醫(yī)學(xué)精品課件：20111917-分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題-2010研究生

一、名詞解釋?zhuān)合到y(tǒng)生物學(xué)以整體性研究為特征的一種大科學(xué)，是在細(xì)胞、組織、器官和生物體整體水平研究結(jié)構(gòu)和功能各異的各種分子及其相互作用，并通過(guò)計(jì)算生物學(xué)來(lái)定量描述和預(yù)測(cè)生物功能、表型和行為。表基因組學(xué)是研究在基因組序列不改變的情況下其表達(dá)譜改變的機(jī)制的分支領(lǐng)域，重點(diǎn)在基因組表達(dá)調(diào)控。Omics組學(xué)研究，包括病理基因組學(xué)、生殖基因組學(xué)、環(huán)境基因組學(xué)毒物基因組學(xué)、營(yíng)養(yǎng)基因組學(xué)、比較基因組學(xué)表基因組學(xué)、干細(xì)胞基因組學(xué)、RNA組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)轉(zhuǎn)錄組學(xué)、代謝物組學(xué)、臨床基因組學(xué)、化學(xué)基因組學(xué)調(diào)節(jié)基因組學(xué)、計(jì)算機(jī)功能基因組學(xué)基因組動(dòng)力學(xué)、功能基因組學(xué)基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的。基因治療的基本策略：取決于腫瘤的類(lèi)型，概括起來(lái)有下列五種：基因置換：用正常的外源基因置換產(chǎn)生疾病的基因，使致病基因得到永久的更正。此為最理想的基因療法?；蛐拚?jiǎn)位蜻z傳病在多數(shù)情況下是由于基因內(nèi)部單個(gè)堿基發(fā)生突變所致，而其他核苷酸序列均正常，因此只要將突變的單個(gè)堿基予以更正就能達(dá)到基因治療的目的，而不必將整個(gè)基因進(jìn)行置換。基因修飾：將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其他細(xì)胞，目的基因的表達(dá)產(chǎn)物可以補(bǔ)償病變基因的功能，而病變基因本身并未改變。由于已經(jīng)發(fā)展了許多有效的方法可以將目的基因?qū)胝婧思?xì)胞，并獲得表達(dá)，因而是目前較為成熟的方法?；蛞种疲簩?dǎo)入外源基因去干擾、抑制有害基因的表達(dá)?；蚍忾]：以mRNA為靶分子，用特定的可與靶分子互補(bǔ)的DNA或RNA分子與mRNA形成雙鏈，從而改變RNA的剪接方式，阻斷翻譯甚至摧毀異常RNA，在剪接或翻譯水平上調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。常染色體突變發(fā)生在常染色體上的基因突變。包括錯(cuò)義突變，無(wú)義突變，同義突變，移碼突變M-CdkCdk指的是cyclin-dependentkinases，周期蛋白依賴性蛋白激酶，是一組絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，和周期蛋白cyclin協(xié)同作用，是細(xì)胞周期調(diào)控中的重要因子。CDK可以和cyclin結(jié)合形成異二聚體，其中CDK為催化亞基，cyclin為調(diào)節(jié)亞基，不同的cyclin—CDK復(fù)合物，通過(guò)CDK活性，到底不同底物磷酸化，而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期不同時(shí)相的推進(jìn)和轉(zhuǎn)化作用。M-Cdk作用于細(xì)胞分裂期。effectorcaspasecaspase全稱為天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶。caspase是一組存在于細(xì)胞質(zhì)中具有類(lèi)似結(jié)構(gòu)的蛋白酶。它們的活性位點(diǎn)均包含半胱氨酸殘基，能夠特異性的切割靶蛋白蛋白天冬氨酸殘基后的肽鍵。caspase負(fù)責(zé)選擇性的切割某些蛋白質(zhì)，從而造成細(xì)胞凋亡。26Sproteasome蛋白酶體是在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中降解被泛素標(biāo)記蛋白質(zhì)的大分子蛋白復(fù)合體。抑癌基因抗癌基因（antioncogene）是最初的叫法，大約可以追溯到1985年左右，現(xiàn)多稱為抑癌基因（tumorsuppressorgene），這是一類(lèi)可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并有潛在抑癌作用的基因，當(dāng)它失活后，可能使癌基因充分發(fā)揮作用而導(dǎo)致癌的發(fā)生發(fā)展。如果要確定某一特定組織或細(xì)胞惡性腫瘤的抑癌基因，需滿足以下三個(gè)條件：①在癌的相應(yīng)正常組織中必須有正常的表達(dá)；②在惡性腫瘤中。相應(yīng)基因應(yīng)有所改變，包括點(diǎn)突變，片斷缺失或表達(dá)缺陷；③

導(dǎo)入該基因缺陷的惡性腫瘤細(xì)胞中將部分或全部抑制惡性表型。原癌基因c-onc也稱為原癌基因（proto-oncgene）有兩層含義：1.原癌基因是不發(fā)揮致癌作用的c-onc，正常情況是與細(xì)胞增殖有關(guān)的基因。2.v-onc來(lái)源于原癌基因，目前所知v-onc，在哺乳動(dòng)物都可以找到與之相對(duì)應(yīng)的c-onc，具有相似的核苷酸序列，編碼結(jié)構(gòu)和功能相似的產(chǎn)物，反之則不然，目前發(fā)現(xiàn)幾種c-onc沒(méi)有相應(yīng)的v-onc。另一方面，細(xì)胞具有c-onc，但沒(méi)有與之相關(guān)的癌基因成分?，F(xiàn)在一般認(rèn)為v-onc源于c-onc，是病毒基因組與細(xì)胞基因組發(fā)生重組而形成的。未激活的細(xì)胞癌基因在人體正常細(xì)胞中存在，基因序列高度保守是一種正?；?被激活后，形成癌性的細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因作用通過(guò)產(chǎn)物蛋白來(lái)體現(xiàn)：調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和分化廣泛存在于生物界中，從酵母到人的細(xì)胞中都存在基因突變基因突變是指基因組中核酸分子堿基排列順序的變異及其所引起的生物表型變化。表型表型（Phenotype），也叫表現(xiàn)型，是指生物體個(gè)別或少數(shù)性狀以至全部性狀的表現(xiàn)。對(duì)于一個(gè)生物而言，表示它某一特定的物理外觀或成分。如植物的高度、人的血型、蛾的顏色，都是表型的例子。錯(cuò)義突變錯(cuò)義突變（missensemutation)在基因的編碼序列中，由于堿基的替換，使編碼某一氨基酸的密碼子變?yōu)榫幋a另一氨基酸的密碼子，這種突變稱為錯(cuò)義突變。無(wú)義突變無(wú)義突變（nonsensemutation)在基因的編碼序列中，由于堿基的替換，使某個(gè)氨基酸密碼轉(zhuǎn)變?yōu)榻K止密碼，致使肽鏈合成提前終止，肽鏈縮短，這種突變稱為無(wú)義突變。移碼突變移碼突變（frame-shiftingmutation):在基因的編碼序列中,插入或缺失一個(gè)或數(shù)個(gè)(非3的整倍數(shù))堿基,均可造成突變位點(diǎn)后的遺傳密碼閱讀框架發(fā)生改變,不能編碼出原來(lái)多肽鏈的氨基酸排列順序。這種突變稱為移碼突變。腫瘤基因診斷檢測(cè)致病基因或疾病相關(guān)基因的改變，或患者體內(nèi)病原體所特有的核苷酸序列，以此作為腫瘤診斷的指標(biāo)。蛋白質(zhì)組一種細(xì)胞、組織或生物體完整基因組所對(duì)應(yīng)的全套蛋白質(zhì)RealtimePCR(實(shí)時(shí)定量PCR)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，使每一個(gè)循環(huán)變得“可見(jiàn)”，最后通過(guò)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品中的DNA(orcDNA)的起始濃度進(jìn)行定量的方法。ThresholdCycle(Ct)PCR擴(kuò)增過(guò)程中，擴(kuò)增產(chǎn)物熒光信號(hào)超過(guò)基線值（進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期）時(shí)的循環(huán)數(shù)同尾酶即能切割產(chǎn)生相同末端的限制性內(nèi)切酶，一般是指能產(chǎn)生相同粘性末端的限制酶。所有鈍末端酶產(chǎn)生的末端均是相同的，但一般不把它作為同尾酶來(lái)研究。故名思義，同尾酶是不同的酶，它們只是切割DNA產(chǎn)生的末端相同，同尾酶之間的識(shí)別序列可以相同也可以不同，但基因工程中識(shí)別序列不同的同尾酶的應(yīng)用性最大。