醫(yī)學(xué)蛭類與水蛭素參考模板

46/46醫(yī)學(xué)蛭類與水蛭素蛭類動物在我國俗稱螞蟥、水蛭、馬鱉等，全世界有六百余種，我國也有近百種。它們生活在淡水、潮濕的陸地以及海水里，作為暫時性體外寄生蟲有的取食魚、龜、鱉、蛙、水鳥以及像牛、馬和人這樣一些哺乳動物的血液，也有的取食蚯蚓、昆蟲幼蟲、蝦、蟹和螺、蚌之類的無脊椎動物的體液、組織以致整個身體。我國對蛭類動物的記載早在公元前2世紀(jì)漢朝初期的《爾雅》中已經(jīng)出現(xiàn)，對水蛭的應(yīng)用在《神農(nóng)本草經(jīng)》中記述較為詳細(xì)，謂其“主逐惡血、瘀血、月閉、破血消積聚┅┅┅┅”。醫(yī)圣張仲景（168-188）的《金匱玉幽經(jīng)》里所謂“下血”即是抗凝血的“破血”作用，由此可見我國早在公元2世紀(jì)便已發(fā)現(xiàn)水蛭的抗凝血功能了，這比西方國家利用水蛭的歷史要早千年以上。到15世紀(jì)我國明朝李時珍著的《本草綱目》中則對水蛭在內(nèi)科方面的藥效作了詳細(xì)的說明，并列舉出不少的民間處方，主要用來治療女子月閉、跌打損傷、漏血不止以及產(chǎn)后血暈等癥。古籍中還記載有把饑餓的螞蟥裝入竹筒扣在洗凈的皮膚上，令其吸食膿血以治療赤白丹腫以及將螞蟥研成干粉末與其它中藥配伍治療跌打損傷等癥。自梁代陶弘景《本草經(jīng)集注》以后歷代的《本草》中都認(rèn)為中藥用的螞蟥是指吸哺乳動物血液的種類。不管是水蛭、草蛭、山蛭、泥蛭，在吸牛、馬和人血這一點上是共同的，而且強(qiáng)調(diào)“用之當(dāng)以小者為佳”。但是我國早期的文獻(xiàn)不可能說清楚使用吸食哺乳動物血液的螞蟥治病的道理，以致在現(xiàn)今的《中國藥典》中仍然將不吸哺乳動物血液的寬體金線蛭（Whitmaniapigra）和尖細(xì)金線蛭（Whitmaniaacranulata）列為規(guī)定的種類，用作傳統(tǒng)中藥材,謂其功能是破血通經(jīng)，消積散瘀，消腫解毒和墮胎。在第二屆全國活血化瘀學(xué)術(shù)會議上，還籠統(tǒng)地將主要是寬體金線蛭的水蛭確定為35味活血化瘀中藥之一，歸屬于“作用峻裂的破血藥范疇”，這些都是缺乏科學(xué)依據(jù)的，也給水蛭的醫(yī)藥應(yīng)用造成了很大的混亂。筆者曾對我國安徽亳州、河南禹州、四川成都荷花池和湖北蘄春幾個主要中藥材市場銷售的水蛭以及近十種水蛭中成藥的原料作了調(diào)查，發(fā)現(xiàn)這些全都是一種不吸哺乳動物血液，終身取食螺類，主要生活在我國山東、江蘇、安徽和湖北廣大湖區(qū)以及長江流域及其以北各地河灘與池塘里的寬體金線蛭，全國每年消耗數(shù)以十噸計的干品，不斷地捕捉大大破壞了這個物種在自然界的資源分布，同時也是與我國古代《本草》中的記載以及現(xiàn)代生物醫(yī)藥研究成果不相符的。造成這種現(xiàn)狀的原因在于我國中醫(yī)藥管理、研制和臨床應(yīng)用部門缺乏對蛭類動物生物學(xué)與生物化學(xué)的深入認(rèn)識，不知道在動物分類學(xué)上是環(huán)節(jié)動物門一個綱的蛭類動物在我國就有近百個種，它們分屬于不同的目、科和屬，在形態(tài)結(jié)構(gòu)、取食習(xí)性、生活環(huán)境以及體內(nèi)所含生物活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能方面都是十分不相同的。