生化選擇(考研版)

生化選擇1.20種氨基酸的名稱，分類含羥基：Ser，Thr，Tyr含酚基：Tyr含硫：Met，Cys最簡單的氨基酸：Gly亞氨基酸：Pro雜環(huán)氨基酸：Pro,Trp，His（含吲哚環(huán)：Trp，含咪唑環(huán)：His）芳香族氨基酸：PheTrpTyr（老方本色）酸性氨基酸（含兩個羥基）：AspGlu堿性氨基酸：Lys，Arg，His2.堿基DNA:A,T,C,GRNA:U,A,G,C3.必須氨基酸攜一兩本淡色書來（纈氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，色氨酸，蘇氨酸，賴氨酸）4.蛋白質(zhì)變性特點eq\o\ac(○,1)生物活性喪失eq\o\ac(○,2)理化活性突變：失去結(jié)晶能力，溶解度降低，粘度增加，易被水解5.核膜變性特點eq\o\ac(○,1)生物活性喪失eq\o\ac(○,2)理化活性改變：粘度降低，增色效應(yīng)（260nm）eq\o\ac(○,3)如果核膜變性特點為熱變性，變性特點:Tm值，躍變6.分子雜交Southern印跡法研究對象：DNANorthern印跡法研究對象：RNAWestern印跡法研究對象：蛋白質(zhì)7.測定蛋白質(zhì)含量的方法原理eq\o\ac(○,1)克氏定氨法（含氮量=16%）eq\o\ac(○,2)福林-盼試劑法eq\o\ac(○,3)雙縮脲法eq\o\ac(○,4)紫外分光度法8.測定蛋白質(zhì)分子量的方法原理eq\o\ac(○,1)凝膠過濾（測整個分子）eq\o\ac(○,2)SDS（測單鏈/亞基）eq\o\ac(○,3)生物質(zhì)譜（最準(zhǔn)確）9.蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定原理eq\o\ac(○,1)N末端氨基酸分析：二硝基苯胺法DNFB，二甲氨基萘磺酸氯法DNA-CL,Edman降解法（可以逐個切下AA）,氨肽酶法（理論可逐個切下AA，實際困難）eq\o\ac(○,2)C末端氨基酸分析：肽解法，羧肽酶法eq\o\ac(○,3)大分子多肽氨基酸分析：切成小肽片，找出重疊順序eq\o\ac(○,4)核酸推導(dǎo)法10.蛋白質(zhì)分離純化原理eq\o\ac(○,1)根據(jù)分子形狀和分子量的不同分離純化方法透析和超濾凝膠過濾密度梯度離心eq\o\ac(○,2)根據(jù)分子電離和性質(zhì)的分離純化方法電泳離子交換層析eq\o\ac(○,3)根據(jù)分子極性大小和溶解度不同的分離方法等電點沉淀鹽析沉淀低溫有機(jī)溶劑測定eq\o\ac(○,4)根據(jù)分子配基特異性不同的分離純化方法親和層析凝膠過濾（利用蛋白質(zhì)分子量的差異，使其通過具有分子篩性質(zhì)的凝膠，小分子進(jìn)入凝膠，大分子排阻其外，洗脫時大分子先流出，小分子后流出，洗脫液體積是分子量對數(shù)的線性函數(shù)）電泳（帶電質(zhì)點在電場中，向電荷相反的方向移動，蛋白質(zhì)除在等電點時具有電泳性質(zhì)）eq\o\ac(○,a)PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）：以聚丙烯酰胺凝膠帶作為支持物，具有電泳和凝膠過濾的特點（電泳，濃縮，分子篩），分辨率高。eq\o\ac(○,b)等電聚焦電泳：以兩性電解質(zhì)作為支持物，形成PH梯度，蛋白質(zhì)在此系統(tǒng)中電泳，在于其等電點相應(yīng)的PH梯度集中，達(dá)到分離的目的，常用于蛋白質(zhì)分離，純化，分辨率高。eq\o\ac(○,c)免疫電泳：把電泳技術(shù)和抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合，以瓊脂或瓊脂凝膠作為支持物，先將抗原中各蛋白質(zhì)組分經(jīng)凝膠電泳分開，然后加入特異性抗體，經(jīng)擴(kuò)散可造成免疫沉淀反應(yīng)，常用于蛋白質(zhì)鑒定，純度檢查。eq\o\ac(○,d)二維電泳：第一向為等電聚焦（等電點信息），第二向為SDS（分子量信息），樣品經(jīng)過電荷和質(zhì)量的兩次分離后，得到分子的等電點和分子量信息，一次可分離成千上萬種蛋白質(zhì)，是目前電泳技術(shù)中分辨率最高，信息量最多的技術(shù)。