氣相色譜法操作規(guī)程

目的本標準規(guī)定了高效液相色譜法操作規(guī)程。適用范圍本操作法適用于公司檢驗中氣相測試樣品的操作。職責(zé)檢驗員：嚴格按操作規(guī)程進展檢驗。標準依據(jù)《中國藥品檢驗標準擦作規(guī)程》2023年版94～104頁內(nèi)容簡述柱分別系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)組成。儀器與性能要求儀器應(yīng)按現(xiàn)行國家技術(shù)監(jiān)視局“氣相色譜儀檢定規(guī)程”的要求作定期檢定。氣路系統(tǒng)氣源載氣有氮氣、氦氣、氫氣等。常用氦氣和氮氣作載氣。氮氣純度最好使用99.99%99.9%純氮。實際工作中〔5A13X分子篩〕的過濾器以吸附有機雜使用?；罨椒ㄊ菍⒎肿雍Y從過濾裝置中取出，置于坩堝中，置于茂福爐內(nèi)加熱到400～6004～6h。硅膠變紅時也要進展活化，方法是在烘箱中1402h即可。該在氣源和儀器之間附加一個凈扮裝置。好，但是更換不便利。氣體發(fā)生器使用便利，但是氣體純度不高。另外，空氣壓縮機是以試驗些，要留意常常更換凈扮裝置。氣路連接、氣體指示和調(diào)整假設(shè)承受高壓鋼瓶，在安裝氣瓶減壓閥時，應(yīng)先將瓶口聯(lián)結(jié)處的灰塵擦干凈，將瓶口向外，旋閥門開關(guān)放放氣數(shù)次，吹除灰塵，將減壓閥用扳手擰緊，再用聯(lián)接收將減壓閥出口聯(lián)至氣相色譜儀。用檢漏液〔外表活性劑溶液〕檢查連接處氣密性。果。進樣系統(tǒng)包括樣品引入裝置〔和汽化室〔進樣口。進樣口和進樣口技術(shù)分流/不分流進樣口是最常用的毛細管柱進樣口。它既可用作分流進樣，也2μl0.5μl10:1～200:1，樣品濃度大或進〔是指在成不同于原來的樣品組成，從而影響定量分析的準確度。不均勻汽化是分流卑視的主要原說，分流比較大，越有可能造成分流卑視。具體分析中要消退分流卑視，還應(yīng)留意色譜柱的〔主要是靈敏度要求，才考慮使用不分流進樣。程序升溫汽化進樣程序升溫汽化〔PYV〕進樣就是將液體或氣體樣品注射PTV進樣有以下優(yōu)點：①消退了注射器針頭的進樣卑視，這與冷柱上進樣類似；②可實現(xiàn)大體積進樣〔LV；③抑制了進樣口卑視〔即分流卑視物質(zhì)可滯留在襯管中，保護了色譜柱。PTV進樣適合于大局部樣品的分析，特別是開發(fā)方法時或篩選樣品時應(yīng)首先考慮這種進樣方式。汽化室襯管溶劑是影響分析質(zhì)量的重要參數(shù)，根本要求是襯管容積至少要等于樣品中溶劑汽化后的體積。在實際工作中要留意襯管容積與樣品的匹配性。進樣密封硅膠墊應(yīng)先加熱老化，除去揮發(fā)性物質(zhì)再用，并留意常常更換，另外也要留意常常更換襯管上端的密封硅橡膠圈。柱箱柱箱溫度的波動會影響色譜分析結(jié)果的重現(xiàn)性±1℃，柱箱溫度波動小于0.1℃/h，溫度梯度應(yīng)小于使用溫度的2%。溫度掌握分恒溫順程序升溫兩種。檢測器〔FI〔TC電子俘獲檢測器〔EC、火焰光度檢測器〔FP、氮磷檢測器〔NPDPI、原子放射光譜檢測器AE、紅外光譜檢測器IR〕子化檢測器〔FID〕是最常用的檢測器。FID檢測器操作條件及留意事項氣流流速FID3種不同的氣體：載氣、氫氣和空氣，由于毛細管柱的柱內(nèi)載氣流量太低〔常規(guī)柱為5ml/mi，不能滿足檢測器的最正確操作條件，所以使用毛細管柱時要承受關(guān)心氣〔尾吹氣，即在色譜柱后增加一路載氣直接進入檢測器，就可檢測器在高靈敏度狀態(tài)下工作，尾吹氣的另一個重要作用是消退檢測器死體積的駐外效應(yīng)。一般狀況下，氮氣〔尾吹氣+載氣、空氣和氫氣三者的比例接近或等于1:1:10〔如：氮氣30～40ml/min300～400ml/min300～400ml/min〕時，F(xiàn)ID的靈敏度最高。檢測器溫度溫度對FID150℃。ECDECDECD63Ni，也有承受氚為放射源的，ECD250℃～300250℃。ECD可以承受氮氣作為載氣，也可以承受含5%甲烷的氬氣作為載氣。ECD對電負性成分靈敏度高，故要求載氣純度高，至少要在99.99%以上，檢測器的溫度對響應(yīng)值有較大影響，要求檢測器的溫度波動必需周密掌握在±〔0.1～0.3〕℃之間，以保證響應(yīng)1%之內(nèi)。ECD要避開與氧氣或濕氣接觸，否則噪聲會明顯增大。因此，載氣和尾吹氣都要求很好地凈化。由于ECD都有放射源，故檢測器出口肯定要用管道接到室外，最好接到通ECD6個月要進展一次放射性泄露檢查。色譜柱色譜分析的好壞主要打算于色譜柱。