幾個世紀(jì)以前西歐國家也開始使用水蛭治療心血管病、神經(jīng)系統(tǒng)病、炭疽、青光眼和乳突炎等病。18-19世紀(jì)醫(yī)蛭吸血法在歐洲曾風(fēng)行一時，隨著科學(xué)的進(jìn)步，這種帶有迷信色彩的治療方法才逐漸被放棄了。近百余年來，隨著西方國家首先對吸食哺乳動物血液的水蛭唾液腺分泌物的深入研究，人們又發(fā)現(xiàn)了它們在醫(yī)療臨床上的許多新用途。1884年威爾士國家醫(yī)學(xué)院?？死蛱兀↗.B.Haycraft）首先發(fā)現(xiàn)吸血水蛭咽部具有的水溶性抗凝血物質(zhì)。1904年雅各比（C.Jacoby）將這種物質(zhì)命名為“水蛭素”（Hirudin）。1955年德國馬克沃德特（F.Markwardt）首次從吸血水蛭體內(nèi)分離提取出較純的水蛭素，此后對水蛭素的純化和標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)日臻完善。迄今已有十多個國家公布了水蛭素研究的專利并有英國水蛭生物藥物公司（BiopharmUKLtd）、美國水蛭公司（LeechesU.S.A.Ltd）以及美國Sigma生化試劑公司等多家公司在銷售不同純度的天然水蛭素以及其它水蛭產(chǎn)品。研究表明水蛭素是已知最有效的天然凝血酶抑制劑，在治療某些血液性疾病方面優(yōu)于肝素，能夠更有效地抑制凝血酶誘發(fā)的彌散性血管內(nèi)凝血和靜脈血栓形成，在處理諸如敗血休克、動脈粥樣硬化、腦血管梗塞、心血管病、眼科以及遺傳性疾病等缺少抗凝血酶Ⅲ的病例方面顯示出巨大的優(yōu)越性，從而引起各國醫(yī)藥和生物學(xué)工作者的廣泛重視。除此以外，各國科學(xué)家還在吸血水蛭唾液腺分泌物中發(fā)現(xiàn)了許多與吸食哺乳動物血液相關(guān)聯(lián)的生物活性物質(zhì)，如麻醉劑（Anaesthetic）、血管擴(kuò)張劑（Vasodilator）、水蛭透明質(zhì)酸酶（Hyaluronidase,HAse）、裂纖酶（Hementin）、前列腺素（Prostaglandins）、抗生素（Antibiotic）、安替斯塔辛（Antistasin）以及博待啉（Bdellins）和伊格啉（Eglins）等其它蛋白酶抑制劑。目前國際上是將吸食哺乳動物血液，其唾液腺分泌物中含有水蛭素等多種生物活性物質(zhì)并且在醫(yī)藥上具有廣闊應(yīng)用情景的蛭類動物統(tǒng)稱為醫(yī)學(xué)蛭類。1986年至1990年先后在英國威爾士的斯旺西市、加拿大的多倫多市以及耶路撒冷召開了國際水蛭科學(xué)家學(xué)術(shù)討論會，筆者應(yīng)邀出席了其中兩次會議并在會上發(fā)言介紹了我國蛭類動物研究概況。1990年至2003年先后六次在歐洲各地召開了包括醫(yī)學(xué)蛭類在內(nèi)的國際生物治療學(xué)術(shù)討論會。然而至今我國沒有任何人報道過寬體金線蛭和尖細(xì)金線蛭體內(nèi)含有以上任何生物活性物質(zhì)，它們也不吸食哺乳動物的血液，所以在本書中筆者未將其歸入醫(yī)學(xué)蛭類的范圍加以介紹。我國有著豐富的吸食哺乳動物血液，其唾液腺分泌物中含有水蛭素等多種生物活性物質(zhì)并且在醫(yī)藥上具有廣闊應(yīng)用情景的醫(yī)學(xué)蛭類有待我們?nèi)ラ_發(fā)和利用，現(xiàn)將這些醫(yī)學(xué)蛭類的種類特征和生態(tài)分布列述如下。