離子交換（以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時，結(jié)合力大小差別而達(dá)到分離目的，常用于大分子武職的分離純化）11.連接鍵，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的鍵糖（直連：α-1，4糖苷鍵；支鏈：α-1，6糖苷鍵）蛋白質(zhì)（一級：肽鍵/二硫鍵；二級：氫鍵；三級：疏水鍵/離子鍵/氫鍵/范德華力；四級：疏水鍵為主）核酸（一級：3’，5’-磷酸二酯鍵；二級：堿基堆積為主/氫鍵/離子鍵）12.糖代表物，及特點eq\o\ac(○,1)淀粉（植物多糖）eq\o\ac(○,2)糖原（動物多糖：主要儲存于肌肉/肝臟）eq\o\ac(○,3)葡聚糖（酵母菌/細(xì)菌多糖；代血漿）eq\o\ac(○,4)纖維素（植物細(xì)胞壁/支撐組織；如二乙氨基乙基纖維素（DEAE）為陰離子交換纖維素（陽離子光被洗脫），羧甲基纖維素（CMC）為陽離子交換纖維素（陰離子光被洗脫）；β-1，4糖苷鍵，哺乳動物不能水解，反芻動物可以水解；吸附物質(zhì)維持正常菌群平衡，保水刺激腸道促進(jìn)排便）eq\o\ac(○,5)瓊脂（凝固劑）eq\o\ac(○,6)粘多糖（透明質(zhì)：酸粘合保護(hù)細(xì)胞；硫酸軟骨素：降血脂；肝素：抗凝血）eq\o\ac(○,7)幾丁質(zhì)（甲殼素/殼多糖）eq\o\ac(○,8)細(xì)菌多糖（肽聚糖：細(xì)菌細(xì)胞壁，青霉素抑菌靶點；脂多糖：革蘭陰性菌細(xì)胞壁）13.脂肪代表物及其特點eq\o\ac(○,1)磷脂（卵磷脂：抗脂肪肝；腦磷脂：與血液凝固有關(guān)；鞘磷脂：磷酸膽堿為主要成分）eq\o\ac(○,2)糖脂（腦苷脂：細(xì)胞膜重要組分；神經(jīng)節(jié)苷脂：酸性，人類唾液酸，存在于大腦灰質(zhì)/神經(jīng)節(jié)/脾/紅細(xì)胞）eq\o\ac(○,3)類脂（膽固醇：動脈粥樣硬化/冠心病/膽結(jié)石，7-脫氫膽固醇經(jīng)紫外線照射生成VD3幫助Ca2+吸收；膽酸：熊去氧膽酸為膽結(jié)石溶解藥，去氫膽酸為利膽藥；膽汁酸：酰胺鍵，膽固醇主要代謝終產(chǎn)物，肝合成膽分泌，膽汁有苦味的主要原因，以膽鹽形式存在，膽鹽為乳化劑幫助脂肪消化吸收）14.結(jié)構(gòu)及特點eq\o\ac(○,1)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)=共價結(jié)構(gòu)=基本結(jié)構(gòu)：（連接鍵：肽鍵，少量二硫鍵）不同種類，不同數(shù)量的氨基酸在多肽鏈中的連接方式和排列順序。蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)：（主要次級鍵：氫鍵）指多肽鏈的主骨架中，若干肽單位各自沿一定的軸盤旋或折疊，以氫鍵為主要次級鍵而形成的有規(guī)則的構(gòu)象。主要包括：α-螺旋：右手螺旋，一周3.6個AA殘基，螺距0.54nm；氫鍵在第一與第四個肽單位之間，平行于中心軸；R側(cè)鏈在外側(cè)β-片層：結(jié)構(gòu)伸展；折疊成鋸齒狀；兩條或兩條以上肽鍵平行或反平行排列；氫鍵形成于相鄰肽鏈之間；R側(cè)鏈在片層上下β-轉(zhuǎn)角：回折180度，4個AA組成；氫鍵在第一與第四個AA之間；常出現(xiàn)在連接反平行β一片層端頭無規(guī)線團(tuán)：肽平面不規(guī)則排列蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu):(穩(wěn)定三級結(jié)構(gòu)的次級鍵：疏水鍵，氫鍵，鹽堿，范德華力)蛋白質(zhì)在二級結(jié)構(gòu)，超二級結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)域的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步的盤繞、折疊，從而產(chǎn)生特定的空間結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)：（穩(wěn)定的四級結(jié)構(gòu)的次級鍵：主要為疏水鍵）兩個或者兩個以上的結(jié)構(gòu)可以相同也可以不同的亞基之間相互作用，彼此以非共價鍵相連而形成的更復(fù)雜的構(gòu)象。