細(xì)胞激活與增殖炎癥性介質(zhì)產(chǎn)生前炎癥性細(xì)胞因子分泌金屬蛋白酶及

青藤堿的藥理學(xué)根底研究香港浸會(huì)大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院周華2021.4.22長(zhǎng)沙?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104222主要內(nèi)容青藤堿的來(lái)源及性質(zhì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的簡(jiǎn)介青藤堿的抗關(guān)節(jié)炎藥理作用及作用機(jī)理青藤堿的其它藥理作用?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104223一.青藤堿的來(lái)源及性質(zhì)來(lái)源?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104224ImagescourtesyofQianX.Z.(plant)andDr.ZhaoZ.Z.(crudedrug)防己科青藤及毛青藤青風(fēng)藤化學(xué)性質(zhì)中藥青風(fēng)藤中提取的生物堿免疫抑制劑臨床用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病小白鼠口服半數(shù)致死量：580±51mg/kg?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104225青藤堿嗎啡二.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的簡(jiǎn)介

?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042271、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎〔RheumatoidArthritis，RA〕的性質(zhì)難治性自身免疫性疾病以關(guān)節(jié)的慢性炎癥和最終的骨關(guān)節(jié)破壞為特徵尚無(wú)理想治療方法及藥物，需長(zhǎng)程用藥?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU202104228在歐洲，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的記載至少可追朔至17世紀(jì)?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042292、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病特點(diǎn)人類發(fā)病率約為0.3~2.1%，全世界約有1800-6000萬(wàn)患者中國(guó)為低發(fā)病區(qū)，約為0.35%致殘率高、嚴(yán)重影響生存品質(zhì)：遷延性RA患者的20年死亡率為35%，致殘率為80%，其中19%為嚴(yán)重致殘40歲左右為高發(fā)病年齡，嚴(yán)重影響勞動(dòng)力，醫(yī)療經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)沈重?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042210為全身系統(tǒng)性免疫功能失調(diào)所致，病因未明，病理複雜主要表現(xiàn)為慢性關(guān)節(jié)周圍組織及關(guān)節(jié)滑膜炎癥，關(guān)節(jié)軟軟骨及骨破壞，反復(fù)發(fā)作，病情纏綿不愈SmolenJ.S.etal,2002,NatureReview(2)479?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042211細(xì)胞激活

與增殖炎癥性介質(zhì)

產(chǎn)生前炎癥性細(xì)胞

因子分泌金屬蛋白酶及其組織抑制因子平衡失調(diào)T淋巴細(xì)胞巨噬細(xì)胞滑膜纖維細(xì)胞關(guān)節(jié)滑膜炎癥關(guān)節(jié)軟骨及骨破壞關(guān)節(jié)滑膜增生關(guān)節(jié)疼痛關(guān)節(jié)功能

障礙關(guān)節(jié)僵硬關(guān)節(jié)炎癥類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)理和主要臨床表現(xiàn)IL-1TNF-IL-6?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042212Centralroleoftumornecrosisfactorα

(TNF-α)andinterleukin-1(IL-1)inthepathogenesisofrheumatoidarthritis.Anti-TNF,antiTNFantibody;TNFR,TNFreceptor;IL-1Ra,IL-1receptorantagonist;VSM,vascularsmoothmuscle;MMPs,matrixmetalloproteinases.?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422133、西藥治療RA的現(xiàn)狀和特點(diǎn)非甾體類抗炎藥〔NSAIDs〕：對(duì)乙酰氨基酚、扶他林、萘普生、布洛芬等緩解病情藥〔DMARDs)：甲氨喋呤、萊弗米特、羥基氯喹、柳氮磺氨吡啶、青黴胺、環(huán)胞素A、金製劑等生物製劑〔抗TNF及IL-1抗體〕：依拉昔普〔etanercept〕、英利昔單抗〔infliximab〕、阿那白滯素〔anakinra〕糖皮質(zhì)激素：強(qiáng)的松、地塞米松等這些藥物對(duì)許多病例的療效欠佳，或僅能緩解其癥狀，副作用較多，有的藥物價(jià)格昂貴?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042214有效藥物數(shù)量有限對(duì)撫慰劑對(duì)照臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的系統(tǒng)綜述說(shuō)明，僅局部藥物的臨床療效得到支持InfliximabCyclosporineSulphasalazineParenteralgoldAuranofinG.Jones.