DDRPRNA聚合酶(RNApol)也稱轉(zhuǎn)錄酶（transcriptase)，全稱依賴DNA的RNA聚合酶(DDRP)。原核生物（E.Coli）RNApol由α2ββ′σ共5個(gè)亞基組成（465KD)。原核生物轉(zhuǎn)錄終止子原核生物的轉(zhuǎn)錄終止：終止信號(hào)存在于RNA聚合酶已轉(zhuǎn)錄過(guò)的序列中。這種提供終止信號(hào)的序列稱為終止子（terminator)。1.不依賴ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止2.依賴ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止兩類(lèi)終止子有共同的序列特征：轉(zhuǎn)錄終止點(diǎn)之前有一段回文序列，回文序列的兩個(gè)重復(fù)部分由幾個(gè)堿基對(duì)的不重復(fù)節(jié)段隔開(kāi)。回文結(jié)構(gòu)的對(duì)稱軸一般距離轉(zhuǎn)錄終止點(diǎn)16-24bp)調(diào)節(jié)基因調(diào)節(jié)基因是參與其他基因表達(dá)調(diào)控的RNA或蛋白質(zhì)的編碼基因。調(diào)節(jié)基因編碼的調(diào)節(jié)物質(zhì)通過(guò)與DNA上的特定位點(diǎn)結(jié)合控制轉(zhuǎn)錄是調(diào)控的關(guān)鍵。調(diào)節(jié)物與DNA特定位點(diǎn)的相互作用能以正調(diào)控的方式調(diào)節(jié)靶基因，也能以負(fù)調(diào)控的方式調(diào)節(jié)靶基因。結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)基因是編碼蛋白質(zhì)或RNA的任何基因。組成型表達(dá)速率不受環(huán)境變化或代謝狀態(tài)影響的基因表達(dá)方式稱組成型表達(dá)；α互補(bǔ)現(xiàn)在使用的許多載體都帶有一個(gè)大腸稈菌DNA的短區(qū)段，其中含有了β－半乳糖苷酶基因（lacZ)的調(diào)控序列和頭146個(gè)氨基酸的編碼信息（α-肽區(qū)段）。這個(gè)編碼區(qū)中插入了一個(gè)多克隆位點(diǎn)，不破壞讀框，但可使少數(shù)幾個(gè)氨基酸插入到β－半乳糖苷酶的氨基端，而不影響功能。這種載體適用于缺失掉β－半乳糖苷酶α-肽區(qū)段的宿主細(xì)胞。雖然宿主和質(zhì)粒編碼的片段各自都沒(méi)有酶活性，但可以融為一體，形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這樣，lacZ基因上缺失近操作基因區(qū)段的突變體與帶有完整的近操作基因區(qū)段的β－半乳糖苷酶陰性的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)，這種互補(bǔ)現(xiàn)象叫α互補(bǔ)。遺傳密碼擺動(dòng)性tRNA上的反密碼子與mRNA上的密碼子配對(duì)時(shí)，密碼子的第一位、第二位堿基配對(duì)是嚴(yán)格的，第三位堿基可以有一定變動(dòng)，并不嚴(yán)格遵循配對(duì)原則，這種現(xiàn)象稱為密碼的擺動(dòng)性。chromatinremodeling染色體重建：指發(fā)生在基因活化轉(zhuǎn)錄時(shí)核小體能量-依賴型的排列或重排。transcriptionalco-activatorsandco-repressors轉(zhuǎn)錄共激活子（Co-activator）:不與DNA調(diào)控序列結(jié)合但與轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)合并激活基因轉(zhuǎn)錄的因子。轉(zhuǎn)錄共抑制子（Co-repressor）:不與DNA調(diào)控序列結(jié)合但與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合并抑制基因轉(zhuǎn)錄的因子。Kozaksequence存在于真核生物mRNA的一段序列，其在翻譯的起始中有重要作用。核糖體能夠識(shí)別mRNA上的這段序列，并把它作為翻譯起始位點(diǎn)。真核生物基因中起始密碼子上下游的最佳序列為，-3位為嘌呤堿基；+4位為G，起始密碼子AUG中的A處于+1位。A/GCCAUGG被稱為kozak序列或掃描序列。二、問(wèn)答題：簡(jiǎn)述人類(lèi)個(gè)體基因組分析的意義。