份~不到10000份溶劑中溶解幾乎不溶或不溶：…10000份溶劑中不完全溶

物理常數(shù):相對(duì)密度、餾程、熔點(diǎn)、比旋度、吸收系數(shù)、折光率、黏度、酸值、碘值、皂化值、羥值

第一法：測(cè)定易碎的固體藥品熔點(diǎn)第二法：測(cè)定不易碎的固體藥品（脂肪酸、石蠟等）

第三法：測(cè)定凡士林或其他類似的物質(zhì)熔點(diǎn)系指一種物質(zhì)按規(guī)定方法測(cè)定，由固體熔化成液體的溫度或融熔同時(shí)分解的溫度或在熔化時(shí)初熔至全熔經(jīng)歷的溫度范圍。測(cè)定熔點(diǎn)的藥品，應(yīng)是遇熱晶型不轉(zhuǎn)化，其初熔點(diǎn)和終熔點(diǎn)容易分辨；融熔同時(shí)分解是指某一藥品在一定溫度產(chǎn)生氣泡、上升、變色或渾濁等現(xiàn)象。藥品的熔點(diǎn)與分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，當(dāng)構(gòu)成晶格的單位（對(duì)有機(jī)化合物來說一般是分子，無機(jī)化合物的是離子或原子組成）受熱，動(dòng)能增加到足以克服各單位間相互作用力即格子力，晶格崩潰渙散，這時(shí)的溫度就是固體的熔點(diǎn)。每種純的固體有機(jī)化合物都有自己的獨(dú)特的晶型結(jié)構(gòu)和分子間力，因此要熔化固體，就需要一定的熱能，所以每種固體物質(zhì)都有獨(dú)特的熔點(diǎn)。熔點(diǎn)在一定程度上反映了物質(zhì)固態(tài)時(shí)的格子力大小。凡這種力越大，其熔點(diǎn)越高。格子力大小受分子間作用力的本性、分子結(jié)構(gòu)與性狀以及晶格類型三種因素的支配，因此有些結(jié)晶性固體物質(zhì)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)相同，但晶型不同，熔點(diǎn)也就不同。

熔點(diǎn)是多數(shù)有機(jī)藥物的重要物理常數(shù)

一般未注明者均指“第一法”

測(cè)定時(shí)根據(jù)供試品熔融同時(shí)分解與否，調(diào)節(jié)傳溫液的升溫為2.5---3.0℃／min或1.0—1.5℃／min。要求報(bào)告:初熔----供試品在毛細(xì)管內(nèi)開始局部液化出現(xiàn)明顯液滴時(shí)的溫度。

全熔----供試品全部液化時(shí)的溫度

注意：（1）化合物分子中引入能形成氫鍵的官能團(tuán)后，其熔點(diǎn)升高；（2）同系物中，熔點(diǎn)隨分子量的增大而升高；（3）分子結(jié)構(gòu)越對(duì)稱，越有利于排成整齊形式，造成更大的格子力，則熔點(diǎn)越高。

比旋度：指在一定波長(zhǎng)下，偏振光透過1dm且每1ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液時(shí)測(cè)得的旋光度?？捎糜阼b別藥物、檢查藥物的純度和含量測(cè)定。[n]TD=100α/dL

摩爾吸收系數(shù)ε=A/CL

吸收系數(shù)百分吸收系數(shù)（Ch.P收載的方法）E1%1cm=A/CL

是指依據(jù)一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或理化特性，通過化學(xué)反應(yīng)鑒別藥物的真?zhèn)?。注?只能證實(shí)是某一類藥,而不能證實(shí)是哪一種藥?ChP附錄中有：丙二酰脲類、托烷生物堿類、

芳香第一胺類、有機(jī)氟類等、二、一般鑒別試驗(yàn)（generalidentificationtest）1.有機(jī)氟化物有機(jī)氟氧瓶燃燒無機(jī)氟離子pH4.3