Rheumatology,2003:42:6-13LeflunomideMethotrexate(MTX)CorticosteroidsIL-1receptorantagonist?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042215幾種常用藥物的平安性資料甲氨喋呤：7.5~15mg/每週，大鼠LD50：60mg/kg不良反應(yīng)：胃腸道癥狀、口腔炎、皮疹、脫髮，骨髓抑制、肝臟毒性、肺間質(zhì)變〔罕見但嚴(yán)重，可能危及生命〕肝臟毒性發(fā)生率：47/1000(SinghG,JRheumatol(1991))萊弗米特10~20mg/次/日；大鼠LD50:100-250mg/kg不良反應(yīng)：腹瀉、瘙癢、肝臟毒性、脫髮、皮疹肝臟毒性發(fā)生率：296/104000(約0.3%)，嚴(yán)重肝毒性：129/104000〔EMEA〕?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042216環(huán)胞素A3~5mg/kg/天，口服；大鼠LD50：94mg/kg不良反應(yīng)：高血壓、肝腎毒性、神經(jīng)系統(tǒng)損害、繼發(fā)感染和腫瘤，以及胃腸道反應(yīng)、齒齦增生、多毛等，48%患者6個(gè)月內(nèi)由於毒副作用而停藥(SinghG,JRheumatol(1991))依拉昔普30天治療需約US$1500，完成一個(gè)治療週期約需US$15000?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422174、中醫(yī)治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的特點(diǎn)RA屬於中醫(yī)學(xué)“痹癥〞範(fàn)疇中醫(yī)藥治療RA具有悠久的歷史，?黃帝內(nèi)經(jīng)?已有記載治療原則：袪風(fēng)，散寒，除濕，清熱，止痛等整體性治療，但同時(shí)對(duì)不同患者根據(jù)不同病情和病理階段，以及不同體質(zhì)，進(jìn)行“個(gè)體化治療〞?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042218應(yīng)用中藥復(fù)方治療：多種化學(xué)成分，通過(guò)多環(huán)節(jié)和多靶點(diǎn)的藥物作用，達(dá)致對(duì)疾病的複雜性病理進(jìn)行整合性調(diào)節(jié)；副作用小，病者的耐受性較好，適合于長(zhǎng)程治療病情控制后，較穩(wěn)定而不易復(fù)發(fā)?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042219現(xiàn)行市場(chǎng)流通的中藥製劑青藤鹼類正清風(fēng)痛寧片劑、注射液帕夫林〔白芍總皂苷〕雷公藤屬植物雷公藤製劑、火把花根片、昆明山海棠片含附子烏頭類風(fēng)濕骨痛膠囊、風(fēng)濕聖藥膠囊含蟲類藥物的複方製劑?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042220三.青藤堿的抗關(guān)節(jié)炎藥理作用

及作用機(jī)理LiuL.Int.J.lmmunopharmac.,Vol.18,No.10,pp.529543,1996?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422211、對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)的影響MeasurementsIncidenceofarthritisArthriticscoreandpawvolumeErythrocytesedimentationrate(ESR)Leucocytecount015101520…36Drugadmimistration:

