第六章水體污染與自凈課件

一、實驗?zāi)康恼莆瘴⑸锍Ｒ?guī)培養(yǎng)基的制備方法學習無菌技術(shù)

學習玻璃器皿的包扎微生物培養(yǎng)基的配制與無菌技術(shù)

一、實驗?zāi)康奈⑸锱囵B(yǎng)基的配制與無菌技術(shù)1二、實驗內(nèi)容1、6種培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（細菌）高氏一號培養(yǎng)基（放線菌）馬丁氏培養(yǎng)基（真菌）淀粉培養(yǎng)基（淀粉水解試驗）蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗）葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（V.P試驗）2、移液管、培養(yǎng)皿、三角瓶、試管等的包扎3、滅菌微生物培養(yǎng)基的配制

無菌水的準備二、實驗內(nèi)容微生物培養(yǎng)基的配制無菌水的準備2三、實驗原理培養(yǎng)基medium:用人工的辦法將多種營養(yǎng)物質(zhì)按微生物生長代謝的需要配制成的營養(yǎng)基質(zhì)。水、C源、N源、礦物質(zhì)、生長因素/因子、微量元素培養(yǎng)基種類：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基的配制

三、實驗原理微生物培養(yǎng)基的配制3四、實驗步驟配制培養(yǎng)基的流程：原料稱量、溶解調(diào)節(jié)pH值(加瓊脂熔化)(過濾)定容分裝塞棉塞/扎口滅菌

四、實驗步驟配制培養(yǎng)基的流程：4培養(yǎng)基分裝裝置

培養(yǎng)基分裝裝置5斜面擺放法

斜面擺放法6棉塞的做法a)棉塞的制作過程(b)正誤棉塞棉塞的做法7培養(yǎng)皿的包扎培養(yǎng)皿的包扎8五、無菌技術(shù)在(利用微生物)進行研究實驗或生產(chǎn)過程中，采用物理和化學的方法技術(shù)，保證培養(yǎng)物不受環(huán)境微生物的污染，同時也不允許操作的微生物擴散到環(huán)境中去。如高溫滅菌、過濾、紫外線照射處理等。五、無菌技術(shù)在(利用微生物)進行研究實驗或生產(chǎn)過程中，采用物9五、無菌技術(shù)五、無菌技術(shù)10滅菌與消毒滅菌Sterilization：用物理或化學的方法來殺死或除去材料上或環(huán)境中的所有微生物的處理。消毒Disinfection：用物理或化學的方法殺死物體上絕大部分微生物（主要是病原微生物和有害微生物）的處理。消毒實際上是部分滅菌。防腐(Antisepsis)：防止或抑制霉腐微生物在食品等物質(zhì)上的生長化療(Chemotherapy)：殺死或抑制宿主體內(nèi)的病原微生物抑制(Inhibition)：生長停止，但不死亡死亡(Death)：生長能力不可逆喪失滅菌與消毒滅菌Sterilization：用物理或化學的方法11常用的滅菌方法干熱滅菌熱蒸汽滅菌常壓滅菌過濾除菌射線滅菌化學藥物滅菌常用的滅菌方法干熱滅菌121、火焰滅菌微生物接種工具如接種環(huán)、接種針或其它金屬用具等可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌。這種方法滅菌迅速徹底。接種過程中，試管或三角瓶口等，也可通過火焰灼燒滅菌。1、火焰滅菌微生物接種工具如接種環(huán)、接種針或其它金屬用具等可132、干熱滅菌用干燥熱空氣（160℃,1~2h）殺死微生物培養(yǎng)皿、漏斗、吸管、玻璃器具、解剖刀，接種、鑷子、剪刀等能耐高溫的器皿晾干后用牛皮紙包好溫度升到100℃，開箱內(nèi)鼓風機培養(yǎng)基、橡膠塑料制品不能用此方法注意安全2、干熱滅菌用干燥熱空氣（160℃,1~2h）殺死微生物14干熱滅菌箱鼓風鈕溫度調(diào)節(jié)器指示燈溫度調(diào)節(jié)旋扭溫度計與排氣孔干熱滅菌箱鼓風鈕溫度調(diào)節(jié)器指示燈溫度調(diào)節(jié)旋扭溫度計與排氣孔153、濕熱滅菌常壓蒸汽間歇滅菌將待滅菌的培養(yǎng)基或物品裝入常壓滅菌器內(nèi)，加熱至100℃大量產(chǎn)生氣體時,維持30—60min,每天滅菌一次,連續(xù)滅菌三天.每次蒸煮間隙里,培養(yǎng)基或物品應(yīng)放在室溫(20--30℃)條件下培養(yǎng),第一次蒸煮殺死微生物的營養(yǎng)體,芽孢則在培養(yǎng)過程中萌發(fā)成營養(yǎng)體;第二次蒸煮即可殺死.經(jīng)過二次培養(yǎng),三次反復蒸煮,即可達到完全滅菌。常壓蒸汽持續(xù)滅菌高壓蒸汽滅菌3、濕熱滅菌常壓蒸汽間歇滅菌163、濕熱滅菌常壓蒸汽間歇滅菌常壓蒸汽持續(xù)滅菌常壓蒸汽持續(xù)滅菌中,從蒸汽大量產(chǎn)生開始,繼續(xù)加大火力保持充足蒸汽,持續(xù)加熱3—6h,殺死絕大部分芽孢和全部營養(yǎng)體,達到滅菌目的。高壓蒸汽滅菌3、濕熱滅菌常壓蒸汽間歇滅菌173、濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌原理：水的沸點隨壓力的增加而提高。水在密閉的加壓蒸汽滅菌器中煮沸，產(chǎn)生蒸汽驅(qū)除鍋內(nèi)冷空氣后，使蒸汽不能逸出，因而增加了鍋中的蒸汽壓力。蒸汽壓力提高，水的沸點隨著上升，因而能夠獲得比100℃更高的蒸汽溫度，用來進行有效的滅菌。同一溫度下，濕熱滅菌法比干熱滅菌法效果好蒸汽穿透力強蛋白質(zhì)含水量高，易于凝固3、濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌18手提式滅菌鍋安全閥壓力表放氣閥軟管緊固螺栓滅菌桶篩架水手提式滅菌鍋安全閥壓力表放氣閥軟管緊固螺栓滅菌桶篩架水19臥式滅菌鍋

臥式滅菌鍋20是指含菌液體或氣體通過細菌濾器，使雜菌留在濾器或濾板上，從而除去雜菌。常用于許多不宜用濕熱滅菌的液體物質(zhì)，如抗生素、血清、糖類溶液等。用于除菌的細菌過濾器，是由孔徑極小，能阻止擋的陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃粉等制成.為了加快過濾,一般多采用抽氣減壓的方法,進行操作。4、過濾除菌是指含菌液體或氣體通過細菌濾器，使雜菌留在濾器或濾板上，從而21過濾除菌

過濾除菌22第六章水體污染與自凈課件23輻射滅菌(RadiationSterilization)是利用電磁輻射產(chǎn)生的電磁波殺死大多數(shù)物質(zhì)上的微生物的一種有效方法。用于滅菌的電磁波有微波，紫外線(UV)、X-射線和γ-射線等。5、射線滅菌輻射滅菌(RadiationSterilization)是24第六章水體污染與自凈課件25酚類——損傷微生物細胞壁和細胞膜、酶鈍化、蛋白質(zhì)變性

醇類——溶解膜中的類脂，破壞膜結(jié)構(gòu)，使蛋白變性（純的或高濃度酒精使菌體表面蛋白凝固，使乙醇不易滲進細胞）

醛類——與蛋白質(zhì)中氨基酸的多種基團共價結(jié)合而使其變性酸類——抑制微生物酶和代謝活性

表面活性劑——改變細胞的穩(wěn)定性和透性，細胞物質(zhì)逸出鹵化物——與細胞中的酶和蛋白質(zhì)中的酪氨酸結(jié)合，Cl2和漂白粉產(chǎn)生次氯酸和新生態(tài)氧（強氧化劑），破壞細胞膜結(jié)構(gòu)6、化學藥劑消毒或滅菌作用機理：酚類——損傷微生物細胞壁和細胞膜、酶鈍化、蛋白質(zhì)變性6、化26重金屬——與酶或蛋白質(zhì)上的—SH結(jié)合

