原位雜交技術(shù)的HER2檢測

原位雜交技術(shù)(FISH)在HER2檢測中的應(yīng)用HER2及其檢測的臨床意義HER2檢測相關(guān)指南及指南關(guān)于ISH的內(nèi)容更新Her2檢測常用的原位雜交方法內(nèi)容提要HER2介紹及其檢測的臨床意義HER2基因人類表皮生長因子受體-2基因HumanEpidermalgrowthFactorReceptor-2(HER2)Gene定位于染色體17q21編碼跨膜受體樣蛋白（HER2蛋白）,具有酪氨酸激酶活性HER2蛋白分子量185kDa的糖蛋白:細胞外區(qū)（配體結(jié)合區(qū)）跨膜區(qū)（傳導信號）細胞內(nèi)區(qū)（激酶活性）HER2細胞內(nèi)細胞外細胞膜HER2HER2過表達的結(jié)果正常HER2表達HER2基因擴增導致HER2過表達HER2過表達導致腫瘤增殖促進細胞的生長和增殖------腫瘤發(fā)生抑制細胞的凋亡誘導血管新生提高細胞運動能力,增強腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移作用MoasserMM.Oncogene,2007.26(46):6577FreudenberyJA,WangQ,Katsumata,etal.ExpMolPathol.2009.87(1):1HER2陽性的定義蛋白水平(過表達):細胞表面HER2蛋白受體表達大量增加基因水平(擴增):

HER2編碼基因于細胞核內(nèi)拷貝增加IHCFISHHER2狀態(tài)對乳腺癌的臨床重要性乳腺癌的HER2陽性率約為15–25%對于乳腺癌患者，HER2過表達對早期乳腺癌預后不利；HER2過表達會降低乳腺癌轉(zhuǎn)移/復發(fā)患者的存活率HER2狀態(tài)也可預測乳腺癌的藥物治療效果，包括對曲妥珠單抗治療的反應(yīng)對紫杉醇及蒽環(huán)類藥物治療的反應(yīng)對三苯氧胺的耐藥性CarlsonRW,etal.JNCCN2006:4(Suppl.3):S1–S22.

HER2狀態(tài)評估對于確定患者是否接受抗HER2靶向治療至關(guān)重要HER2狀態(tài)對胃癌的臨床意義所有的胃或胃食管結(jié)合部癌患者都應(yīng)在初次診斷時檢測腫瘤的HER2狀態(tài)。HER2在胃癌中過表達預示更差的疾病結(jié)局以及進展性更強的疾病類型準確的胃癌HER2表達和基因擴增檢測結(jié)果是進展期胃癌HER2靶向治療患者篩選和療效預測的前提2010年，歐洲和美國先后批準化療聯(lián)合使用曲妥珠單抗治療HER2陽性胃及胃食管交界癌患者KelleyJRandDugganJM.JClinEpidemiol2003;56:1–9.BangYJ,etal.Lancet2010;376:687–697.BangYJ,etal.JClinOncol2008;26:Abstract4526.GravalosCandJimenoA.AnnOncol2008;19:1523–1529.HER2檢測指南中對于ISH檢測的內(nèi)容介紹國內(nèi)外相關(guān)指南國外指南：ASCO/CAP乳腺癌HER2檢測指南（2013）NCCN乳腺癌臨床實踐指南（2012）NCCN胃癌臨床實踐指南（2011）歐洲胃癌HER2檢測指南（2011）國內(nèi)指南：乳腺癌HER2檢測指南（2014版）胃癌HER2檢測指南(2011)10BilousMetal.ModPathol2003;16:173─182.WolffAC,etal.JClinOncol2007;25:118–145.AlbarelloL,etal.AdvAnatPathol

2011;18(1):53–59IHC為2+的HER2乳腺癌和胃癌患者均應(yīng)進行ISH復查！ISH檢測流程和判讀標準（ASCO-CAP2007版）2007版ArchPatholLabMed.2007;131(1):18-43ISH檢測流程和判讀標準（ASCO-CAP2013版）2013版–雙探針ArchPatholLabMed.2013Oct7.[Epubaheadofprint]14中國乳腺癌HER2檢測指南（2014版）HER2檢測常用檢測的ISH方法HER2常用檢測方法免疫組織化學(IHC):應(yīng)用抗體檢測蛋白過表達是乳腺及胃組織檢測HER2狀態(tài)的首要方式1原位雜交

技術(shù)(ISH):利用核酸探針檢測HER2基因擴增，可用于復檢經(jīng)IHC檢測難以確定結(jié)果的病例及疑難病例11.WolffACetal.JClinOncol2007;25:118–145.IHC：顯示組織細胞蛋白質(zhì)表達狀態(tài)ISH：顯示組織細胞基因的擴增狀態(tài)實驗室HER2檢測的ISH方法總結(jié)IHC通過抗體檢測HER2蛋白表達FISH通過熒光標記的DNA探針檢測HER2基因擴增SISH通過DNP標記之DNA探針并通過后續(xù)顯色反應(yīng)(銀染)來檢測HER2基因擴增通過地高辛標記之DNA探針并通過后續(xù)顯色反應(yīng)(DAB信號)來檢測HER2基因擴增CISH通過DNP標記之DNA和染色體著絲粒探針并通過后續(xù)顯色反應(yīng)(HER2銀染及17號染色體堿性磷酸酶紅染)檢測HER2DualSISH18原位雜交技術(shù)原理使探針與熒光素標記的特異親和素之間發(fā)生免疫化學反應(yīng),最后用熒光顯微鏡對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。FISH技術(shù)介紹變性和雜交FISH操作流程組織固定和處理組織切片和處理探針制備洗脫雜交液的配制信號放大或鏡檢PathVysion探針試劑盒INFORM探針試劑盒BMCCancer2009,9:1HER2(–)HER2(+)HER2(+)FISH探針22CISH技術(shù)介紹使用生物素或者地高辛標記的探針進行雜交反應(yīng)，再用鼠抗生物素－抗體和辣根過氧化物酶－抗鼠抗體進行免疫結(jié)合，最后DAB顯色CISH操作流程：Ⅰ預處理Ⅱ變性和雜交Ⅲ嚴格洗滌Ⅳ免疫顯色Ⅴ襯染和封片Ⅵ鏡下觀察和結(jié)果判讀HER2基因未擴增HER2基因擴增CISH探針雙色銀染原位雜交技術(shù)（DSISH）DSISH探針HER2的ISH檢測方法之優(yōu)缺點檢測方法優(yōu)點缺點FISH檢測結(jié)果相對免疫組化更加定量化穩(wěn)定性好可自動化操作檢測價格昂貴，信號強度隨時間衰減較難鑒定乳腺癌侵微小浸潤灶不能同時觀察細胞形態(tài)病理醫(yī)生及技術(shù)員接受相關(guān)技術(shù)操作及檢測結(jié)果分析的訓練較少CISH與免疫組化相比較少受實驗前分析及處理步驟影響操作較快，普通光鏡觀察即可染色長期穩(wěn)定可同時觀察細胞形態(tài)與熒光原位雜交相比技術(shù)較新，操作欠相關(guān)經(jīng)驗缺乏經(jīng)驗之人員較難分析檢測結(jié)果檢測HER2及CEP17拷貝數(shù)需制備不同切片SISH全自動顯色原位雜交(自動圖像分析)其他優(yōu)點與顯色原位雜交相同可檢測HER2過表達之微小腫瘤灶(胃癌)可觀察HER2異質(zhì)性染色結(jié)果(胃癌）檢測HER2基因及CEP17拷貝數(shù)需制備不同切片DSISH全自動顯色原位雜交(自動圖像分析