eq\o\ac(○,2)核酸DNADNA一級結(jié)構(gòu)：（連接鍵3’，5’-磷酸二酯鍵）比較真核生物染色質(zhì)DNA與原核生物DNA一級結(jié)構(gòu)特點真核生物：a.重復(fù)順序（高度重復(fù)順序不編碼蛋白質(zhì)，中度重復(fù)順序編碼組蛋白，單一順序編碼其他蛋白質(zhì)）；b.間隔順序與插入順序；c.回文結(jié)構(gòu)原核生物：a.基因重疊；b.基因連續(xù)；c.轉(zhuǎn)錄得到的mRNA為多順販子DNA二級結(jié)構(gòu)：（二級結(jié)構(gòu)穩(wěn)定因素：堿基堆積力為主/氫鍵/離子鍵）DNA二級結(jié)構(gòu)-雙螺旋結(jié)構(gòu)模型結(jié)構(gòu)要點：watson和crick1953年提出；DNA二級結(jié)構(gòu)的主要模型，主鏈由兩條右手螺旋、反向平行的脫氧核苷酸鏈構(gòu)成，兩條鏈由堿基間氫鍵相連，A=TC≡G；磷酸基和脫氧核苷酸在外側(cè)，堿基在內(nèi)側(cè)，糖環(huán)平面與堿基平面相互垂直；直徑2nm，相鄰堿基對距離0.34nm，相鄰核苷酸夾角36度，一圈10個堿基對，螺距3.4nm；表面有大溝和小溝；堿基堆積力，氫鍵，離子鍵使其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定；與生物學(xué)功能的關(guān)系：第一次闡述了遺傳信息的儲存、傳遞方式，DNA復(fù)制機(jī)理，大溝和小溝有利于DNA和蛋白質(zhì)的相互識別DNA三級結(jié)構(gòu)：超螺旋eq\o\ac(○,3)核酸RNAtRNA一級結(jié)構(gòu)：70-90個核苷酸；較多稀有堿基；3’端有-CCA-OHtRNA二級結(jié)構(gòu)-三葉草形：氨基酸臂，DHV環(huán)，反密碼環(huán)，額外環(huán)，TψC環(huán)tRNA三級結(jié)構(gòu)-倒L形：橫（氨基酸臂，TψC臂），豎（DHV臂，反密碼臂）比較真核生物mRNA與原核生物mRNA結(jié)構(gòu)特點真核mRNA單順反子轉(zhuǎn)錄翻譯分開3端有polyA,5＇端有帽子結(jié)構(gòu)代謝慢，半衰期長原核mRNA多順反子轉(zhuǎn)錄翻譯耦合包括光導(dǎo)區(qū)，翻譯區(qū)，非翻譯區(qū)代謝快，半衰期短rRNA（略）eq\o\ac(○,4)其他比較DNA與RNA的結(jié)構(gòu)特點DNARNA名稱脫氧核糖核酸核糖核酸分布細(xì)胞核（主），線粒體細(xì)胞質(zhì)(主)，細(xì)胞核分類絕大多數(shù)生物：雙鏈，線性DNA少數(shù)病毒：單鏈，環(huán)狀DNA細(xì)胞質(zhì)：mRNA，tRNA，Rrna細(xì)胞核：HnRNA，SnRNA,ChRNA功能遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，貯存生物信息參與蛋白質(zhì)的生物合成組成脫氧核糖TACG核糖UACG連接鍵3＇，5＇-磷酸二酯鍵3＇，5＇-磷酸二酯鍵分子結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)是指脫氧核糖核苷酸的數(shù)量和排列順序二級結(jié)構(gòu)為雙螺旋結(jié)構(gòu)三級結(jié)構(gòu)為超螺旋結(jié)構(gòu)，真核細(xì)胞中為核小體結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)指核糖核苷酸的數(shù)量和排列順序二級結(jié)構(gòu)是發(fā)卡型的單鏈結(jié)構(gòu)，也有局部的小雙螺旋結(jié)構(gòu)。tRNA的二級結(jié)構(gòu)為三葉草型tRNA的三級結(jié)構(gòu)為倒L型對堿的穩(wěn)定性沒有2＇-OH，不易被堿水解有2＇-OH，易被堿水解生物學(xué)功能遺傳物質(zhì)的儲存和攜帶者參與蛋白質(zhì)合成哪些方法可以區(qū)別分子量相同的DNA和RNA？1.