9.2

我國醫(yī)學(xué)蛭類的種類特征和生態(tài)分布蛭類動物（Hirudinea）在動物分類系統(tǒng)中與寡毛類動物（Oligochaeta）作為兩個綱劃歸環(huán)節(jié)動物門（Annelida）的有環(huán)帶亞門（Clitellata）。它們都具有環(huán)帶，又都是雌雄同體動物并通過分泌容納受精卵的卵繭（cocoon）繁殖后代，胚胎發(fā)生也相同，都缺少外骨骼和功能性的葉足。在蛭綱中較高等的類群都有恒定的體節(jié)數(shù)而且又都具有用作運(yùn)動器官的尾吸盤，其中真蛭亞綱（Euhirudinea）是主要的類群。它們都有32個口后節(jié)，尾吸盤又都由7節(jié)組成，根據(jù)有無可伸縮的吻可以分成為吻蛭目（Rhynchobdellida）和無吻蛭目（Arhynchobdella）。在無吻蛭目中醫(yī)蛭形亞目（Hirudiniformes）較低等，多數(shù)有發(fā)達(dá)的顎，每個完全體節(jié)通常5環(huán)或更少。筆者在本書中討論的我國醫(yī)學(xué)蛭類就屬于醫(yī)蛭形亞目醫(yī)蛭科（Hirudinidae）中的醫(yī)蛭屬（Hirudo）和牛蛭屬（Poecilobdella）以及山蛭科（Haemadipsidae）中的山蛭屬（Haemadipsa）。根據(jù)筆者統(tǒng)計，目前我國已發(fā)現(xiàn)醫(yī)蛭屬2種、牛蛭屬6種、山蛭屬10種，它們在醫(yī)藥上都具有廣闊應(yīng)用情景，現(xiàn)將這3屬醫(yī)學(xué)蛭類主要種類的形態(tài)特征及其生態(tài)分布列述如下。

(一)醫(yī)蛭屬HirudoLinnaeus,1758體中型至大型，長度30-150毫米。背面通常有縱行的條紋。頭部背面有5對眼，甚明顯。體表感覺乳突通常背面8列，腹面6列。節(jié)IX至XXIII或XXIV為完全體節(jié)，每節(jié)5環(huán)相等。環(huán)帶占據(jù)15環(huán)，位于X至XIII。體內(nèi)嗉囊在節(jié)X至XIX之間，每節(jié)各有一對大的初生側(cè)盲囊和一對小的次生側(cè)盲囊，末對最大并向后伸至節(jié)XXV。水生種類，已知全世界有17種，我國僅有2種，其區(qū)分見以下檢索表。

醫(yī)蛭屬分種檢索表1（2）

背面黃白色縱紋寬闊，灰綠色的縱紋狹窄，腹側(cè)各有一條很細(xì)的灰綠色的縱紋，

陰道囊狹長┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅日本醫(yī)蛭Hirudonipponia2(1)

背面冬青綠色縱帶寬闊，淡綠色的縱紋狹窄，腹側(cè)沒有細(xì)長的縱紋，陰道囊卵

圓形┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅麗醫(yī)蛭Hirudopulchra

日本醫(yī)蛭HirudonipponiaWhitman,1886（圖9-1）身體狹長，略呈圓柱形，背腹稍扁平。體長30-60毫米；最大體寬4.0-8.5毫米；尾吸盤直徑40-5.5毫米。頭部背面有5對眼，大而明顯，在節(jié)II-VI背側(cè)排列成弧形。前3對各占一環(huán)；第3，4對相隔一環(huán)；第4，5對相隔2環(huán)。背面有5條黃白色的縱紋，以中間一條最寬和最長。黃白色的縱紋又將灰綠的底色隔成6道縱紋，以背中兩條最寬闊，背側(cè)的兩對較細(xì)。腹面兩側(cè)緣，各有一條很細(xì)的灰綠色縱紋。雄性生殖孔位于第31/32環(huán)溝上，雌性生殖孔位于第36/37環(huán)溝上，兩孔相隔5環(huán)。咽部有6條內(nèi)縱褶，背中及腹側(cè)各一對。陰道囊狹長。本種在我國分布很廣，北起東北各省和內(nèi)蒙古，西至四川和甘肅，南達(dá)臺灣和廣東，但以長江流域各地數(shù)量較多。廣泛棲息于水田及其與之相通的溝渠、池塘和沼澤中，特別是常年積水或排水不良的漚田和坂心田中數(shù)量最多。在水田里多集中在四角或田邊，也有鉆進(jìn)田埂泥土中的。每年11月底開始潛入深土中越冬，第二年3月下旬到4月上旬，當(dāng)氣溫達(dá)到10-13℃時開始出土活動。在長江中、下游地區(qū)，當(dāng)氣溫升至13-15℃時開始交配，約經(jīng)一個月后開始產(chǎn)繭，再經(jīng)過16-25天孵化，幼蛭即可以從繭中鉆出。通常每繭孵出3-22條幼蛭，多數(shù)10條左右。日本醫(yī)蛭是被中國藥典列入的唯一吸食哺乳動物血液的種類，也是具有很好醫(yī)療效果的種類，可以用于顯微外科手術(shù)后的吸血治療以及水蛭素、水蛭透明質(zhì)酸酶等生物活性物質(zhì)的分離和提取。