茜素氟藍(lán)硝酸亞鈰藍(lán)紫色絡(luò)合物2.有機(jī)酸鹽(1)水楊酸水楊酸+FeCl3中性條件弱酸性條件紅色配位化合物紫色配位化合物(2)酒石酸鹽供試品溶液（中性）+氨制硝酸銀水浴中銀鏡3.芳香第一胺類供試品+

稀鹽酸亞硝酸鈉堿性-萘酚試液紅色到猩紅色

4.托烷生物堿類

此類生物堿中具有莨菪酸結(jié)構(gòu)，有Vitali反應(yīng),顯紫色。

5.無機(jī)金屬鹽（Na,K,Ca)

焰色反應(yīng)：Na顯鮮黃色；K顯紫色；Ca顯磚紅色銨鹽：供試品+NaOH氨臭使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變藍(lán)使硝酸亞汞試液濕潤(rùn)的濾紙顯黑色6.無機(jī)酸根

氯化物：Cl-+Ag+

AgCl

乳白色

硫酸鹽：SO42-+Ba2+

BaSO4

白色三、專屬鑒別試驗(yàn)(specificidentificationtest)

證實(shí)某一種藥物的依據(jù)，是根據(jù)每一種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異或理化性質(zhì)的不同，選用某些特有的靈敏的定性反應(yīng)，來鑒別藥物的真?zhèn)巍?/p>

綜上所述，一般鑒別試驗(yàn)是以某些類別藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù)，根據(jù)其相同的物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行藥物真為的鑒別，以區(qū)別不同類別的藥物。專屬鑒別試驗(yàn)是在一般鑒別試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用各種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)差異，來鑒別藥物，以區(qū)別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)部分的各個(gè)藥物單體，達(dá)到最終確證藥物真?zhèn)蔚哪康摹５谌?jié)鑒別方法一、化學(xué)鑒別法

三氯化鐵呈色反應(yīng)(Ar-OH,Ar-OCOCH3)

異羥戊酸鐵反應(yīng)(Ar-COOH;-COOR)

1.顯色反應(yīng)鑒別法茚三酮呈色反應(yīng)(脂肪氨基，α－氨基酸）重氮化-偶合呈色反應(yīng)(Ar-NH2;-NHCOR)

氧化還原顯色反應(yīng)及其它顏色反應(yīng)與金屬離子的沉淀反應(yīng)

2.沉淀生成鑒別法與硫氰化鉻銨的沉淀反應(yīng)其它沉淀反應(yīng)(如生物堿沉淀劑）

藥物本身在可見光下發(fā)射熒光藥物溶液加硫酸后在可見光下發(fā)射熒光

3.熒光反應(yīng)鑒別法藥物與溴反應(yīng)后，在可見光下發(fā)出熒光藥物與間苯二酚溴反應(yīng)后，發(fā)射出熒光藥物其它反應(yīng)后，發(fā)射出熒光

制備衍生物：藥物＋試劑具有熒光的衍生物

胺類、酰脲類、酰胺類藥物經(jīng)強(qiáng)堿處理生成氨氣(NH3；NH(C2H5)2)

含硫藥物經(jīng)強(qiáng)酸處理后，加熱，生成硫4.氣體生成反應(yīng)鑒別法化氫氣體(H2S+Pb2+

PbS+2H+)

含碘有機(jī)藥物，加熱。生成紫色碘蒸汽含醋酸酯和乙酰胺類藥物酸水解后，加乙醇可產(chǎn)生乙酸乙酯5、制備衍生物測(cè)定熔點(diǎn)法

藥物＋試劑新化合物有一定mp;

藥物酸化或堿化生成游離酸或堿。操作繁瑣費(fèi)時(shí)間，應(yīng)用較少。二、光譜鑒別法

測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)，或同時(shí)測(cè)定最小吸收波長(zhǎng)規(guī)定濃度的供試液在最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定吸收度1.紫外光譜鑒別法規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收系數(shù)法規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法經(jīng)化學(xué)處理后,測(cè)定其反應(yīng)產(chǎn)物吸收光譜特性例P77

壓片法2.紅外光譜鑒別法糊法膜法溶液法在用IR光譜進(jìn)行鑒別試驗(yàn)時(shí)，ChP2010采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照法

TLC法（Rf樣＝Rf對(duì)）

三、色譜鑒別法

PC法

HPLC法（tR樣＝tR對(duì)）

GC法

在ChP2010中，對(duì)TLC鑒別法在斑點(diǎn)的顏色、位置、與斑點(diǎn)大小方面做出了明確要求：1、供試品與同濃度對(duì)照品顏色（或熒光）與位置（Rf）應(yīng)一致，斑點(diǎn)大小應(yīng)大致相同；2、供試品與對(duì)照品等體積混合，應(yīng)顯示單一，斑點(diǎn)緊密；或供試品溶液的主斑點(diǎn)與上述混合液的主斑點(diǎn)的顏色與位置一致，大小相似；3、選用與供試品化學(xué)結(jié)構(gòu)相似藥物對(duì)照品或雜質(zhì)對(duì)照品，兩者的比移值應(yīng)不同；4、上述兩種溶液等體積混合，應(yīng)顯示兩個(gè)清晰分離的斑點(diǎn)。注意事項(xiàng)：1、由于受薄層板質(zhì)量、邊緣效應(yīng)等因素的影響，實(shí)際操作中有時(shí)會(huì)遇到同一物質(zhì)在同一薄層板上的Rf值不一的情況，操作中可增加將供試品溶液與對(duì)照品溶液等量混合，點(diǎn)樣后出現(xiàn)單一斑點(diǎn)作為鑒別依據(jù)。2、單獨(dú)使用TLC鑒別時(shí)，需要進(jìn)行色譜系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)內(nèi)容，對(duì)斑點(diǎn)的比移值和分離效能進(jìn)行考察。必要時(shí)進(jìn)行靈敏度考察。3、TLC法除色譜行為外，還可將斑點(diǎn)顏色作為鑒別依據(jù)，由以上兩個(gè)因素把握供試品與對(duì)照品的同一性，簡(jiǎn)單易行，是一個(gè)鑒別的好方法。四、原子吸收法（AAS法）五、核磁共振法（NMR法）六、質(zhì)譜法（MS法）七、X射線粉末衍射法八、指紋圖譜與特征圖譜鑒別法P91

通過對(duì)所得到的能夠體現(xiàn)中藥整體特性的圖譜識(shí)別，提供一種能夠比較全面的控制中藥質(zhì)量的方法，從化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)的角度保證中藥制劑的穩(wěn)定和可靠。具體是采用指紋圖譜模式，將中藥內(nèi)在物質(zhì)特性轉(zhuǎn)化為常規(guī)數(shù)據(jù)信息，用于中藥鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)。注意：1、中藥尤其是復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，如果要求中藥成分分析圖譜始終不變是不合邏輯的；

2、不同制藥企業(yè)對(duì)同種藥材工藝不能保證一致，要求同一個(gè)品種用同一個(gè)指紋圖譜來進(jìn)行質(zhì)量控制幾乎是做不到。

3、特征圖譜通常是指主要有效成分的特征峰譜圖，而指紋圖譜除了有效成分的特征峰外，還包括更多內(nèi)容、更專一性。

九、生物學(xué)法P89是利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)等有效技術(shù)來鑒定藥物品質(zhì)的方法。十、顯微鑒別法P88

主要用于中藥及其制劑的鑒別，通常采用顯微鏡對(duì)藥材的切片（飲片）、粉末、解離組織或表面制片，以及含飲片粉末的制劑中飲片組織、細(xì)胞或含物等特征進(jìn)行鑒別的方法。第四節(jié)鑒別試驗(yàn)條件及方法驗(yàn)