人類(lèi)個(gè)體基因組測(cè)序?qū)?shí)現(xiàn)個(gè)體化的診斷、預(yù)防、治療具有重要意義。目前正在研究下一代DNA測(cè)序技術(shù)，以期2013年實(shí)現(xiàn)1000美元測(cè)定人體基因組序列的目標(biāo)。那時(shí)將能對(duì)每個(gè)患者的基因組DNA測(cè)序作為日常診療的一部分，使針對(duì)每個(gè)患者的個(gè)體化醫(yī)療中的預(yù)防、診斷、治療成為可能。100000USD基因組大幅提升Sanger法和PCR的性能提高使用毛細(xì)管系統(tǒng)效率的方法（NetworkBiosystemsCo.USA)；珠粒基聚合酶簇(Colony)測(cè)序技術(shù)（美國(guó)AgercourtPersonalGenomicsCo.USA)。1000USD基因組該項(xiàng)目將在微珠上克隆的DNA放入液滴中，反復(fù)進(jìn)行DNA鏈伸展和清洗的方法（DukeUniversity,USA)；利用“零模式導(dǎo)波管（ZMW)”技術(shù)，實(shí)時(shí)檢測(cè)在聚合酶作用下每個(gè)連接到延伸的DNA分子中的核苷酸（NanofluidicsCo.USA)作為讀取DNA堿基的分子傳感器，開(kāi)發(fā)利用聚合酶和核苷酸的系統(tǒng)（VisiGenBiotechnologiesCo.USA)等。簡(jiǎn)述第二代測(cè)序技術(shù)的原理和應(yīng)用。第2代測(cè)序技術(shù)工作流程2010年諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予了哪項(xiàng)成果？你對(duì)此有何評(píng)價(jià)？2010年，英國(guó)生理學(xué)家羅伯特·愛(ài)德華茲因?yàn)樵谠嚬軏雰悍矫娴难芯揩@得2010年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。體外受精技術(shù)俗稱“試管嬰兒”技術(shù)，是指采用人工方法讓卵子和精子在體外受精，進(jìn)行早期胚胎發(fā)育后，移植到母體子宮內(nèi)妊娠的技術(shù)。1968年，愛(ài)德華茲與發(fā)明腹腔鏡技術(shù)的帕特里克·斯特普托醫(yī)生正式合作，開(kāi)始了人的體外受精研究。盡管張民覺(jué)完成的哺乳動(dòng)物體外受精技術(shù)已經(jīng)非常成熟，但應(yīng)用于人體還有諸多困難。1969年，愛(ài)德華茲和斯特普托經(jīng)過(guò)努力，成功地從不育婦女卵巢中獲得有活性的卵子，并首次實(shí)現(xiàn)了體外受精。經(jīng)過(guò)不斷的失敗，1977年11月10日，斯特普托成功獲得一枚布朗太太的卵子并人工授精成功，兩天后將其植入布朗太太的體內(nèi)，布朗太太順利懷孕，并且胎兒發(fā)育正常。1978年7月25日，世界上第一個(gè)“試管嬰兒”——路易絲·喬伊·布朗出生?！霸嚬軏雰骸奔夹g(shù)宣告成功。請(qǐng)用文字加示意圖闡述SCF類(lèi)泛素連接酶復(fù)合體的組織模式及作用機(jī)制。UbiquitinationofCDKinhibitorSIC1bySCFCDC4-ROCligase具體過(guò)程原理請(qǐng)參見(jiàn)張令強(qiáng)老師課件【2010-12-20張令強(qiáng)研究生課泛素化介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解含Smurf1NCB文章】p43請(qǐng)簡(jiǎn)述線粒體在細(xì)胞凋亡發(fā)生中的地位及信號(hào)機(jī)制。細(xì)胞凋亡的一個(gè)重要途徑通過(guò)線粒體完成，稱為線粒體途徑Themitochondrialpathwayisactivatedbymostcellularstresses.Aresultingsignalorintracellularchangecausesthereleaseofcytochromecintothecytosol.CytochromecbindstoApaf-1andprocaspase-9toformtheapoptosomeandcatalyzestheactivationofcaspase-9.