圖9-1日本醫(yī)蛭HirudonipponiaWhitman,1886背面觀全形圖

an.肛門；cs.尾吸盤；eyes眼；ggs.灰綠色的縱紋；

sen.體表感覺乳突；yws.黃白色縱紋.(筆者圖，1996)

（二）牛蛭屬PoecilobdellaBlanchard,1893身體中等大小至大型，長度40-210毫米，體形粗壯。皮膚粗糙，前后端成網(wǎng)狀或有許多疣狀突起。體色艷麗，有線形色斑或條紋，具有綠色、褐色或淡紅顏色。頭部背面5對眼，排列如醫(yī)蛭屬。共有15個完全體節(jié)，各有5環(huán)，在節(jié)IX至XXIII之間。體節(jié)感覺器大而明顯，是區(qū)分體節(jié)的標(biāo)記。兩生殖孔被5-9環(huán)隔開，分別位于節(jié)IX–XIII上。具齒的顎兩側(cè)表面有排列成3或4縱列的唾液腺乳突。雌性生殖器官很特殊，有一個很大的盲囊，陰道長短不一?？傒斅压芘c陰道一起開口向外，或開口到遠(yuǎn)離盲囊的陰道管端，或直接開口到盲囊上。水生種類，已知全世界有8種，我國已發(fā)現(xiàn)6種，主要分布在廣東、廣西、云南、海南以及福建等地，其區(qū)分見以下檢索表。

牛蛭屬分種檢索表1（5）

陰道短，總輸卵管與其一起開口向外┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅22（3）

兩生殖孔被7環(huán)隔開，雌生殖孔在節(jié)XIII的b1/b2上，尾吸盤直徑等于體寬

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅棒紋`牛蛭Poecilobdellajavanica3（4）

兩生殖孔被5環(huán)隔開，雌生殖孔在節(jié)XII的b5/b6上，尾吸盤直徑小于體寬

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅菲牛蛭Poecilobdellamanillensis4（3）

兩生殖孔被9環(huán)隔開，雌生殖孔在節(jié)XIII的b2/a2上，尾吸盤直徑接近體寬

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅遠(yuǎn)孔牛蛭Poecilobdellasimilis5（1）

陰道有長柄，總輸卵管開口到遠(yuǎn)離盲囊的陰道管端，或直接開口到盲囊上┅66（7）

陰道柄幾乎與盲囊及陰道管的長度相等，總輸卵管開口到遠(yuǎn)離盲囊的陰道管端

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅顆粒牛蛭Poecilobdellagranulosa7（8）

陰道盲囊呈卵圓形，總輸卵管直接開口到靠近陰道管的盲囊部位┅┅┅┅

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅湖北牛蛭Poecilobdellahubeiensis8（7）

陰道盲囊呈棒槌形，總輸卵管直接開口到遠(yuǎn)離陰道管的盲囊部位

┅┅┅┅

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅南京牛蛭Poecilobdellananjingensis

菲牛蛭Poecilobdellamanillensis(Lesson,1842)(圖9-2)個體較大，體長40-113毫米或更長；最大體寬3..5–20毫米；尾吸盤直徑3–14毫米，明顯小于體寬。身體狹長且扁平?；钪鴷r背面黃褐色或橄欖綠色，背中有一條不顯著的蘭灰色縱紋，體表皮膚體節(jié)感覺器大而明顯。兩生殖孔通常被5環(huán)隔開，雄生殖孔在XI的b5/b6上，雌生殖孔在節(jié)XII的b5/b6上。尾吸盤直徑明顯小于體寬。顎很大，兩側(cè)表面有排列成3或4縱列的唾液腺乳突，通常顎脊上約有150個銳利的齒。射精管粗大，呈紡錘形。精管膨腔短，呈圓球形并被一層疏松的腺體覆蓋著。陰道短，沒有柄，總輸卵管與其一起開口向外。本種在我國分布很廣，北起浙江南部、福建、臺灣、廣東、廣西、海南和香港均有發(fā)現(xiàn)，以兩廣和海南各地數(shù)量較多。生活于水田、溝渠或池塘里，主要吸食水牛和人的血液，造成危害。每當(dāng)插秧或在水田邊洗手造成水的波動時，菲牛蛭隨即漂游而來，甚至順著稻叢爬到人的手上吸血，吸飽血液后有的離去，有的前吸盤松開就像葫蘆狀懸掛在牛的肚皮下。吸一次血可以一年多不再吸血，只要有水仍能夠活得很好。據(jù)中國中醫(yī)研究院基礎(chǔ)理論所歐興長等人的研究證明菲牛蛭所含氨基酸總量為73.11%，在所測十種水蛭中含量最高，其抗凝血酶活性（176抗凝單位/克），在所測四種水蛭中最高?？梢娪梅婆ｒ蝸矸蛛x和提取水蛭素等生物活性物質(zhì)將是十分有前景的。圖9-2菲牛蛭Poecilobdellamanillensis(Lesson,1842)a.背面觀全形圖χ2；b.雌性和雄性生殖系統(tǒng)ⅹ6

an.肛門；cod.總輸卵管；cs.尾吸盤；de.射精管；eb.射精球；ep.貯精囊；

eyes

眼；ga.

蛋白腺；o.卵巢；od.

輸卵管；pr.前列腺；sp.側(cè)中斑點；

sen.

體節(jié)感覺器；ss.上緣斑點；vad.

陰道管；vc.

陰道盲囊；vd.輸精管。

（筆者圖，1996）

棒紋牛蛭Poecilobdellajavanica

(Wahlberg，1855)（圖9-3）圖9-3

棒紋牛蛭Poecilobdellajavanica

(Wahlberg，1855)

a.背面觀全形圖χ1.5；b.雌性和雄性生殖系統(tǒng)ⅹ4.5

an.肛門；at.精管膨腔；bas.棒紋；cod.總輸卵管；cs.尾吸盤；

de.射精管；ep.貯精囊；eyes

眼；ga.蛋白腺；o.卵巢；od.

輸卵管；ps.陰莖囊；sp.側(cè)中斑點；qs.方形側(cè)緣黑斑；sen.體節(jié)

感覺器；te.精巢；vad.

陰道管；vc.

陰道盲囊；vd.輸精管。

（a.筆者圖；b.自宋大祥等，1978）個體很大，體長60–170毫米或更長，個別的可達(dá)225毫米；最大體寬為10–19毫米；尾吸盤直徑10–19毫米，常常等于最大體寬。身體狹長且扁平?；钪鴷r體表顏色極為艷麗，背面橄欖綠或草綠色，偶爾橄欖棕色。背中自眼間區(qū)至肛門前，有一斷裂為22根棒的黑褐色縱紋。兩生殖孔通常被7環(huán)隔開，雄生殖孔在XI的b5/b6上，雌生殖孔在節(jié)XIII的b1/b2上。皮膚感覺器非常地大而明顯，伸長并與體軸傾斜或成直角。皮膚成網(wǎng)狀，特別是在身體的兩端。尾吸盤很大，直徑常常等于最大體寬的寬度。顎很大，兩側(cè)表面有排列成3或4縱列的唾液腺乳突，通常顎脊上約有100-140個銳利的齒。精管膨腔很短，具有比較寬的陰莖囊。陰道也短，沒有柄，總輸卵管與其一起開口向外。本種在我國云南西南部地區(qū)，如西雙版納等地廣泛分布，棲息于水田及其與之相通的溝渠、池塘和沼澤中，數(shù)量眾多。這些孽生地雜草叢生，水流緩慢或停滯。平時它們潛伏在草叢中，當(dāng)人、畜下水產(chǎn)生水波時立即漂游而來并爬到人、畜身上吸血，直至飽食后離去。雨季本種牛蛭最為繁盛，而在干旱季節(jié)里則極少見到，通常潛伏在泥草里越冬。（三）山蛭屬HaemadipsaTennent,1859身體小而細(xì)長，呈亞圓柱形，從尾吸盤至頭部漸漸變細(xì)，大小與形狀又隨取食程度而改變，通常8–50毫米長。棋盤格形的皮膚，特別是在頭部及尾吸盤上最明顯。頭部背面有5對大眼，分別位于第2、3、4、5、8環(huán)上或2、3、4、6、9環(huán)上，第4、5對眼被2環(huán)隔開。身體背面通常有縱紋及斑點。完全體節(jié)有5環(huán)。兩生殖孔通常被5環(huán)（節(jié)XIb5/b6和節(jié)XIIb5/b6）隔開，但少數(shù)種可能被更多的環(huán)隔開。尾吸盤巨大，在其背側(cè)與體部交界處有2或3對葉狀的耳狀突，腹面有許多明顯的輻射肋。口內(nèi)有3個非常高而明顯的顎，但其上沒有唾液腺乳突，具有銳利并彎曲排列的細(xì)齒。射精球不發(fā)達(dá)，呈梨形的精管膨腔小，其表面覆蓋有疏松的腺體。陰道分成為狹窄的管部和大而呈圓柱形的盲囊。已知全世界有12種和8亞種，我國已發(fā)現(xiàn)9種和2亞種，主要分布在華南和西南一些潮濕的山林地區(qū)，其區(qū)分見以下檢索表。山蛭屬分種檢索表1（2）在第3和第4眼之間幾乎總被多角形小區(qū)隔開，尾吸盤腹面通常有輻射肋74–76

條┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅

32（1）在第3和第4眼之間可以或不被多角形小區(qū)隔開，尾吸盤腹面通常有輻射肋71–

73條┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅

43（6）背部有3條黑色或暗褐色條紋，中央一條狹細(xì)，有時斷裂或完全消失┅┅┅┅

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅森林山蛭Haemadipsasylvestris4（5）身體通常紅褐色或橙色，具有黑色斑，背中有一條黃色或黃綠色條紋┅┅┅┅

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅斯里蘭卡山蛭，模式亞種Haemadipsazeylanicazeylanica5（8）身體顏色通常易變，但褐色斑點圖案不變，背中較暗的區(qū)域有一條黑色或褐色條紋┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅斯里蘭卡山蛭，敏捷亞種Haemadipsazeylanicaagilis6（7）背部有3條深褐色條紋，中央一條完整，貫穿前后

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅日本山蛭Haemadipsajaponica7（8）背中及兩側(cè)緣上方有3條黑褐色條紋，中央一條粗大┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅

┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅珠峰山蛭Haemadipsaqomolangma8（9）背中黃褐色帶狀區(qū)的邊緣有由17對弧形線聯(lián)結(jié)成的兩條黑褐色條紋，中央尚有一

根細(xì)條紋┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅鹽源山蛭Haemadipsayanyuanensis9（10）背中寬闊的淡黃色帶狀區(qū)的邊緣有的地方突向外側(cè)區(qū)內(nèi)，中央及其兩側(cè)有3條

較細(xì)的棕色條紋┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅海南山蛭Haemadipsahainana10（11）背中較寬的淺色帶狀區(qū)兩側(cè)共有6條粗而直的黑色條紋，無中央條紋┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅天目山蛭Haemadipsatianmushana11（12）背中寬闊的乳白色帶狀區(qū)共有5個條紋并在各節(jié)上有凸向外的斑塊，中央一條

狹細(xì)┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅┅

廣川山蛭Haemadipsaguangchuanensis12（11）背中乳白色帶狀區(qū)無中央條紋，內(nèi)背側(cè)一對縱紋粗而直，外背側(cè)一對縱紋細(xì)

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鹽邊山蛭Haemadipsayanbianensis

日本山蛭HaemadipsajaponicaWhitman,1886(圖9-4)身體短小，略呈圓柱形，前半部逐漸變得狹細(xì)。體長10–36毫米；最大體寬2–5毫米；尾吸盤直徑2.0–4.5毫米。體色黃褐，背面有深褐色的縱紋3條，中央一條較粗并貫穿身體前后，腹側(cè)沒有兩條縱紋。頭部背面有5對排列成弧形的大眼，分別位于第2、3、4、5和8環(huán)的背側(cè)，第3、4對眼常在連續(xù)的環(huán)上。完全體節(jié)各有5環(huán)，共有14節(jié)。雄生殖孔位于節(jié)XIb5/b6環(huán)溝上，雌生殖孔位于節(jié)XIIb5/b6環(huán)溝上，兩孔相隔5環(huán)。肛門在最后一環(huán)與尾吸盤交界線上。尾吸盤腹面通常有74–76條輻射肋。貯精囊甚大，呈U形來回折疊。陰道囊是一薄壁的葫蘆形盲囊。本種在我國主要分布于云南西部及西南部（如西雙版納等地區(qū)）、四川西南部，以及臺灣的山地。營陸地生活，棲息溫暖、潮濕的山谷和坡地樹林中，在高山圍成的平壩地帶最多，也見于池塘、溪溝的岸邊和稻田田埂雜草叢以及竹林中，但決不在平原上活動，不水溪亦不會游泳。一般呈點狀或塊狀分布，每平方米的雜草、石頭、泥土范圍內(nèi)可以采集到上百條之多。平時潛伏在草叢根基部分，石縫內(nèi)，苔蘚或落葉與枯枝上。離人、畜1米遠(yuǎn)以外即能感覺得到，動作十分敏捷，雨天時更為活躍。在夏秋兩季當(dāng)早晨霧水多時或雨后也極為活躍，靠近中午或下午太陽暴曬時以及干旱季節(jié)里則極少出來活動。在5–9月的雨季里山蛭進(jìn)行繁殖孳生，7月初可見到幼蛭，特別是8月初最多。每下一場雨即孵化出一批幼蛭，長約5–9毫米，呈圓柱形，生長迅速。在10月至次年3月的旱季里極少見到日本山蛭，通常從11月起在靠近積水的潮濕土里或石縫里蟄伏，次年4–5月才出蟄活動。

天目山蛭HaemadipsatianmushanaSong,1977（圖9-5）身體中等大小，呈圓錐形，背面隆起，腹面平坦。體長11–36毫米；最大體寬2.5–6毫米；尾吸盤直徑2–6毫米?；铙w時背面棕色或灰褐色，有許多不規(guī)則的灰黑色或黑色斑點。背中有一條較寬的淺色的帶狀區(qū)，其兩側(cè)共有6條3對粗而直的黑色縱紋。背側(cè)區(qū)色深，多黑褐色斑點。腹面有咖啡色的斑點或由斑點聚集成的斑塊，腹側(cè)有兩對平行的棕色縱紋，腹中為一條狹窄的銀白色區(qū)帶。貯精囊在遠(yuǎn)離射精球的地方螺旋盤繞。陰道囊粗而短，前部有一狹窄的頸部。本種僅見于我國，廣泛分布在華東、華中、華南以及西南一些潮濕的山地叢林里。先后在浙江天目山、湖北神農(nóng)架、河南太行山和大別山的南麓、四川峨眉山和鹽邊縣、廣東高州縣以及海南島發(fā)現(xiàn)。棲息于海拔600–2200米山地溫暖、潮濕、陰暗的原始森林、灌木叢、冷竹林、溪邊草叢和草坡上，尤其以小道旁邊和枯枝落葉中較多?；顒蛹竟?jié)一般在每年4月下旬夠至9月中、下旬，但以6月下旬至8月中、下旬小雨、雨后或者晨露未干之前時數(shù)量最多，也極為活躍。夏季至秋初在石塊下、枯枝落葉中、草叢和松土內(nèi)以及地表叢生的苔蘚中產(chǎn)繭。冬季僅偶而見與青苔和草被的下面。

圖9-4

日本山蛭HaemadipsajaponicaWhitman,1886

a.背面觀全形圖χ7；b.頭部背面觀ⅹ10;c.雌性和雄性生殖系統(tǒng)ⅹ10an.肛門；au.耳狀突；cs.尾吸盤；cod.總輸卵管；de.射精管；ds.背感器；eb.射精球；ep.貯精囊；eyes

眼；o.卵巢；od.輸卵管；pr.前列腺；ps.陰莖囊；st.條紋；te.精巢；va.陰道囊；vad.

陰道管；vd.輸精管。

（a，c筆者圖；b自宋大祥等，1978）

圖9-5天目山蛭HaemadipsatianmushanaSong,1977a.背面觀全形圖χ4.5；b.雌性和雄性生殖系統(tǒng)ⅹ10an.肛門；au.耳狀突；cs.尾吸盤；cod.總輸卵管；ds.背感器；ep.貯精囊；eyes

眼；o.卵巢；od.輸卵管；pr.前列腺；ps.陰莖囊；sp.斑點；st.條紋；te.精巢；va.陰道囊；vad.陰道管；vd.輸精管。（筆者圖，1996）

9.3

醫(yī)學(xué)蛭類的唾液腺分泌物及其活性成分蛭類動物的消化系統(tǒng)都是由口、口腔、唾液腺、食道、嗉囊、腸、直腸和肛門等部分組成的，而所有吸血蛭類的口都開口在前吸盤的腹中，口內(nèi)是一完全圍繞咽的口腔部分，在口腔內(nèi)通常有3個（或2個）呈三角形排列的肌肉性顎，在顎的脊緣上有幾丁質(zhì)或部分是鈣質(zhì)的單列齒，通常唾液腺開口在顎脊上的齒之間，但在牛蛭屬中則開口在顎兩側(cè)分散著的乳突上。由輻射肌和橫肌構(gòu)成的顎能牢固地貼在哺乳動物或人的皮膚上，借助三條或兩條環(huán)形鋸一樣的齒列往復(fù)地動作即可將皮膚割成“Y”形切口。當(dāng)口腔后的肌肉形咽鼓動時，由于負(fù)壓的作用血液可以自由地流入消化道內(nèi)。與此同時，咽頭和食道兩側(cè)的唾液腺分泌包含有水蛭素（hirudin）在內(nèi)的抗凝劑（anticoagulant）、血管舒張劑或叫類組織胺（histamine）以及麻醉劑的分泌物。將其注入傷口并與血液混合，從而使傷口血流量大增，流進(jìn)嗉囊儲藏的血液不會凝固，來自內(nèi)共生細(xì)菌的抗菌素則保護(hù)血液使之不致在消化之前就變質(zhì)（見圖9-6）。醫(yī)學(xué)蛭類在醫(yī)療臨床上的許多新用途，無疑是以對其唾液腺分泌物中生物活性成分的深入了解為基礎(chǔ)的。隨著對醫(yī)學(xué)蛭類唾液腺分泌物中生物活性成分認(rèn)識的不斷深化，它們在醫(yī)療臨床以及其它生命科學(xué)中必將發(fā)揮更重要的作用。圖9-6