氣象色譜柱依據(jù)色譜柱內(nèi)徑的大小和長度，可分為填充柱和毛細管柱，前者的內(nèi)徑在2～4mm1～10m左右；后者內(nèi)0.2～0.5mm25～100m。毛細管柱毛細管柱由于分別效能高，分析速度快，樣品用量少等特點，自從19581979了彈性石英毛細管柱色譜柱〔FSOT〕以來，由于是承受石英在高溫下特別拉制而成，化學(xué)惰性好、強度大，所以有肯定的彈性但不易折斷，安裝、使用便利。目前，國內(nèi)外已經(jīng)有各種各樣的商品柱，能夠滿足不同的試驗要求，毛細管柱的使用日益廣泛。色譜數(shù)據(jù)采集處理及儀器掌握系統(tǒng)由于微電子技術(shù)的不斷進展，特別是計算機的消滅，當(dāng)今的氣相色譜儀一般都承受計算機〔工作站軟件〕制，使氣相色譜分析自動化。因商品規(guī)格型號不同，具體操作也不盡一樣器說明書進展操作，這里不作介紹。開機操作檢查儀器上的電源開關(guān)，均應(yīng)處于“關(guān)”的位置。選好適宜的色譜柱，柱的兩端應(yīng)堵有盲堵。取下盲堵，分清入口端及出口端，套好石墨密封圈及固定螺母，留神裝于儀器上，擰緊固定螺母，但也勿過緊，以也不漏氣為適宜。假設(shè)要換下色譜柱，應(yīng)堵上盲堵保存。開啟載氣鋼瓶上總閥調(diào)整減壓閥至規(guī)定壓力。留意：假設(shè)承受氮氣發(fā)生器作為2～3h翻開氮氣發(fā)生器進展平衡〔由于氮氣發(fā)生器產(chǎn)生的氮氣中氧的含量較高，另外由于ECD對載氣中的氧特別敏感，所以承受ECD用檢漏液〔外表活性劑溶液〕檢查柱連接處是否漏氣，如有漏氣應(yīng)檢查柱兩端的石墨密封圈或再略緊固螺母。翻開個局部電路開關(guān)，翻開色譜工作站，設(shè)定進樣口〔汽化室、柱溫箱、檢測器溫度和載氣流量等色譜參數(shù)。開頭加熱?！不蛘叻_氫氣/空氣發(fā)生器開關(guān)，同載氣操作。按下點火按鈕〔對于FID檢測器來說，有些儀器在監(jiān)測器溫度到達肯定溫度后有自動點火功能，應(yīng)有“撲”的點火聲，用玻璃片置FID檢測器氣體出口處，檢視玻璃片上應(yīng)有水霧，表示已點著火，同時工作站上應(yīng)有信號相應(yīng)。留意進展監(jiān)視，以確保點火成功。調(diào)整儀器的放大器靈敏度等，走基線，待基線穩(wěn)定度到達可以承受的范圍內(nèi)，即可進樣分析。氣相色譜常用的進樣方法有手動進樣、自動進樣、頂空進樣〔多為自動〕等，在用微量主要技術(shù)要求如下〔針對常規(guī)液體樣品。選用適宜的注射器氣象色譜分析最常用的是10μl1μl。假設(shè)進樣量要掌握在1μl5μl1μl時要留意：5μl或1μl的注射器往往是將樣品抽在針尖內(nèi)，因此觀看不到針管內(nèi)的液面，故很可能抽入氣泡。取樣時應(yīng)反復(fù)推拉針芯，以確保針尖內(nèi)沒有氣泡。注射速度要快注射速度慢時會使樣品的汽化過程變長，導(dǎo)致樣品進入色譜柱的初始譜帶變寬。正確的注射方法應(yīng)當(dāng)是：取樣后，一手持注射器，并用食指放在針芯的末端〔防止汽化室的高氣壓將針芯吹出〕另一只手保護針尖〔防止插入隔墊時彎曲，先留神〔留意不要使針芯彎曲在汽化室中停留的時間越短越好，且每次注射的過程越重現(xiàn)越好。3〔抽滿針管的2/，再排出，再用要分析的樣品溶液洗針至少3次，然后取樣〔屢次上下抽動上可以消退樣品之間的相互干擾〔記憶效應(yīng)。削減注射卑視所謂注射卑視是指注射針插入氣相色譜儀進樣口時，針尖內(nèi)的劑量太大會造成色譜柱超載。40℃〔或更低40℃用盲堵上，放在盒內(nèi)，妥當(dāng)保存。寫好使用記錄。樣品的測定儀器系統(tǒng)適用性試驗應(yīng)符合藥典或部頒標準各品種項下的要求。2定。預(yù)試驗初次測定該品種時可適當(dāng)調(diào)整柱溫、載氣流速、進樣量、進樣口和檢測器溫度等，使色譜峰頂?shù)谋４鏁r間、分別度、峰面積或峰高的測量能符合要求。正式測定正式測定時，每份校正因子測定溶液〔或比照溶液22份共42.0%。多份供試品測定時，522。原始記錄譜柱型號、規(guī)格及批號；進樣口、柱溫箱及檢測器溫度，載氣流速和壓力，進樣體積，進樣方式，并附色譜柱圖及打印結(jié)果。填充色譜柱的填充及其他維護毛細管柱安裝從柱架上將色譜柱兩端各拉出大約0.5m，以用于進樣口和檢測離端口大約5cm。在距柱兩端大約4-5cm用柱切割器〔一般為帶有刃口的陶器片〕與柱垂直螺帽1/4-1/2供給的正確插入距離。毛細管柱的老化在比最高溫分析溫度高20℃或最高溫〔溫度更低者〕2h，假設(shè)在高溫10minVespdl老化完成后再重檢查密封程度。檢測器清洗FI