GMP質(zhì)量體系丙酸倍氯米松檢驗操作規(guī)程

PAGE4PAGE1目的：為檢驗丙酸倍氯米松規(guī)定一個標(biāo)準(zhǔn)的程序，以便獲得準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù)。范圍：適用于丙酸倍氯米松的檢驗。職責(zé)：檢驗室主任、檢驗員。規(guī)程：1．性狀:本品為白色或類白色粉末；無臭。本品在丙酮或氯仿中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中略溶，在水中幾乎不溶。1.1比旋度：取本品0.25g，精密稱定置25ml量瓶，加二氧六環(huán)溶解并定量稀釋至刻度，搖勻，按(SOP-QC-310-00)測定，比旋度為+88°至+94°為符合規(guī)定。式中：a：旋光儀讀數(shù)；W：樣品稱重量（mg）；，B：水分含量（%）。2.鑒別：2.1試劑與儀器2.1.10.4%氫氧化鈉溶液2.1.2磷酸2.1.35%硝酸鑭溶液潤濕濾紙2.1.40.02mol/L碘溶液2.1.5氨試液 2.1.6乙醇2.1.7試管2.1.8容量瓶2.1.9分光光度計2.1.10紅外光譜儀2.1.11電子天平(萬分之一克)2.2項目與步驟2.2.1稱取本品約25mg，按氧瓶燃燒法(SOP-QC-317-00)進(jìn)行有機破壞，以水20ml與0.4%氫氧化鈉溶液1ml為吸收液，燃燒完全后，溶液按氯化物的鑒別:⑴取供試溶液加硝酸使成酸性后，加硝酸銀試液即生成白色凝乳狀沉淀；分離沉淀加氨試液即溶解，再加硝酸，沉淀復(fù)生成為符合規(guī)定。⑵取供試溶液少量置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤，緩緩加熱，即發(fā)生氯氣，能使?jié)駶櫟牡饣浀矸墼嚰堬@藍(lán)色為符合規(guī)定。2.2.2取本品約20mg置試管中，加磷酸3～4滴，混勻，試管上端覆以5%硝酸鑭溶液潤濕濾紙，小火緩緩加熱至沸，取下濾紙條加0.02mol/L碘溶液1滴后，再加氨試液1滴，濾紙漸變?yōu)樗{(lán)紫色為符合規(guī)定。2.2.3取本品50mg，精密稱定置100ml量瓶中，加乙醇溶解并定量稀釋，搖勻，精密吸取2ml置50ml量瓶中加乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中含20μg的溶液。照分光光度法(SOP-QC-301-00)測定，在239nm的波長處有最大吸收，吸收度為0.57～0.60；在239nm與263nm波長處的吸收度比值應(yīng)為2.25～2.45為符合規(guī)定。2.2.4取本品，按紅外分光光度法(SOP-QC-302-00)測定，本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜一致為符合規(guī)定。3．檢查3.1試劑與儀器3.1.1氯仿-甲醇(9:1)3.1.2二氯乙烷-甲醇-水(95:5:0.2)3.1.3硅膠G薄層板3.1.4堿性四氮唑藍(lán)試液3.1.5層析缸3.1.6微量進(jìn)樣器3.1.7稱量瓶3.1.8恒溫干燥箱3.1.9坩堝3.1.10茂福爐3.1.11電子天平(萬分之一克)3.項目與步驟3.2.1其他甾體:取本品,精密稱取約0.15g置50ml量瓶中，加氯仿-甲醇（9:1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密吸取2ml，置100ml量瓶中，加氯仿-甲醇（9:1）稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。照薄層色譜法（SOP-QC-304-00）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯乙烷-甲醇-水(95:5:0.2)為展開劑，展開后，晾干。在105℃干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于2個，其顏色與對照溶液的主斑點比較，不得更深為符合規(guī)定。3.2.2干燥失重:取本品置稱量瓶中，精密稱定，按干燥失重測定法(SOP-QC-325-00)，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過0.5%為符合規(guī)定。3.2.3熾灼殘渣:稱取本品約1g，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，按熾灼殘渣檢查法(SOP-QC-327-00)，在700-800℃熾灼至恒重，不得過0.1%為符合規(guī)定。4.含量測定4.1試劑與儀器4.1.1C18硅膠色譜柱4.1.2丙酸倍氯米松對照品4.1.3甲睪酮對照品4.1.4甲醇4.1.5容量瓶(50ml,100ml)4.1.6單標(biāo)移液管(5ml,10ml)4.1.7電子天平(萬分之一克),稱量瓶4.1.8注射器(10ml),過濾器,濾膜4.1.9高效液相色譜儀4.2檢驗步驟:按高效液相色譜法(SOP-QC-306-00)檢測。4.2.1色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗：用C18硅膠色譜柱，流動相為甲醇-水（74:26）,流速為0.9ml/min，檢測波長為240nm。量取內(nèi)含丙酸倍氯米松對照品溶液與內(nèi)標(biāo)物溶液的混合對照溶液[*]20μl，注入液相色譜儀，丙酸倍氯米松峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于4.0，理論板數(shù)按丙酸倍氯米松峰計算應(yīng)不低于2500。4.2.2內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取甲睪酮12mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。4.2.3丙酸倍氯米松對照溶液與樣品溶液的制備及測定丙酸倍氯米松對照溶液與含內(nèi)標(biāo)溶液的混合對照溶液的制備: 取丙酸倍氯米松對照品約12.5mg，精密稱定置100ml量瓶中，加甲醇74ml使溶解用水稀釋至刻度，搖勻。[*]精密量取丙酸倍氯米松對照品溶液10ml與內(nèi)標(biāo)溶液5ml置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品的混合溶液。樣品溶液與內(nèi)標(biāo)溶液的混合液的制備及測定取樣品約12.5mg精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇74ml使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻；精密吸取10ml與內(nèi)標(biāo)溶液5ml置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為樣品的混合溶液。取20μl注入液相色譜儀，將對照品的混合溶液按同法測定，按下式計算本品中丙酸倍氯米松（C28H37ClO7）的折干含量，應(yīng)在 97.0%-103.0%為符合規(guī)定。Cd：本品的折干含量；CW：本品的濕品含量；B%：本品的含水百分?jǐn)?shù)；A1：樣品溶液中丙酸倍氯米松的峰面積或峰高；AS：內(nèi)標(biāo)物溶液中甲睪酮的峰面積或峰高；W1：樣品的稱樣量（g）；Ws：內(nèi)標(biāo)物的稱樣量（g）；f: 為校正因子；As、Ws:同上式意義；A2:丙酸倍氯米松對照溶液中丙酸倍氯米松的峰面積或峰高；W2: