溶瘤腺病毒治療前列腺癌的臨床研究綜述,醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)論文

溶瘤腺病毒治療前列腺癌的臨床研究綜述,醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)論文前列腺癌在歐美為男性發(fā)病率最高，死亡率居第2位的惡性腫瘤。近年來(lái)我們國(guó)家前列腺癌呈現(xiàn)急劇增加的趨勢(shì)。由于我們國(guó)家尚未普及以前列腺特異性抗原〔PSA〕為基礎(chǔ)的人群篩查，約70%患者在就診時(shí)已處于進(jìn)展期或轉(zhuǎn)移性癌[1].早期局限性前列腺癌多采用根治性治療，如根治性手術(shù)、放療、離子植入、高能超聲聚焦等。根治性前列腺切除術(shù)被以為是治療局限性前列腺癌最有效的手段，但早期局限性前列腺癌術(shù)后仍有約35%患者出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)以及腫瘤轉(zhuǎn)移，局部進(jìn)展期前列腺癌約50%在治療后會(huì)出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)和腫瘤轉(zhuǎn)移[2].轉(zhuǎn)移性前列腺癌5年生存率約28%[3].轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者大多使用拯救性治療如內(nèi)分泌治療、化療等延長(zhǎng)生存時(shí)間和緩解異常感覺(jué)和狀態(tài)。但內(nèi)分泌治療只是在一定時(shí)間內(nèi)有效，所有患者最終會(huì)發(fā)展為去勢(shì)抵抗性前列腺癌。多西他賽為基礎(chǔ)的化療藥物可改善去勢(shì)抵抗性前列腺患者的生存，但化療耐藥最終導(dǎo)致化療失敗[4,5].近年來(lái)，隨著前列腺癌去勢(shì)抵抗的機(jī)制以及對(duì)雄激素受體通路的研究進(jìn)展，開(kāi)發(fā)了抑制細(xì)胞內(nèi)雄激素合成的藥物如阿比特龍[6]和非甾體抗雄激素新藥恩雜魯胺〔enza-lutamide〕[7],但這些制劑只能在一定程度上延緩疾病進(jìn)展，最終會(huì)出現(xiàn)耐藥導(dǎo)致疾病進(jìn)展致患者死亡。為了提高前列腺癌的治療效果和改善患者的預(yù)后，新的治療手段包括溶瘤腺病毒療法正在不斷探尋求索[8].溶瘤腺病毒是一種新型抗癌制劑，腺病毒經(jīng)過(guò)基因改造后能夠選擇性地在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并毀壞腫瘤，而對(duì)正常細(xì)胞傷害較小。溶瘤腺病毒從基礎(chǔ)研究進(jìn)入臨床試驗(yàn)均顯示了其安全性，病毒基因不會(huì)整合至宿主細(xì)胞的基因組，腺病毒基因改造操作容易，腫瘤細(xì)胞具有多個(gè)基因的突變恰恰是溶瘤腺病毒的理想靶向。另外，對(duì)病毒基因進(jìn)行修飾能夠加強(qiáng)病毒感染、復(fù)制、傳播及宿主的免疫逃逸能力，進(jìn)而加強(qiáng)溶瘤腺病毒的抗腫瘤效果，溶瘤腺病毒聯(lián)合其他治療方式方法如化療、放療、基因治療和免疫治療等可提高療效。因而，溶瘤腺病毒被以為是治療腫瘤有前途的手段之一。1溶瘤腺病毒腫瘤選擇性復(fù)制機(jī)制腺病毒治療腫瘤源于20世紀(jì)50年代[9],采用野生型腺病毒治療腫瘤，固然顯示了一定的療效，但野生型腺病毒既能夠在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，可以以在正常細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并傷害正常細(xì)胞，病毒對(duì)正常細(xì)胞的傷害導(dǎo)致了嚴(yán)重的不良反響，因此難以在臨床上推廣。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展以及對(duì)腺病毒構(gòu)造和功能的研究，對(duì)腺病毒進(jìn)行基因改造修飾，限制病毒在正常細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，提高病毒對(duì)腫瘤組織的特異性。理想的治療腫瘤的腺病毒應(yīng)該具備腫瘤細(xì)胞的選擇性或特異性，而正常細(xì)胞不受傷害的特點(diǎn)。當(dāng)前有兩種方式方法能夠限制腺病毒在正常細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制：一種方式方法是對(duì)病毒進(jìn)行基因修飾改造，消除病毒基因編碼的蛋白與正常細(xì)胞蛋白的結(jié)合，拆除了腺病毒在正常細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的必要條件進(jìn)而限制了病毒在正常細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制；另一種方式方法是在腺病毒基因內(nèi)插入編碼腫瘤細(xì)胞特異性蛋白的基因啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)病毒基因的表示出，使病毒選擇性地在表示出某種特異性蛋白的腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并毀壞腫瘤[10].腺病毒的復(fù)制需要細(xì)胞周期進(jìn)入S期，野生型腺病毒感染細(xì)胞后，其早期蛋白E1A與宿主細(xì)胞的Rb蛋白結(jié)合，激活E2F轉(zhuǎn)錄因子，迫使細(xì)胞周期進(jìn)入S期，進(jìn)而為腺病毒的復(fù)制提供了良好的環(huán)境。但是隨著E2F的激活，p53也被激活了。p53蛋白使細(xì)胞周期阻止在G1期或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而限制了病毒復(fù)制。然而腺病毒的E1B55KD蛋白能夠結(jié)合并使p53蛋白失活，最終使細(xì)胞周期進(jìn)入S期，進(jìn)而使腺病毒能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。為了阻止腺病毒在正常細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，對(duì)腺病毒進(jìn)行基因修飾改造，消除腺病毒E1B55KD,喪失了其與細(xì)胞p53蛋白結(jié)合的能力，p53蛋白可正常發(fā)揮作用阻止細(xì)胞周期進(jìn)展，限制了病毒在正常細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。同樣，對(duì)腺病毒E1A區(qū)與Rb蛋白結(jié)合位點(diǎn)基因施行消除或替換突變，消除E1A與Rb蛋白的結(jié)合能力，不能激活E2F轉(zhuǎn)錄因子，防止了細(xì)胞進(jìn)入S期，限制了病毒復(fù)制。經(jīng)過(guò)這樣修飾過(guò)的E1A或/和E1B突變腺病毒即便感染正常細(xì)胞由于不能改變細(xì)胞周期，缺乏腺病毒復(fù)制的必要條件，因此不能在正常細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，避免了病毒對(duì)正常細(xì)胞的傷害，進(jìn)而提高了腺病毒治療腫瘤的安全性。但是，對(duì)腺病毒的E1A或/和E1B基因進(jìn)行修飾對(duì)腫瘤細(xì)胞是不重要的，由于大多數(shù)腫瘤包括前列腺癌，具有廣泛的細(xì)胞周期調(diào)控因子的基因突變，包括Rb、p16、Bcl-2、p53、p27等，致使細(xì)胞周期失控，有利于腺病毒復(fù)制。因而，前列腺癌適于溶瘤腺病毒治療。另一種戰(zhàn)略是在腺病毒基因上插入組織或腫瘤特異性的啟動(dòng)子來(lái)控制病毒的復(fù)制[11].正常前列腺和前列腺癌組織細(xì)胞表示出雄激素和雄激素受體調(diào)控的前列腺特異性抗原〔PSA〕、人類腺激肽釋放酶2〔hK2〕和probasin蛋白，以及雄激素受體非依靠的前列腺特異性膜抗原〔PSMA〕，骨特異性蛋白和骨鈣素〔OC〕。前列腺癌還高表達(dá)人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶〔hTERT〕。在腺病毒基因組〔通常是E1A和E1B區(qū)〕插入前列腺或前列腺癌特異性表示出的基因啟動(dòng)子，則病毒只在前列腺或前列腺癌組織內(nèi)復(fù)制，而在正常細(xì)胞和非前列腺細(xì)胞內(nèi)不能復(fù)制，具有腫瘤高度選擇性復(fù)制的特點(diǎn)。前列腺特異性啟動(dòng)子研究最多的是PSA基因啟動(dòng)子，PSA具有前列腺高度特異性，無(wú)論是正常前列腺組織還是前列腺癌均表示出PSA,通常利用PSA的組織特異性將治療基因直接導(dǎo)入前列腺組織，PSA基因加強(qiáng)子核心區(qū)域包含與AR高度親和力的雄激素應(yīng)答元件〔ARE〕，ARE促進(jìn)PSA的基因表示出，雄激素和雄激素受體調(diào)節(jié)PSA啟動(dòng)子的活性。