氧化劑——使細胞成份氧化

染色劑——堿性染料的陽離子基團與蛋白質(zhì)氨基酸上的羧基或核酸上的磷酸基結(jié)合，阻礙正常代謝

抗生素——多種機理：作用于細胞壁、膜、蛋白質(zhì)、核酸等大分子合成抗代謝物——競爭抑制，如磺胺類藥物于對氨基苯甲酸類似，阻止葉酸的合成6、化學藥劑消毒或滅菌作用機理：重金屬——與酶或蛋白質(zhì)上的—SH結(jié)合6、化學藥劑消毒或滅菌27第六章水體污染與自凈課件28墻壁光滑，地面平坦，避免積累灰塵，便于清洗消毒；不裝風扇，通風換氣通過空氣調(diào)節(jié)裝置使用前，用2%新潔爾敏擦洗再用75%酒精（或5%石炭酸）噴霧，使灰塵落下最后用紫外燈照射約20min定期熏蒸：一年二~四次（細菌、真菌培養(yǎng)基檢驗）

用40%甲醛（6~10ml/m3)或加半量高錳酸鉀熏蒸，盛于鐵制容器，電爐或酒精燈加熱（應(yīng)能隨時終止熱源），熏蒸后密閉12h以上，使用前1~2h用氨水中和。其他熏蒸劑；乳酸（對細菌）、硫磺無菌室消毒墻壁光滑，地面平坦，避免積累灰塵，便于清洗消毒；不裝風扇，通29第六章水體污染與自凈課件30升汞（0.1%

HgCl2）漂白粉10g/150mlNaClO（2-10%）酒精75%苯酚（1%）福爾馬林（5%）過氧化氫（3%）氰化汞（0.1%）高錳酸鉀（2%）硝酸銀(0.1%)常用表面消毒劑升汞（0.1%HgCl2）常用表面消毒劑31酸性培養(yǎng)基:如10ml培養(yǎng)基中加三滴25%的乳酸

孟加拉紅：0.035g/L培養(yǎng)基抗菌素:金霉素（30μg/ml）可抑制多數(shù)細菌;青霉素（20μg/ml）可抑制G+細菌;多粘霉素（5.0μg/ml）可抑制G-細菌;鏈霉素(40μg/ml)和氯霉素(50μg/ml)可抑制大部細菌.

除氯霉素可滅菌前加入外，其它抗菌素都是在培養(yǎng)基滅菌后并冷卻到45℃左右時加入.

雙層培養(yǎng)基或蓋玻片細菌污染的排除抑制真菌：50~100u的放線菌酮或制霉菌素酸性培養(yǎng)基:如10ml培養(yǎng)基中加三滴25%的乳酸32五、注意事項牛肉膏、蛋白胨等的稱取淀粉、瓊脂的融化分裝培養(yǎng)基不沾瓶/管口調(diào)pH標記即時滅菌五、注意事項牛肉膏、蛋白胨等的稱取33演講完畢，謝謝觀看！演講完畢，謝謝觀看！34一、實驗?zāi)康恼莆瘴⑸锍Ｒ?guī)培養(yǎng)基的制備方法學習無菌技術(shù)

學習玻璃器皿的包扎微生物培養(yǎng)基的配制與無菌技術(shù)

一、實驗?zāi)康奈⑸锱囵B(yǎng)基的配制與無菌技術(shù)35二、實驗內(nèi)容1、6種培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（細菌）高氏一號培養(yǎng)基（放線菌）馬丁氏培養(yǎng)基（真菌）淀粉培養(yǎng)基（淀粉水解試驗）蛋白胨水培養(yǎng)基（吲哚試驗）葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基（V.P試驗）2、移液管、培養(yǎng)皿、三角瓶、試管等的包扎3、滅菌微生物培養(yǎng)基的配制

無菌水的準備二、實驗內(nèi)容微生物培養(yǎng)基的配制無菌水的準備36三、實驗原理培養(yǎng)基medium:用人工的辦法將多種營養(yǎng)物質(zhì)按微生物生長代謝的需要配制成的營養(yǎng)基質(zhì)。水、C源、N源、礦物質(zhì)、生長因素/因子、微量元素培養(yǎng)基種類：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基的配制