(線粒體途徑)RoleofmitochondriaimportantinnecrosisimportantroleinactivatingapoptosissomedownstreameventsATPdependentcertaincaspasesandBcl-2familymemberspresentinmitochondriapermeabilitytransitionreleasescytochromeccytochromecbindstoapaf-1andcaspase-9(apoptosome)具體機(jī)制可參見(jiàn)張令強(qiáng)老師課件【2010-12-16張令強(qiáng)研究生課細(xì)胞凋亡的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑】p32或細(xì)胞生物學(xué)課本相關(guān)章節(jié)。請(qǐng)簡(jiǎn)述抑癌蛋白p53的結(jié)構(gòu)組成、作用機(jī)制及調(diào)控層次。答案見(jiàn)張令強(qiáng)老師課件【2010-12-16張令強(qiáng)研究生課細(xì)胞周期調(diào)控與癌癥】P55---p66，相關(guān)機(jī)理過(guò)程可從中總結(jié)。簡(jiǎn)述病毒使細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的途徑有哪些。病毒使正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性主要通過(guò)病毒癌基因編碼產(chǎn)物－癌蛋白對(duì)細(xì)胞各部分發(fā)生作用。

1）作用細(xì)胞膜有的病毒癌基因產(chǎn)物為生長(zhǎng)因子或其受體類(lèi)似物，可不斷刺激細(xì)胞進(jìn)行增殖。

2）跨膜信號(hào)傳導(dǎo)有的病毒癌基因產(chǎn)物具有類(lèi)似G蛋白的作用，但不能有效地調(diào)節(jié)信號(hào)輸入，而處于持續(xù)信號(hào)傳入狀態(tài)。

3）作用細(xì)胞質(zhì)有的病毒癌基因產(chǎn)物本身為蛋白激酶，通過(guò)胞質(zhì)蛋白激酶的磷酸化而影響細(xì)胞第二信使的產(chǎn)生。

4）作用細(xì)胞核正常細(xì)胞核內(nèi)存在核蛋白和核受體，一些病毒癌基因本身為核蛋白，核受體或轉(zhuǎn)錄因子，參與轉(zhuǎn)錄及DNA合成的改變。簡(jiǎn)述基質(zhì)金屬蛋白酶在腫瘤侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用?；|(zhì)金屬蛋白酶的功能與調(diào)節(jié)降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞進(jìn)入脈管系統(tǒng)。2）促進(jìn)原發(fā)瘤和繼發(fā)瘤的生長(zhǎng)，創(chuàng)造腫瘤生長(zhǎng)和擴(kuò)散的微環(huán)境。3.）促進(jìn)血管生長(zhǎng)的作用，MMP2在毛細(xì)血管末梢形成及內(nèi)皮細(xì)胞基底膜形成中發(fā)揮重要作用。4）MMPs在細(xì)胞外以非活性的酶原存在，需要活化后才能發(fā)揮生物學(xué)功能。5）IL4、10、生長(zhǎng)因子（EGF、bFGF等）、細(xì)胞與細(xì)胞、基質(zhì)之間的反應(yīng)因子。6）抑制調(diào)節(jié)包括特異性組織抑制劑如TIMP1～4和大量非特異性蛋白酶抑制劑，是目前發(fā)展最快的抗癌藥物。舉例說(shuō)明常用抗腫瘤藥物的作用機(jī)制。（一）干擾核酸生物合成的藥物這類(lèi)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與核酸代謝的必需物質(zhì)葉酸、嘌呤、嘧啶等相似，又稱抗代謝藥，屬作用于S期的周期特異性藥。1.二氫葉酸還原酶抑制藥甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）化學(xué)結(jié)構(gòu)類(lèi)似葉酸，與葉酸競(jìng)爭(zhēng)性抑制二氫葉酸還原酶，使FH2?FH4??DNA合成受阻；也能干擾嘌呤核苷酸的合成?蛋白質(zhì)合成障礙。2.胸苷酸合成酶抑制劑氟脲嘧啶（fluorouracil，5-FU）在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成5F-dUMP，從而抑制脫氧胸苷酸合成酶?影響DNA合成。3.嘌呤核苷酸互變抑制藥巰嘌呤（mercaptopurine，6-MP）阻止肌苷酸轉(zhuǎn)變?yōu)橄俸塑账岷网B(niǎo)核苷酸，干擾嘌呤代謝，核酸合成受阻，對(duì)S期最顯著。4.核苷酸還原酶抑制劑羥基脲（hydroxycarbamide，HU）阻止胞苷酸?脫氧胞苷酸?抑制DNA合成。對(duì)S期有選擇性的殺傷作用，可使瘤細(xì)胞集中在G1期，故可用做同步化治療。