用專一性的核糖核酸酶（RNase）和脫氧核糖核酸酶（DNase）區(qū)分2.用堿水解，RNA有2＇-OH，易被堿水解；DNA沒有2＇-OH，不易被堿水解3.酸水解后，層析法或者電泳法分析單核苷酸，含U為RNA，含T為DNA4.顏色反應(yīng)，RNA中核糖脫水后，與地衣酚反應(yīng)，呈深綠色；DNA中的脫氧核糖脫水后，與二苯胺反應(yīng)，呈藍(lán)色15.P/O比H原子經(jīng)過呼吸鏈傳遞最終與氧結(jié)合生成水，同時釋放能量用于ADP磷酸化生成ATP，經(jīng)此過程沒消耗1mol氧原子所需消耗無機(jī)磷的摩爾數(shù)（也是生成ATP的摩爾數(shù)）稱為P/O比值，如NADH的磷氧比值是3，F(xiàn)ADHZ的磷氧比值是216.蛋白質(zhì)/氨基酸等電點（PI），及其計算1.使蛋白質(zhì)所帶正負(fù)電荷相等，凈電荷為0時的溶液PH值。2.酸性，堿性氨基酸比例不同，PI不同3.PH<PI,蛋白質(zhì)帶正電；PH=PI蛋白質(zhì)不帶電/沉淀；PH>PI,蛋白質(zhì)帶負(fù)電17.疾病原因eq\o\ac(○,1)分子病-鐮刀狀紅細(xì)胞貧血癥（紅血蛋白的β鏈第6位，正常應(yīng)為谷氨酸（親水性），患者為纈氨酸（疏水性），表現(xiàn)為患者血紅蛋白帶氧能力降低，易粘合沉淀，紅細(xì)胞被扭曲成鐮刀狀，易溶血）eq\o\ac(○,2)酶缺陷病苯丙酮尿癥（缺乏苯丙氨酸羥化酶）白化病（缺乏酪氨酸酶）尿黑酸癥（缺乏尿黑酸氧化酶）eq\o\ac(○,3)高血氨癥病因：肝功能損傷，尿素合成受阻18.重要藥物及符號SOD超氧化物歧化酶（防御超氧離子對人體的侵害）1.人體防御的內(nèi)外環(huán)境中，超氧離子對人體侵害的酶2.半衰期短，以Cu2+Zn2+為輔基3.可用于治療由于超氧離子而引起的疾病GSH谷胱苷肽（抗氧劑，保護(hù)-SH基，保護(hù)紅細(xì)胞膜的完整性）1.還原型GSH體內(nèi)重要的抗氧化劑，其還原量由NADPH+H+提供2作用：保護(hù)-SH基的還原性。在紅細(xì)胞內(nèi)，它保護(hù)紅細(xì)胞膜蛋白的完整性（若GSH不能保持還原態(tài)，紅細(xì)胞易于破裂，發(fā)生溶血性黃疸，常在食用黃豆后誘發(fā)，故稱為蠶豆?。?9.酶活力1.酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力2.其大小用一定條件下他所催化的化學(xué)反應(yīng)速率（酶活力單位）表示，反應(yīng)速度越大，酶活力越大20.比活力1.酶的純度用比活力表示，比活力越高，酶越純2.每毫克蛋白所具有的酶的活力單位數(shù)21.米氏常數(shù)1.用Km值表示2.酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)數(shù)獨一半時底物的濃度3.Km為酶的特征性常數(shù)，只與酶的性質(zhì)有關(guān)，與酶濃度無關(guān)，不同的酶有不同的Km4.Km越小，表示酶對底物的親和力越大22.競爭性抑制及其動力學(xué)效應(yīng)1.抑制劑（I）和底物（S）競爭酶（E）的同一個部位結(jié)合，相互排斥，E只能與I,S之一結(jié)合，ES減少，導(dǎo)致產(chǎn)物減少2.酶不能同時與I和S結(jié)合，不存在IES復(fù)合體3.I存在時,Vmax不變，Km增加4.抑制程度只與【I】成正比，與【S】成反比，增加【S】可解除抑制5如，磺胺類藥物23.非競爭性抑制，及其動力學(xué)效應(yīng)1.抑制劑（I）和底物（S）競爭酶（E）的不同部位結(jié)合，I與S互不相關(guān)，記不排斥也不促進(jìn)，S能與游離E結(jié)合也能與EI結(jié)合，但I(xiàn)ES不能釋放出產(chǎn)物2.I存在時，Vmax變小，Km不變3.抑制程度只與【I】成正比，與【S】無關(guān)24.酶專一性（第六版書P133-134）25.轉(zhuǎn)氨酶的輔酶磷酸吡哆醛（=VB6的磷酸酯）26.代謝限速酶場所轉(zhuǎn)運重要聯(lián)系點代謝物（丙酮酸、乙酰COA、α酮戊二酸、6-磷酸葡萄糖）抗代謝物（什么代謝物？抑制什么酶）一碳基團(tuán)合成原料水解酶作用點酶作用位點胃蛋白酶酸性-芳香胰蛋白酶堿