三、實驗原理微生物培養(yǎng)基的配制37四、實驗步驟配制培養(yǎng)基的流程：原料稱量、溶解調(diào)節(jié)pH值(加瓊脂熔化)(過濾)定容分裝塞棉塞/扎口滅菌

四、實驗步驟配制培養(yǎng)基的流程：38培養(yǎng)基分裝裝置

培養(yǎng)基分裝裝置39斜面擺放法

斜面擺放法40棉塞的做法a)棉塞的制作過程(b)正誤棉塞棉塞的做法41培養(yǎng)皿的包扎培養(yǎng)皿的包扎42五、無菌技術(shù)在(利用微生物)進行研究實驗或生產(chǎn)過程中，采用物理和化學的方法技術(shù)，保證培養(yǎng)物不受環(huán)境微生物的污染，同時也不允許操作的微生物擴散到環(huán)境中去。如高溫滅菌、過濾、紫外線照射處理等。五、無菌技術(shù)在(利用微生物)進行研究實驗或生產(chǎn)過程中，采用物43五、無菌技術(shù)五、無菌技術(shù)44滅菌與消毒滅菌Sterilization：用物理或化學的方法來殺死或除去材料上或環(huán)境中的所有微生物的處理。消毒Disinfection：用物理或化學的方法殺死物體上絕大部分微生物（主要是病原微生物和有害微生物）的處理。消毒實際上是部分滅菌。防腐(Antisepsis)：防止或抑制霉腐微生物在食品等物質(zhì)上的生長化療(Chemotherapy)：殺死或抑制宿主體內(nèi)的病原微生物抑制(Inhibition)：生長停止，但不死亡死亡(Death)：生長能力不可逆喪失滅菌與消毒滅菌Sterilization：用物理或化學的方法45常用的滅菌方法干熱滅菌熱蒸汽滅菌常壓滅菌過濾除菌射線滅菌化學藥物滅菌常用的滅菌方法干熱滅菌461、火焰滅菌微生物接種工具如接種環(huán)、接種針或其它金屬用具等可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌。這種方法滅菌迅速徹底。接種過程中，試管或三角瓶口等，也可通過火焰灼燒滅菌。1、火焰滅菌微生物接種工具如接種環(huán)、接種針或其它金屬用具等可472、干熱滅菌用干燥熱空氣（160℃,1~2h）殺死微生物培養(yǎng)皿、漏斗、吸管、玻璃器具、解剖刀，接種、鑷子、剪刀等能耐高溫的器皿晾干后用牛皮紙包好溫度升到100℃，開箱內(nèi)鼓風機培養(yǎng)基、橡膠塑料制品不能用此方法注意安全2、干熱滅菌用干燥熱空氣（160℃,1~2h）殺死微生物48干熱滅菌箱鼓風鈕溫度調(diào)節(jié)器指示燈溫度調(diào)節(jié)旋扭溫度計與排氣孔干熱滅菌箱鼓風鈕溫度調(diào)節(jié)器指示燈溫度調(diào)節(jié)旋扭溫度計與排氣孔493、濕熱滅菌常壓蒸汽間歇滅菌將待滅菌的培養(yǎng)基或物品裝入常壓滅菌器內(nèi)，加熱至100℃大量產(chǎn)生氣體時,維持30—60min,每天滅菌一次,連續(xù)滅菌三天.每次蒸煮間隙里,培養(yǎng)基或物品應(yīng)放在室溫(20--30℃)條件下培養(yǎng),第一次蒸煮殺死微生物的營養(yǎng)體,芽孢則在培養(yǎng)過程中萌發(fā)成營養(yǎng)體;第二次蒸煮即可殺死.經(jīng)過二次培養(yǎng),三次反復蒸煮,即可達到完全滅菌。常壓蒸汽持續(xù)滅菌高壓蒸汽滅菌3、濕熱滅菌常壓蒸汽間歇滅菌503、濕熱滅菌常壓蒸汽間歇滅菌常壓蒸汽持續(xù)滅菌常壓蒸汽持續(xù)滅菌中,從蒸汽大量產(chǎn)生開始,繼續(xù)加大火力保持充足蒸汽,持續(xù)加熱3—6h,殺死絕大部分芽孢和全部營養(yǎng)體,達到滅菌目的。高壓蒸汽滅菌3、濕熱滅菌常壓蒸汽間歇滅菌513、濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌原理：水的沸點隨壓力的增加而提高。水在密閉的加壓蒸汽滅菌器中煮沸，產(chǎn)生蒸汽驅(qū)除鍋內(nèi)冷空氣后，使蒸汽不能逸出，因而增加了鍋中的蒸汽壓力。蒸汽壓力提高，水的沸點隨著上升，因而能夠獲得比100℃更高的蒸汽溫度，用來進行有效的滅菌。同一溫度下，濕熱滅菌法比干熱滅菌法效果好蒸汽穿透力強蛋白質(zhì)含水量高，易于凝固3、濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌52手提式滅菌鍋安全閥壓力表放氣閥軟管緊固螺栓滅菌桶篩架水手提式滅菌鍋安全閥壓力表放氣閥軟管緊固螺栓滅菌桶篩架水53臥式滅菌鍋