對(duì)慢性粒細(xì)胞性白血病療效顯著。5.DNA多聚酶抑制藥阿糖胞苷（cytarabine，Ara-C）影響DNA合成，也滲入到DNA中干擾其復(fù)制?細(xì)胞死亡。（二）直接影響DNA結(jié)構(gòu)與功能的藥物1.烷化劑（alkylatingagents）所含烷基與細(xì)胞的DNA、RNA或蛋白質(zhì)中的親核基團(tuán)起烷化作用，形成交叉聯(lián)結(jié)或脫嘌呤?DNA鏈斷裂，下次復(fù)制時(shí)又可使堿基配對(duì)錯(cuò)碼，造成DNA結(jié)構(gòu)和功能損害。屬周期非特異性藥。氮芥雙功能基團(tuán)烷化劑環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）經(jīng)肝藥酶活化生成中間產(chǎn)物醛磷酰胺，進(jìn)入腫瘤細(xì)胞分解出磷酰胺氮芥發(fā)揮作用。噻替哌（thiotepa，TSPA）白消胺（busulfan）卡莫司?。╟armustine）透過(guò)血腦屏障2.破壞DNA的鉑類(lèi)配合物順鉑（cisplatin）屬周期非特異性藥卡鉑（carboplatin）3.破壞DNA的抗生素類(lèi)絲裂霉素（mitomycinC）具有烷化作用，抑制DNA復(fù)制，也使部分DNA鏈斷裂，屬周期非特異性藥。博萊霉素（bleomycin，BLM）與銅或鐵離子絡(luò)合?氧分子轉(zhuǎn)成氧自由基?DNA鏈斷裂?阻止DNA復(fù)制，干擾細(xì)胞分裂繁殖。屬細(xì)胞周期非特異性藥，但對(duì)G2期作用強(qiáng)。4.拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑周期非特異性藥喜樹(shù)堿類(lèi)（camptothecine，CPT）作用靶點(diǎn)是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ（TOPO-Ⅰ），干擾DNA的結(jié)構(gòu)和功能。羥喜樹(shù)堿、拓?fù)涮乜?、依林特肯鬼臼毒素衍生物抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ，依托泊苷、替尼泊苷（三）干擾轉(zhuǎn)錄過(guò)程和阻止DNA合成藥物放線菌素（dactinomycin更生霉素DACT）嵌入到DNA雙螺旋中相鄰的鳥(niǎo)嘌呤和胞嘧啶堿基之間，與DNA結(jié)合成復(fù)合體阻礙RNA多聚酶的功能，阻止RNA尤其mRNA的合成。屬周期非特異性藥。多柔比星（doxorubicin，adriamycin）柔紅霉素（daunorubicin，rubidomycin）（四）抑制蛋白質(zhì)合成與功能的藥物1.微管蛋白活性抑制藥長(zhǎng)春堿類(lèi)與微管蛋白相結(jié)合，抑制微管聚集，破壞紡錘絲的形成。屬周期特異性藥物，作用于M期，也能干擾蛋白質(zhì)合成和RNA多聚酶，對(duì)G1期也有作用。長(zhǎng)春堿（vinblastine）長(zhǎng)春新堿（vincristin）長(zhǎng)春地辛（vindesine）長(zhǎng)春瑞賓紫杉醇類(lèi)促進(jìn)微管聚合，同時(shí)抑制微管解聚?防錘體失去正常功能?細(xì)胞有絲分裂停止于M期紫杉醇（paclitaxel）紫杉特爾（taxotere）2.干擾核蛋白體功能藥物三尖杉生物堿類(lèi)抑制蛋白合成的起始階段，并使核蛋白體分解。周期非特異性藥。三尖杉紫堿（harringtonine）高三尖杉紫堿（homoharringtonine）3.影響氨基酸供應(yīng)的藥物L(fēng)-天門(mén)冬酰胺酶可水解血清門(mén)冬酰胺，使腫瘤細(xì)胞得不到供應(yīng)，生長(zhǎng)受抑制。（五）調(diào)節(jié)體內(nèi)激素平衡的藥物雌激素類(lèi)治療前列腺癌和絕經(jīng)期乳腺癌雄激素類(lèi)晚期乳腺癌甲羥孕酮酯他莫昔芬雌激素受體的部分激動(dòng)劑，抗雌激素藥糖皮質(zhì)激素類(lèi)氨魯米特（aminoglutethimide，AG）特異性抑制雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素的芳香化酶，阻止雄激素轉(zhuǎn)變?yōu)榇萍に?。用于絕經(jīng)后晚期乳腺癌。（六）其他三氧化二砷（arsenictrioxide，AsT）促進(jìn)細(xì)胞分化，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。劇毒藥簡(jiǎn)述腫瘤的基因診斷和意義。