SinomeninewasgiventoratsrightaftertheinjectionofMTonday0untilday36Inductionofarthritisbys.c.injectionofMycobacteriumtuberculosis(MT)NormalpawArthriticpawsTime(Day)Time(Day)TheEnd?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042222?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422232、對(duì)抗原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(AIA)的影響關(guān)節(jié)炎誘導(dǎo)D-21andD-14：皮下注射2mlmBSA/PBS+CFA〔0.5mg/ml+2mgMT/ml〕D0：右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射50μlmBSA/PBS(0.1mg)，左膝對(duì)照Flare-upatD42：右膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射50μlmBSA/PBS(0.1mg)，左膝對(duì)照?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042224LiuL.Int.J.lmmunopharmac.,Vol.18,No.10,pp.529543,19962、對(duì)抗原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(AIA)的影響治療方案短期：D-1~D6腹腔注射給藥，D7處死動(dòng)物，觀察藥物在關(guān)節(jié)炎發(fā)作期的作用中期：D-1~D14腹腔注射給藥，D19處死動(dòng)物，觀察藥物在關(guān)節(jié)炎發(fā)作期的作用，以及停藥后關(guān)節(jié)炎是否反跳長(zhǎng)期：D8~D41腹腔注射給藥，D42加強(qiáng)，D51處死動(dòng)物，觀察藥物在關(guān)節(jié)炎發(fā)作期長(zhǎng)時(shí)間的治療作用，以及停藥后是否能控制關(guān)節(jié)炎的再次誘發(fā)?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042225?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042226?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042227?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042228?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042229?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422303、對(duì)II型膠原型關(guān)節(jié)炎(CIA)的影響?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042231PrepareratsandloadCII/IFAintoasyringeIntradermallyinjectionofcollagenIIonday0and7Arthriticsignsappearedaroundday10-15PrepareCII/IFAemulsionZhouH.BBRC;376(2):352-357.?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042232Fig.1.Inhibitionoftheincidences(A),arthriticscores(B),hindpawvolumes(C),andESR(D)ofCIAratsbytreatmentwithsinomenine.Ratsweretreateddailyeitherwithani.p.injectionof25,50or100mg/kgsinomenineorvehicle,orwithanoraldoseof1mg/kgindomethacinbeginningonday0afterimmunizationwithCII/IFAuntilday30.*p<0.05,**p<0.01versusthevehicle-treatedrats(n=10).?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042233?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042234?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422354、抗炎鎮(zhèn)痛?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042236霍海如，等,西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),1989(4):第346-349頁(yè).5、作用機(jī)理〔RA患者〕抑制RA患者樹突狀細(xì)胞中TLR2和TLR4表達(dá)，從而抑制TLR介導(dǎo)的炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制趨化因子對(duì)RA患者樹突狀細(xì)胞的趨化作用，減少其趨化因子的分泌抑制樹突狀細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子-κB活性，阻斷其分化成熟，阻止它在RA發(fā)病中的抗原提呈作用抑制樹突狀細(xì)胞CD80mRNA、CD86mRNA的表達(dá)，阻斷對(duì)其T細(xì)胞的協(xié)同刺激抑制樹突狀細(xì)胞IL-12的分泌及其外表分子CD40、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表達(dá)，從而抑制樹突狀細(xì)胞激活T細(xì)胞的能力?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422375、作用機(jī)理〔RA患者〕調(diào)節(jié)Th1/Th2亞群間網(wǎng)絡(luò)失衡，抑制RA患者CCP-AST分泌IFN-γ水平，上調(diào)IL-4的表達(dá)下調(diào)bcl-2蛋白表達(dá)及阻滯G1期細(xì)胞向S期移行，誘導(dǎo)RA患者滑膜細(xì)胞凋亡抑制RA患者成纖維樣滑膜細(xì)胞的增殖，并下調(diào)MMP-3的表達(dá)抑制RA患者成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422385、作用機(jī)理〔動(dòng)物實(shí)驗(yàn)〕抑制滑膜細(xì)胞內(nèi)NF-κBp65核轉(zhuǎn)位和NF-κB的DNA結(jié)合活性下調(diào)致炎因子(IL-1,TNF)，上調(diào)抗炎因子(IL-4及IL-10)抑制炎癥局部區(qū)域細(xì)胞因子活性〔IL-1,TNF〕和降低炎癥介質(zhì)〔NO,PGE2〕含量降低滑膜細(xì)胞內(nèi)TNF-αmRNA及IL-1βmRNA的表達(dá)?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422395、作用機(jī)理〔細(xì)胞實(shí)驗(yàn)〕抑制T淋巴細(xì)胞活化和增殖,將細(xì)胞阻斷于G0/G1期,其作用可能與下調(diào)T細(xì)胞轉(zhuǎn)鐵蛋白受體的表達(dá)，減少細(xì)胞對(duì)鐵離子攝入有關(guān)通過(guò)影響鈣離子依賴的T細(xì)胞活化信號(hào)傳導(dǎo)途徑抑制T細(xì)胞活化異常抑制單核細(xì)胞的增殖，促進(jìn)其凋亡提高巨噬細(xì)胞吞噬能力，減少炎癥因子TNF-α、IL-6mRNA和蛋白表達(dá)抑制巨噬細(xì)胞NF-κBp65核移位和IκB-α降解有關(guān)?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU20210422405、作用機(jī)理〔細(xì)胞實(shí)驗(yàn)〕下調(diào)人外周血單個(gè)核細(xì)胞IL-1β、IL-8mRNA抑制人外周血單核細(xì)胞COX、IL-1β、TNF-α基因表達(dá)選擇性抑制COX-2的活性抑制DC的發(fā)育成熟和免疫應(yīng)答功能抑制TNF-α誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞VCAM-1的表達(dá)、抗血管平滑肌細(xì)胞增殖抑制肥大細(xì)胞增殖，能促進(jìn)肥大細(xì)胞凋亡，抑制肥大細(xì)胞活化脫顆粒抑制補(bǔ)體激活的中性粒細(xì)胞的溶酶體酶釋放?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042241?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042242四.青藤堿的其它藥理作用?腎病減輕實(shí)驗(yàn)性系膜增生性腎小球腎炎的腎臟病理?yè)p害，抑制腎小球分泌TNF-α及下調(diào)TNF-αmRNA的表達(dá),延緩疾病進(jìn)展減輕微小病變型腎病綜合征腎損害，減少蛋白尿保護(hù)糖尿病大鼠的腎臟，下調(diào)腎組織TGF-β1的表達(dá)水平抑制單側(cè)輸尿管梗阻模型小鼠腎間質(zhì)纖維化和肌成纖維細(xì)胞的積聚，降低BUN、SCr、FN、LN的含量，減少ICAM-1蛋白、MCP-1基因表達(dá)、TGF-β1蛋白表達(dá)減輕腎小球免疫性炎癥、改善腎功能?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042243缺血再灌注損傷糖尿病大鼠腦缺血再灌注損傷增加Bcl-2蛋白表達(dá)同時(shí)降低caspase-3蛋白減少Bax表達(dá)、上調(diào)Bcl-2/Bax比值減輕P-選擇素和ICAM-1所介導(dǎo)的炎癥反響減少再灌注損傷后PGE2含量、減輕血腦屏障通透性有關(guān)降低缺血再灌注損傷腦組織MCP-1和TNF-α含量，抑制再灌注損傷炎癥反響?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042244缺血再灌注損傷腦缺血再灌注損傷抑制腦組織NF-κBp65及ICAM-1表達(dá)和MPO活性，減輕IR后腦組織的炎癥反響和腦水腫抗凋亡、抑制炎癥反響和自由基〔MPO及MDA含量減少、SOD活性提高〕抑制再灌注損傷后COX-2表達(dá)，減少PGE2含量?AllRightsReservedtoZhouHua/HKBU2021042245缺血再灌注損傷心臟拮抗垂體后葉素引起的急性心肌缺血抑制H2O2誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡去除氧自由基保護(hù)O2-損傷的心肌細(xì)胞抑制乳鼠心