臥式滅菌鍋54是指含菌液體或氣體通過細菌濾器，使雜菌留在濾器或濾板上，從而除去雜菌。常用于許多不宜用濕熱滅菌的液體物質(zhì)，如抗生素、血清、糖類溶液等。用于除菌的細菌過濾器，是由孔徑極小，能阻止擋的陶瓷、硅藻土、石棉或玻璃粉等制成.為了加快過濾,一般多采用抽氣減壓的方法,進行操作。4、過濾除菌是指含菌液體或氣體通過細菌濾器，使雜菌留在濾器或濾板上，從而55過濾除菌

過濾除菌56第六章水體污染與自凈課件57輻射滅菌(RadiationSterilization)是利用電磁輻射產(chǎn)生的電磁波殺死大多數(shù)物質(zhì)上的微生物的一種有效方法。用于滅菌的電磁波有微波，紫外線(UV)、X-射線和γ-射線等。5、射線滅菌輻射滅菌(RadiationSterilization)是58第六章水體污染與自凈課件59酚類——損傷微生物細胞壁和細胞膜、酶鈍化、蛋白質(zhì)變性

醇類——溶解膜中的類脂，破壞膜結(jié)構(gòu)，使蛋白變性（純的或高濃度酒精使菌體表面蛋白凝固，使乙醇不易滲進細胞）

醛類——與蛋白質(zhì)中氨基酸的多種基團共價結(jié)合而使其變性酸類——抑制微生物酶和代謝活性

表面活性劑——改變細胞的穩(wěn)定性和透性，細胞物質(zhì)逸出鹵化物——與細胞中的酶和蛋白質(zhì)中的酪氨酸結(jié)合，Cl2和漂白粉產(chǎn)生次氯酸和新生態(tài)氧（強氧化劑），破壞細胞膜結(jié)構(gòu)6、化學藥劑消毒或滅菌作用機理：酚類——損傷微生物細胞壁和細胞膜、酶鈍化、蛋白質(zhì)變性6、化60重金屬——與酶或蛋白質(zhì)上的—SH結(jié)合

氧化劑——使細胞成份氧化

染色劑——堿性染料的陽離子基團與蛋白質(zhì)氨基酸上的羧基或核酸上的磷酸基結(jié)合，阻礙正常代謝

抗生素——多種機理：作用于細胞壁、膜、蛋白質(zhì)、核酸等大分子合成抗代謝物——競爭抑制，如磺胺類藥物于對氨基苯甲酸類似，阻止葉酸的合成6、化學藥劑消毒或滅菌作用機理：重金屬——與酶或蛋白質(zhì)上的—SH結(jié)合6、化學藥劑消毒或滅菌61第六章水體污染與自凈課件62墻壁光滑，地面平坦，避免積累灰塵，便于清洗消毒；不裝風扇，通風換氣通過空氣調(diào)節(jié)裝置使用前，用2%新潔爾敏擦洗再用75%酒精（或5%石炭酸）噴霧，使灰塵落下最