免疫分子基因治療與癌基因有關(guān)的基因治療1）抑癌基因的導(dǎo)入或修飾2）反義核苷酸封閉或阻斷癌基因與抗腫瘤化療藥物相關(guān)的基因治療1）腫瘤藥物增敏基因治療2）腫瘤耐藥基因治療3）自殺基因治療其他抗瘤基因治療簡(jiǎn)述小RNA的種類(lèi)及其作用機(jī)制。tRNA,rRNA：蛋白質(zhì)的生物合成snRNA：mRNA剪接參與mRNA前體的剪接和可變剪接。異常mRNA可變剪接會(huì)導(dǎo)致人類(lèi)疾病。U1、U2、U4、U5、U6snRNA在mRNA剪接中發(fā)揮主要作用。snoRNA： rRNA加工和修飾在RNA轉(zhuǎn)錄中改變核苷酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)，參與RNA加工的因子，指導(dǎo)RNA轉(zhuǎn)錄后加工；指導(dǎo)RNA修飾，介導(dǎo)rRNA甲基化和假尿嘧啶；作為分子伴侶參與rRNA前體的折疊。miRNA：細(xì)胞增殖、分化控制線蟲(chóng)的發(fā)育過(guò)程；可以控制植物表型特征；調(diào)控造血干細(xì)胞的分化；參與腫瘤發(fā)生的過(guò)程。miRNA基因的缺失與B-細(xì)胞慢性淋巴球白血病相關(guān)。siRNA：基因沉默介導(dǎo)生物的表觀遺傳。特異性降解mRNA（RNAi）。gRNA：RNA編輯參與RNA編輯，在RNA轉(zhuǎn)錄中改變核苷酸的序列，如基因的插入、刪除和替代。Xist ：染色體失活端粒酶RNA：DNA復(fù)制shRNA：DNA修飾pRNA：運(yùn)動(dòng)分子SRP-RNA：信號(hào)分子Ribozyme：生物催化分子簡(jiǎn)述TAP-MS技術(shù)原理及應(yīng)用。請(qǐng)簡(jiǎn)述免疫共沉淀技術(shù)的原理及應(yīng)用。用抗體將相應(yīng)特定分子沉淀的同時(shí)，與該分子特異性結(jié)合的其他分子也會(huì)被帶著一起沉淀出來(lái)的技術(shù)。這種技術(shù)常用于驗(yàn)證蛋白質(zhì)之間相互特異性結(jié)合。其原理是：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來(lái)。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。簡(jiǎn)述基因表達(dá)調(diào)控的生物學(xué)意義。(一)適應(yīng)環(huán)境、維持生長(zhǎng)和增殖 生物體賴以生存的外環(huán)境是在不斷變化的，為了生存，所有活細(xì)胞都必須對(duì)外環(huán)境變化作出適當(dāng)反應(yīng)，調(diào)節(jié)代謝，以適應(yīng)環(huán)境變化。生物體適應(yīng)環(huán)境、調(diào)節(jié)代謝的能力與蛋白質(zhì)分子的生物學(xué)功能有關(guān)。而蛋白質(zhì)的水平又受基因表達(dá)的調(diào)控。(二)維持個(gè)體發(fā)育與分化 多細(xì)胞生物調(diào)節(jié)基因的表達(dá)除為適應(yīng)環(huán)境外，還有維持組織器官分化、個(gè)體發(fā)育的功能。 當(dāng)某種基因缺陷或表達(dá)異常時(shí)，則會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)組織或器官的發(fā)育異常。簡(jiǎn)述乳糖操縱元的基本調(diào)控方式。操縱元模型的提出大腸桿菌可以利用葡萄糖、乳糖、麥芽糖、阿拉伯糖等作為碳源而生長(zhǎng)繁殖。當(dāng)培養(yǎng)基中含有葡萄糖和乳糖時(shí)，細(xì)菌優(yōu)先使用葡萄糖，當(dāng)葡萄糖耗盡，細(xì)菌停止生長(zhǎng)，經(jīng)過(guò)短時(shí)間適應(yīng)，就能利用乳糖，細(xì)菌繼續(xù)呈指數(shù)式繁殖增長(zhǎng)。大腸桿菌利用乳糖至少需要兩個(gè)酶：促使乳糖進(jìn)入細(xì)菌的乳糖透過(guò)酶(lactosepermease)和催化乳糖分解第一步的β－半乳糖苷酶(β-galactosidase)。在環(huán)境中沒(méi)有乳糖或其他β-半乳糖苷時(shí)，大腸桿菌合成β-半乳糖苷酶量極少，加入乳糖2-3分鐘后，細(xì)菌大量合成β-半乳糖苷酶，其量可提高千倍以上，在以乳糖作為唯一碳源時(shí)，菌體內(nèi)的β-半乳糖苷酶量可占到細(xì)菌總蛋白量的3%。這種典型的誘導(dǎo)現(xiàn)象，是研究基因表達(dá)調(diào)控極好的模型。簡(jiǎn)述原核生物基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程并舉例說(shuō)明抗生素的原理。RNA合成主要包括四個(gè)步驟：RNA聚合酶結(jié)合于DNA上的特定位點(diǎn)；起始；鏈的延長(zhǎng)；鏈的終止和釋放?！緩?fù)制起始】1.拓?fù)洚悩?gòu)酶解開(kāi)超螺旋。2.DnaA蛋白識(shí)別并在ATP存在下結(jié)合于四個(gè)9bp的重復(fù)序列。3.在類(lèi)組蛋白、ATP參與下,DanA蛋白變性13個(gè)bp的重復(fù)序列,形成開(kāi)鏈復(fù)合物。4.DnaB借助于水解ATP產(chǎn)生的能量在DnaC的幫助下沿5?→3?方向移動(dòng)，解開(kāi)DNA雙鏈，形成前引發(fā)復(fù)合物。5.單鏈結(jié)合蛋白結(jié)合于單鏈。6.引物合成酶（DnaG蛋白）開(kāi)始合成RNA引物?！緩?fù)制延伸】復(fù)制的延伸階段同時(shí)進(jìn)行前導(dǎo)鏈和后隨鏈的合成。1、親代DNA由DNA解螺旋酶解開(kāi)雙鏈，產(chǎn)生的拓?fù)鋽U(kuò)張力由拓?fù)洚悩?gòu)酶釋放，分開(kāi)的單鏈被單鏈結(jié)合蛋白結(jié)合。2、DNA合成必需為5’?3’，在蛋白復(fù)制體參與下DNA進(jìn)行半不連續(xù)復(fù)制：前導(dǎo)鏈為連續(xù)復(fù)制：由引物合成酶（DnaG蛋白）在起點(diǎn)處合成一段RNA引物，DNA聚合酶Ⅲ在引物3'－OH開(kāi)始延伸，連續(xù)合成DNA子鏈。后隨鏈為非連續(xù)復(fù)制：引物合成酶合成引物（與解鏈方向相反）、DNA聚合酶Ⅲ在引物3'－OH延伸，形成岡崎片斷，DNA聚合酶Ⅰ切除引物，填補(bǔ)缺口，連接酶封閉缺口【復(fù)制終止】1、Tus蛋白與終止子位點(diǎn)ter結(jié)合，當(dāng)任意一個(gè)復(fù)制叉碰到一個(gè)功能性ter-Tur復(fù)合物時(shí)，就停止。而另一個(gè)復(fù)制叉碰到第一個(gè)被阻止的復(fù)制叉時(shí)也停止前進(jìn)。2、位于終止區(qū)內(nèi)尚未復(fù)制的序列（50-100bp）以修復(fù)合成的方式被填補(bǔ)。3、復(fù)制完成的2個(gè)子代DNA分子以連環(huán)體的形式鎖在一起，在拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ作用下分開(kāi)連鎖環(huán)。抗生素作用原理：（1）抑制細(xì)胞壁的形成，如青霉素，主要是抑制細(xì)胞壁中肽聚糖的合成。多氧霉素（一種效果很好的殺真菌劑）主要作用是抑制真攻細(xì)胞壁中幾丁質(zhì)的合成。（2）影響細(xì)胞膜的功能，如多粘菌至少與細(xì)胞結(jié)合，作用于脂多糖、脂蛋白，因此對(duì)革蘭氏陰性菌有較強(qiáng)的殺菌作用，制霉菌素與真菌細(xì)胞膜中的類(lèi)固醇結(jié)合，破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)。（3）干擾蛋白質(zhì)的合成，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)生物合成抑制微生物生長(zhǎng)的抗生素較多，如卡那霉素、鏈霉素等。（4）阻礙核酸的合成，主要通過(guò)抑制DNA或RNA的合成，抑制微生物的生長(zhǎng)，例如利福霉素、博萊霉素等。簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)合成的自體調(diào)控。組蛋白密碼，特定的組蛋白修飾能使與之相接觸的DNA結(jié)構(gòu)改變，進(jìn)而使染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)改變，影響與染色質(zhì)結(jié)合的蛋白因子（包括轉(zhuǎn)錄因子）的親和性，從而與特定的基因激活或抑制狀態(tài)相聯(lián)系。組蛋白的這種修飾類(lèi)似于遺傳信息傳遞中的密碼。修飾形式：組蛋白的酰基化(acetylation)、甲基化(methylation)、磷酸化(phosphorylation)、泛素化(ubiquitination)、ADP-核糖基化(ADP-ribosylation)、類(lèi)泛素化(sumoylation)。酰基化：一般激活基因轉(zhuǎn)錄甲基化：激活或抑制基因轉(zhuǎn)錄磷酸化：一般激活基因轉(zhuǎn)錄泛素化：一般激活基因轉(zhuǎn)錄修飾位置：常在核小體表面的核心組蛋白的N端尾部堿性氨基酸（賴氨酸K和精氨酸R），少數(shù)在C端和核