因而，在腺病毒的E1A或/和E1B基因部分插入前列腺特異性啟動(dòng)子/加強(qiáng)子〔PSE〕來(lái)驅(qū)動(dòng)腺病毒的表示出和復(fù)制，使得腺病毒能夠在表示出雄激素受體的前列腺細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，而不表示出雄激素受體的非前列腺組織細(xì)胞由于前列腺特異性啟動(dòng)子處于沉默狀態(tài)，不能驅(qū)動(dòng)腺病毒復(fù)制，進(jìn)而使腺病毒的復(fù)制限制在前列腺細(xì)胞內(nèi)，提高腺病毒對(duì)靶細(xì)胞的特異性。2溶瘤腺病毒治療前列腺癌的臨床前研究2.1細(xì)胞周期依靠性復(fù)制選擇性溶瘤腺病毒〔以p53,Rb轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑異常的腫瘤為靶向〕最早報(bào)道的復(fù)制選擇性溶瘤腺病毒是dl1520〔又叫做ONYX-015〕，該病毒具有E1B55KD缺失，能選擇性地在p53基因突變的腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并毀壞腫瘤細(xì)胞，而在正常細(xì)胞內(nèi)不能復(fù)制[12].另一方面，E1A區(qū)Rb結(jié)合位點(diǎn)突變的腺病毒dl922-947[13]和△24[13]不能結(jié)合并失活Rb蛋白，因此在Rb轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑正常的細(xì)胞如正常細(xì)胞內(nèi)不能復(fù)制，然而在Rb轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑異常的細(xì)胞如腫瘤細(xì)胞內(nèi)能夠復(fù)制。由于E1A或E1B單一突變的腺病毒被報(bào)道在正常細(xì)胞內(nèi)仍有一定程度的復(fù)制[14,15],我們先前報(bào)道了E1A和E1B雙突變的溶瘤腺病毒AxdAdB-3治療前列腺癌的研究[16],該病毒既有E1B55KD缺失也有E1A區(qū)Rb結(jié)合位點(diǎn)的突變，消除了腺病毒與細(xì)胞p53和Rb蛋白結(jié)合的能力，進(jìn)一步限制了其在正常細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，研究結(jié)果表示清楚AxdAdB-3比E1A或E1B單一突變體〔dl922-947,AxE1AdB〕具有更強(qiáng)的腫瘤殺傷效果，對(duì)正常細(xì)胞幾乎沒(méi)有毒性。我們采用人前列腺癌細(xì)胞株DU145成功建立了SCID小鼠原位前列腺癌模型，腫瘤內(nèi)注射AxdAdB-3抑制了小鼠前列腺腫瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)了小鼠生存時(shí)間[16].另一種限制病毒在正常細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的方式方法是刪除腺病毒的E1B19kD〔抗凋亡蛋白〕，可降低正常細(xì)胞對(duì)死亡受體誘導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和凋亡，進(jìn)而降低了腺病毒對(duì)正常細(xì)胞的傷害，Ad是E1A的Rb結(jié)合位點(diǎn)突變的腺病毒而且缺失抗凋亡蛋白E1B19kD,而且保存了E3區(qū)，用于前列腺癌的臨床前研究，病毒復(fù)制能力及溶瘤效果與野生型腺病毒類似，由于腺病毒保存了完好的E3區(qū)，E3能夠抑制宿主免疫反響，減少病毒被去除，因而其抗腫瘤效果更進(jìn)一步加強(qiáng)[17].腺病毒感染能力與細(xì)胞表示清楚腺病毒受體〔CAR〕的表示出密切相關(guān)，腫瘤細(xì)胞缺乏CAR的表示出會(huì)降低病毒感染效率和溶瘤效果，為了加強(qiáng)溶瘤腺病毒的感染能力，在腺病毒的纖維部分鏈接精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸〔Arg-Gly-Asp,RGD〕肽鏈，能夠特異性地與細(xì)胞外表的整合素v3或v5結(jié)合，即整合素依靠的感染。Suzuki等[18]重組了Ad5-D24RGD,包含E1A的Rb結(jié)合位點(diǎn)突變，同時(shí)，在病毒纖維部分鏈接了RGD肽鏈，與不含RGD肽鏈的Ad5-D24〔等同于△24〕病毒相比，Ad5-D24RGD顯著性增強(qiáng)了對(duì)LNCaP細(xì)胞的感染能力及殺傷效果。我們的研究結(jié)果同樣顯示了腺病毒介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷效果與細(xì)胞的腺病毒受體〔CAR〕的表示出水平呈正相關(guān)。前列腺癌細(xì)胞株〔DU145〕高表示出CAR,顯示了對(duì)腺病毒的易感性和強(qiáng)大的細(xì)胞殺傷效果，而PC3低表示出CAR,顯示了相對(duì)弱的細(xì)胞殺傷效果[16].因而,我們?cè)贏x-dAdB-3纖維部分連接RGD肽鏈，重組了AxdAdB3/F-RGD,討論了其對(duì)前列腺癌的治療效果，結(jié)果表示清楚，AxdAdB3/F-RGD無(wú)論是對(duì)CAR陽(yáng)性還是陰性細(xì)胞株均顯示了強(qiáng)大的細(xì)胞殺傷效果，其抑制PC3小鼠皮下腫瘤模型生長(zhǎng)的效果顯著性高于AxdAdB-3組。由于病毒復(fù)制致使腫瘤裂解、壞死，而腫瘤組織壞死不利于病毒向鄰近組織進(jìn)一步擴(kuò)散，另外，病毒注入有機(jī)體內(nèi)激發(fā)了宿主細(xì)胞的免疫系統(tǒng)，進(jìn)而去除病毒，降低了治療效果。為了克制這些缺點(diǎn)，研究者重組了溶瘤腺病毒ORCA-010〔Ad5-D24RGD-T1〕，該病毒包含E1A與Rb結(jié)合位點(diǎn)的突變,同時(shí)在病毒纖維部分插入RGD肽鏈，還有E3/19K基因的突變促進(jìn)宿主細(xì)胞裂解和病毒釋放，體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)顯示ORCA-010比第一代溶瘤腺病毒Ad5-D24RGD或ONYX-015具有更強(qiáng)的抑制前列腺癌的效果[19].2.2組織特異性啟動(dòng)子調(diào)控的復(fù)制選擇性溶瘤腺病毒〔以表示出PSA和PSMA的腫瘤為靶向〕腺病毒治療腫瘤面臨的挑戰(zhàn)之一是病毒對(duì)靶器官的特異性。一種戰(zhàn)略是前述的對(duì)腺病毒進(jìn)行基因修飾來(lái)完成的。另一種戰(zhàn)略是在腺病毒基因上連接腫瘤特異性的啟動(dòng)子來(lái)控制病毒的復(fù)制。前列腺或前列腺癌細(xì)胞特異性表示出某種受體，如PSA、hK2、probasin、PSMA、OC和hTERT.在腺病毒的E1A或/和E1B基因插入前列腺特異性的啟動(dòng)子〔PSE〕來(lái)調(diào)控E1A和E1B的功能，使腺病毒的復(fù)制限制在前列腺或前列腺癌細(xì)胞內(nèi)，提高腺病毒對(duì)靶細(xì)胞特異性復(fù)制的能力，構(gòu)建高度組織特異性的復(fù)制選擇性腺病毒。最早報(bào)道的前列腺組織特異性復(fù)制的溶瘤腺病毒是CN706,該病毒是在腺病毒的E1A區(qū)插入PSA基因的加強(qiáng)子〔PSE〕，由PSA調(diào)控E1A基因表示出，使得該病毒只能在產(chǎn)生PSA的細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，具有前列腺特異性靶向性，CN706在產(chǎn)生PSA的前列腺癌細(xì)胞株〔LNCaP〕內(nèi)的復(fù)制能力與CN702〔缺乏PSE〕類似，而在不產(chǎn)生PSA的前列腺癌細(xì)胞株〔DU145〕內(nèi)的復(fù)制能力比CN702下降了2000倍，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)同樣顯示：CN706顯著性抑制了LNCaP建立的小鼠皮下腫瘤，10只荷瘤小鼠中5只在治療后腫瘤消退，而CN706對(duì)DU145皮下腫瘤模型無(wú)治療效果，顯示了CN706對(duì)產(chǎn)生PSA的前列腺腫瘤具有高度選擇性復(fù)制及溶瘤效果，臨床上超過(guò)95%前列腺癌都產(chǎn)生PSA,因此CN706合適前列腺癌治療[20].hK2和PSA都是人類激肽釋放酶基因家族的相關(guān)成員，hK2基因近側(cè)啟動(dòng)子區(qū)域有雄激素應(yīng)答元件〔ARE〕，hK2加強(qiáng)子/啟動(dòng)子在PSA陽(yáng)性的LNCaP細(xì)胞是活化的，但在PSA陰性的細(xì)胞失活，Yu等[21]在腺病毒的E1A區(qū)插入PSA基因加強(qiáng)子〔PSE〕，調(diào)控E1A基因，同時(shí)在E1B區(qū)插入hK2加強(qiáng)子/啟動(dòng)子，調(diào)控E1B基因，構(gòu)建了腺病毒CV764,該病毒選擇性地在PSA陽(yáng)性的LNCaP細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，其對(duì)LNCaP的溶瘤效果比PC3〔PSA陰性〕細(xì)胞高出10000倍，顯示了對(duì)表示出PSA前列腺癌的高度特異性。固然CN706和CV764顯示了對(duì)前列腺癌的特異性復(fù)制和溶瘤效果，但對(duì)轉(zhuǎn)移性前列腺癌模型的治療效果不佳。因而，Yu等[22]構(gòu)建了溶瘤腺病毒CV787,該病毒在E1A部分插入大鼠probasin啟動(dòng)子，同時(shí)在E1B區(qū)插入PSE,與CN706和CV764不同的是，CV787保存了腺病毒的E3區(qū)，顯示了對(duì)轉(zhuǎn)移性前列腺癌的治療效果〔小鼠尾靜脈注射治療LNCaP建立的皮下腫瘤模型〕。轉(zhuǎn)移性前列腺癌最常見(jiàn)的轉(zhuǎn)移部位為骨轉(zhuǎn)移。骨鈣素〔OC〕是一個(gè)非膠原骨基質(zhì)蛋白，在前列腺癌組織和骨轉(zhuǎn)移灶組織都高表示出。有學(xué)者重組了復(fù)制型腺病毒Ad-OC-E1a,在E1A部分插入OC基因的啟動(dòng)子，調(diào)控腺病毒的E1A基因，將腺病毒限制在表示出OC轉(zhuǎn)錄活性的細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，該病毒無(wú)論是對(duì)產(chǎn)生PSA的前列腺癌細(xì)胞株LNCaP、C4-2、ARCaP,還是對(duì)不產(chǎn)生PSA的細(xì)胞株P(guān)C3和DU145都有殺傷效果,Ad-OC-E1a還對(duì)骨細(xì)胞和前列腺間質(zhì)細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，靜脈注射病毒顯著性抑制了前列腺癌骨轉(zhuǎn)移性腫瘤的生長(zhǎng)。該作者以為Ad-OC-E1a的抗腫瘤效果優(yōu)于先前報(bào)道的PSE調(diào)控的前列腺癌特異性復(fù)制型腺病毒Ad-PSE-E1a〔CN706〕[23].另有研究報(bào)道在腺病毒的E1A和E4區(qū)插入PSE增強(qiáng)子,構(gòu)建了溶瘤腺病毒AdE4PSESE1a,能夠特異性地在PSA/PSMA陽(yáng)性的細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，由于E4在腺病毒的感染、復(fù)制和細(xì)胞殺傷效果方面發(fā)揮著重要作用，PAdE4PSESE1a顯示了與野生型腺病毒類似的復(fù)制能力和細(xì)胞殺傷效果[24].研究報(bào)道約80%人類癌組織端粒酶活性增高，而端粒酶的活性遭到人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶〔hTERT〕的調(diào)節(jié)，hTERT的活性在腫瘤組織內(nèi)顯著性升高。因而，在腺病毒的E1區(qū)插入hTERT啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)病毒E1的表示出，構(gòu)建出溶瘤腺病毒〔OBP-301〕能夠選擇性地在高表示出hTERT的前列腺癌細(xì)胞〔LNCa,PC3,DU145〕內(nèi)復(fù)制并殺傷腫瘤細(xì)胞，而在不表示出hTERT的正常細(xì)胞〔PrEC,PrSC〕內(nèi)不復(fù)制，顯示了腫瘤高度選擇性復(fù)制的特點(diǎn)；同時(shí)，OBP-301腫瘤內(nèi)注射顯著性抑制LNCaP細(xì)胞建立的小鼠皮下腫瘤模型生長(zhǎng)[25].2.3溶瘤腺病毒加強(qiáng)了復(fù)制缺陷性腺病毒載體的基因表示出由于溶瘤腺病毒單獨(dú)使用治療腫瘤的效果有限，需要聯(lián)合其他治療方式方法來(lái)提高療效。使用復(fù)制型腺病毒加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因表示出是常用的戰(zhàn)略之一。基因治療采用表示出治療基因的腺病毒載體是常用的手段，但復(fù)制缺陷性腺病毒載體由于E1缺失而不能復(fù)制，基因轉(zhuǎn)染效率低，影響了抗腫瘤效果。溶瘤腺病毒與復(fù)制缺陷性腺病毒載體共同感染腫瘤細(xì)胞，由于復(fù)制型腺病毒提供了E1基因，使得復(fù)制缺陷性腺病毒載體基因表示出加強(qiáng)，進(jìn)而提高了基因治療效果，聯(lián)合治療具有溶瘤和基因治療的雙重效果。Ad-hOC-E1是由骨鈣素〔hOC〕啟動(dòng)子基因調(diào)控的能夠選擇性地在前列腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的溶瘤腺病毒，Ad-Flk1-Fc是復(fù)制缺陷性腺病毒載體，包含VEGFR-2〔Flk1〕胞外段和IgG2aFc段融合基因，該基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞，使之表示出Flk1-Fc,捕獲血液中的VEGF,阻斷細(xì)胞自/旁分泌產(chǎn)生的VEGF與VEGFR-2結(jié)合，進(jìn)而抑制血管新生和腫瘤生長(zhǎng)。學(xué)者討論了溶瘤腺病毒Ad-hOC-E1聯(lián)合復(fù)制缺陷性腺病毒載體Ad-Flk1-Fc治療前列腺癌，結(jié)果表示清楚，溶瘤腺病毒加強(qiáng)了復(fù)制缺陷性腺病毒載體的基因表示出，聯(lián)合應(yīng)用顯示了溶瘤效果和抑制血管新生的雙重效果，采用雄激素非依靠轉(zhuǎn)移性前列腺癌細(xì)胞株C4-2建立了小鼠皮下腫瘤模型，Ad-Flk1-Fc或Ad-hOC-E1單一使用使小鼠皮下腫瘤體積縮小了40%~60%,而聯(lián)合使用使腫瘤體積縮小了90%[26].同樣，E1A的Rb結(jié)合位點(diǎn)缺失的溶瘤腺病毒dl922/947,與E1缺失的復(fù)制缺陷性腺病毒載體Ad-Flk1-Fc共同感染前列腺癌PC3細(xì)胞，由于溶瘤腺病毒的感染可向E1缺失的腺病毒提供E1,進(jìn)而加強(qiáng)了轉(zhuǎn)基因表示出，dl922/947具有腫瘤選擇性復(fù)制并殺傷腫瘤細(xì)胞的特點(diǎn)，而Ad-Flk1-Fc轉(zhuǎn)染細(xì)胞可抑制血管新生和腫瘤生長(zhǎng)，兩種病毒單獨(dú)瘤內(nèi)注射使用均可抑制PC3建立的小鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)，兩者聯(lián)合應(yīng)用顯示了愈加明顯的抗腫瘤效果，體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)均顯示聯(lián)合使用顯著加強(qiáng)了Flk1-Fc的表示出[27].2.4溶瘤腺病毒作為載體介導(dǎo)的基因治療溶瘤腺病毒具有腫瘤選擇性復(fù)制的特點(diǎn)，將溶瘤腺病毒連接治療基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，不僅能夠特異性地將治療基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，而且病毒復(fù)制可擴(kuò)增目的基因，到達(dá)溶瘤和基因治療的雙重效果。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子〔TGF-〕在前列腺癌骨轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，抑制TGF-轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑將會(huì)抑制前列腺癌骨轉(zhuǎn)移，學(xué)者構(gòu)建了一個(gè)溶瘤腺病毒載體Ad.sTRFc,表示出sTGFbRIIFc,后者可直接與TGF-結(jié)合并抑制TGF-途徑，結(jié)果表示清楚，前列腺癌細(xì)胞株被Ad.sTRFc感染后檢測(cè)到了sTGFbRIIFc蛋白的表示出，并且抑制了TGF-轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，同時(shí)也顯示了病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制及細(xì)胞殺傷效果，靜脈注射表示出sTGFbRIIFc的復(fù)制缺陷性腺病毒載體和Ad.sTRFc都顯著性抑制了PC-3建立的小鼠骨轉(zhuǎn)移灶腫瘤的生長(zhǎng)，但Ad.sTRFc的治療效果愈加明顯，顯示了溶瘤和基因治療的雙重抗腫瘤效果[28].溶瘤腺病毒Ad5-24-sOPG-Fc-RGD,是在先前報(bào)道的E1A的Rb結(jié)合位點(diǎn)突變的溶瘤腺病毒24融合了骨保衛(wèi)素〔Osteoprotegerin,又稱破骨細(xì)胞抑制因子〕和Fc基因，同時(shí)在病毒纖維部分插入RGD〔整合素依靠的感染〕肽鏈。Ad5-24-sOPG-Fc-RGD顯著性抑制了小鼠前列腺癌骨轉(zhuǎn)移模型的生長(zhǎng)[29].前列腺特異性復(fù)制的溶瘤腺病毒需要雄激素激活前列腺特異性啟動(dòng)子來(lái)驅(qū)動(dòng)腺病毒復(fù)制，但是接受雄激素去除療法的患者由于雄激素水平低下而影響了前列腺特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的病毒復(fù)制。針對(duì)這些問(wèn)題，學(xué)者重組了前列腺特異性復(fù)制型腺病毒Ad5-PSE/PBN-E1A-ARC685Y,其E1A區(qū)融合了突變的雄激素受體〔AR〕的cDNA,雄激素受體的點(diǎn)突變改變了雄激素受體與其配體結(jié)合的特異性，無(wú)論是雄激素還是非甾體類抗雄制劑均能夠激活病毒復(fù)制，腺病毒聯(lián)合比卡魯胺和放療顯著性抑制了C4-2建立的小鼠皮下腫瘤模型[30].另有學(xué)者報(bào)道了溶瘤腺病毒載體介導(dǎo)的免疫基因治療，構(gòu)建了攜帶免疫基因的前列腺癌特異性溶瘤腺病毒載體Ad-PL-PPT-E1A,攜帶PSA和CD40L融合蛋白基因〔PSA-IZ-CD40L,PL〕，由于該病毒載體融合了前列腺癌特異性啟動(dòng)子PPTp,包含有PSA加強(qiáng)子PSAe、前列腺特異性膜抗原加強(qiáng)子PSMAe和TARPp〔T細(xì)胞受體鏈替代閱讀框蛋白〕順序連接而成，這些構(gòu)造調(diào)控腺病毒E1A基因，使病毒能夠選擇性地在前列腺癌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并殺傷前列腺癌細(xì)胞株，CD40L與腫瘤抗原融合表示出，能通過(guò)CD40L的靶向作用將腫瘤抗原帶到DC外表，進(jìn)而有效激活機(jī)體抗腫瘤免疫反響。Ad-PL-PPT-E1A顯著性抑制了前列腺癌移植瘤的生長(zhǎng)[31].2.5溶瘤腺病毒聯(lián)合其他療法治療前列腺癌盡管眾多報(bào)道顯示了溶瘤腺病毒能夠抑制腫瘤生長(zhǎng)，但幾乎沒(méi)有報(bào)道顯示溶瘤腺病毒單獨(dú)治療使腫瘤完全消退。因而，研究者討論溶瘤腺病毒聯(lián)合傳統(tǒng)的放化療來(lái)提高治療效果。Yu等[32]報(bào)道了CV706〔等同于CN706〕可加強(qiáng)放療對(duì)前列腺癌的敏感性，采用PSA陽(yáng)性的LNCaP細(xì)胞建立小鼠皮下腫瘤模型，CN706聯(lián)合放療與CN706單獨(dú)治療相比，腫瘤壞死增加了180%,與單獨(dú)放療相比，腫瘤壞死增加了690%.同樣，溶瘤腺病毒CG7870〔原先稱為CV787〕聯(lián)合放療治療前列腺癌顯示了協(xié)同效果,LNCaP建立的小鼠皮下腫瘤模型，溶瘤腺病毒和放療單獨(dú)治療39天后，腫瘤體積分別為基線的121%和126%,但聯(lián)合治療組腫瘤體積為基線的34%,顯示了溶瘤腺病毒聯(lián)合放療顯著性優(yōu)于單一療法[33].溶瘤腺病毒聯(lián)合化療的研究也顯示了良好的效果。CV787聯(lián)合化療藥物紫杉醇也包括多西他賽在前列腺癌治療方面顯示了協(xié)同效果，LNCaP細(xì)胞分別被病毒感染或多西他賽處理8天后，細(xì)胞生存率分別為80%和86%,而兩者聯(lián)合處理后細(xì)胞生存率只要10%,聯(lián)合治療顯著性抑制細(xì)胞生長(zhǎng)；采用LNCaP細(xì)胞建立小鼠皮下腫瘤模型，尾靜脈注射CV787或多西他賽治療，單獨(dú)治療組腫瘤在5周內(nèi)處于穩(wěn)定，而聯(lián)合組腫瘤完全消退。聯(lián)合治療療效顯著性優(yōu)于單一制劑，盡管聯(lián)合治療產(chǎn)生的協(xié)同作用其機(jī)制尚不清楚[34].YB-1結(jié)合蛋白的細(xì)胞定位調(diào)節(jié)與多重耐藥相關(guān)的基因MDR1和MRP1的表示出，研究者構(gòu)建了溶瘤腺病毒Xvir03表示出E1B55K和E4orf6,由于腺病毒的E1B55K介入YB-1蛋白的細(xì)胞定位,Xvir03感染不但具有溶瘤效果，也下調(diào)了多耐藥基因MDR1和MRP1的活性，進(jìn)而加強(qiáng)了腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性[35].前列腺特異性的溶瘤腺病毒〔AdE4PSESE1a〕聯(lián)合多西他賽治療前列腺癌的研究表示清楚，多西他賽可增加PSA/PSMA陽(yáng)性的前列腺癌細(xì)胞株C4-2、CWR22rv的CAR和整合素1的表示出，并且增加腺病毒的轉(zhuǎn)染效率，多西他賽聯(lián)合AdE4PSESE1a顯示了明顯的細(xì)胞殺傷效果，顯著性抑制CWR22rv建立的小鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)[36].第一代溶瘤腺病毒dl1520〔E1B55kD缺失〕和dl922-947〔E1A區(qū)Rb結(jié)合位點(diǎn)突變〕聯(lián)合多西他賽治療前列腺癌，體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示聯(lián)合治療顯著性優(yōu)于單一制劑。DU145建立的小鼠皮下腫瘤模型，溶瘤腺病毒和多西他賽單獨(dú)使用，平均小鼠生存時(shí)間分別為84天和68天〔對(duì)照組為44天〕，而溶瘤腺病毒聯(lián)合多西他賽治療組，顯著性延長(zhǎng)疾病進(jìn)展時(shí)間至168天，聯(lián)合治療顯示了明顯的治療效果[37].我們近期討論了E1A、E1B雙突變?nèi)芰鱿俨《続xdAdB-3聯(lián)合化療藥物多西他賽，吉西他濱和5-Fu治療前列腺癌的實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表示清楚，聯(lián)合治療顯示了顯著性細(xì)胞殺傷效果，AxdAdB-3聯(lián)合吉西他濱顯著性抑制了PC3建立的小鼠皮下腫瘤模型，聯(lián)合治療組約80%小鼠到達(dá)了完全緩解，而單獨(dú)治療組無(wú)完全緩解。3溶瘤腺病毒治療前列腺癌的臨床研究前列腺是非必需器官，而且超聲引導(dǎo)下前列腺內(nèi)注射治療劑是非常簡(jiǎn)便而且臨床上常用的手段，因而，前列腺內(nèi)注射溶瘤腺病毒作為前列腺癌的輔助治療或局部復(fù)發(fā)患者的拯救性治療是非常有用的，局部注射高濃度病毒也不易引起全身嚴(yán)重不良反響。最早報(bào)道臨床上用于前列腺癌患者治療的溶瘤腺病毒是CV706〔又稱作CN706〕，20例放療后復(fù)發(fā)的前列腺癌，采用經(jīng)直腸超聲定位下經(jīng)會(huì)陰將病毒直接注入前列腺內(nèi)，Ⅰ期臨床顯示了其安全性，并顯示了一定的療效，這是溶瘤腺病毒初次在臨床上用于治療前列腺癌的報(bào)道[38].隨后，前列腺特異性溶瘤腺病毒CG7870治療前列腺癌的Ⅰ期臨床研究作了報(bào)道，CG7870保存了腺病毒E3,能夠抑制宿主免疫反響，進(jìn)而加強(qiáng)溶瘤效果，靜脈注射治療去勢(shì)抵抗性前列腺癌，常見(jiàn)不良反響為類似流感的異常感覺(jué)和狀態(tài)〔發(fā)熱，疲憊，寒戰(zhàn)，惡心和/或嘔吐〕。70%〔16/23〕的患者血液中可檢測(cè)到病毒的復(fù)制，盡管接受治療的患者未發(fā)生嚴(yán)重毒副反響，但效果不甚理想，23例患者中只要5例患者血清PSA下降25%~49%[39].另一個(gè)研究采用表示出自殺基因的溶瘤腺病毒載體治療前列腺癌，腺病毒載體Ad5-CD/TKrep為E1B55K和E3缺失的腺病毒〔等同于ONYX-015〕攜帶雙自殺基因，對(duì)16例放療后復(fù)發(fā)的前列腺癌患者采用拯救性前列腺內(nèi)注射病毒載體進(jìn)行治療，94%患者有輕度至中度不良反響，44%〔7/16〕患者血清PSA下降超過(guò)25%,19%〔3/19〕患者血清PSA超過(guò)50%.治療后的腫瘤組織學(xué)上顯示了轉(zhuǎn)基因表示出和腫瘤壞死[40].繼續(xù)對(duì)這16例患者隨訪5年，88%〔14/16〕患者存活，75%〔12/16〕患者接受拯救性內(nèi)分泌治療，接受基因治療的患者PSA雙倍時(shí)間從17個(gè)月延長(zhǎng)至31個(gè)月。該作者以為對(duì)于放療后PSA復(fù)發(fā)的患者，采用表示出自殺基因的溶瘤腺病毒Ad5-CD/TKrep治療是一種不錯(cuò)的選擇[41].Ad5-CD/TKrep前列腺內(nèi)注射聯(lián)合外放療對(duì)15個(gè)新診斷的中高危前列腺癌患者進(jìn)行治療，平均隨訪9個(gè)月，結(jié)果顯示了聯(lián)合治療顯著優(yōu)于單一放療結(jié)果[42].同時(shí)表示出自殺基因的溶瘤腺病毒聯(lián)合調(diào)強(qiáng)放療〔IMRT〕治療前列腺癌的Ⅰ期臨床研究也顯示了安全性和良好的治療效果[43].近期，表示出自殺基因的溶瘤腺病毒聯(lián)合IMRT治療中危前列腺癌的前瞻性Ⅱ期臨床研究作了報(bào)道，聯(lián)合治療與單獨(dú)治療組在生活質(zhì)量方面無(wú)顯著性差異不同，84%患者在治療后2