日本醫(yī)蛭Hirudonipponia消化系統(tǒng)解剖圖a.

消化系統(tǒng)；b.和c.

顎及其附屬器官an.肛門；cr.嗉囊;

cs.尾吸盤；int.腸；ja.顎；mth.口；oe.食道；rt.直腸；salg.唾液腺；wr.

縱褶。

（筆者圖，1996）

(一)水蛭素（Hirudin）

關(guān)于天然水蛭素的研究、報道和專利，決大部分是利用歐洲醫(yī)蛭（Hirudomedicinalis）的頭部和整個身體做材料的，經(jīng)乙醇脫水，然后加丙酮沉淀等一系列的步驟而得到水蛭素粗制品的。1970年德國馬克沃德特（F.Markwardt）采用乙醇分級沉淀、陽離子交換、凝膠過濾以及陰離子交換等步驟獲得了水蛭素純品。1985年沃爾斯曼（P.Walsmann）和馬克沃德特改進(jìn)了純化方法，采用離子交換與親合色譜相結(jié)合而獲得了高純度的水蛭素。1986年約翰尼斯（Johannes）等人報道了一種五步純化法，其中使用了高效液相色譜新技術(shù)。根據(jù)前人的研究得知水蛭素是由65個氨基酸組成的低分子量多肽，其中谷氨酸和天門冬酰胺的含量較高，分子量為7000左右，含有三個二硫鍵。已分離鑒定出7種異構(gòu)體。二硫鍵是決定其分子構(gòu)型穩(wěn)定性，保持高抗凝活性的關(guān)鍵。當(dāng)二硫鍵被氧化或還原，或者分子發(fā)生了蛋白降解，則失去其抗凝活性。若水蛭素的羧基被酯化，或失去酸性的C-端氨基酸，也會失去與凝血酶結(jié)合的能力。水蛭素的等電點較低，在3.8–4.0之間。在室溫下能長期穩(wěn)定，而在70℃以下可以保持活性，干樣也可以保存一年，在水中加入百里酚結(jié)晶亦能保存6個月，其熱穩(wěn)定性隨pH值的減小而增加。水蛭素能被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶破壞，卻不受血纖維蛋白溶酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶A的影響。水蛭素通過阻塞凝血酶的底物結(jié)合基團(tuán)致使凝血酶失去活性，處在特異空間部位的水蛭素自由羥基與凝血酶自由氨基通過靜電引力而結(jié)合，產(chǎn)生的絡(luò)合物在凝血酶保持活性的整個PH范圍內(nèi)不會解離。1970年德國馬克沃德特首先報道了一種測定水蛭素含量的方法-凝血酶滴定法，即根據(jù)水蛭素與凝血酶反映速度快，在化學(xué)計量學(xué)上呈正相關(guān)關(guān)系，可以用抗凝血酶單位來表示水蛭素的含量，一個抗凝血酶單位(AT-U)是指在37℃下使1個國際單位的凝血酶失活所需的水蛭素量。一個抗凝血酶單位對應(yīng)于0.1微克的純水蛭素，一條成熟的吸血水蛭約含有285個抗凝血酶單位的水蛭素。由于水蛭素具有活性高、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、不易失活以及后期純化成本低的優(yōu)點，是開發(fā)抗凝、溶栓新藥的理想原料。

（二）水蛭透明質(zhì)酸酶（Hyaluronidase,HAse）

克勞德（Claude,1937）首先報道了在醫(yī)蛭提取液中有一種“擴(kuò)散因子”，后來林克爾等人（Linkeretal.,1960）證明這是一種透明質(zhì)酸酶。由于能夠?qū)Ｒ凰馔该髻|(zhì)酸的內(nèi)葡萄糖苷酸鍵，因此是一種內(nèi)切–β–葡糖苷酸酶(endoglycuronidase)，只降解透明質(zhì)酸而不降解其它粘多糖，活性能被10ˉ5mol/LHg++完全抑制，但不被肝素抑制。不同于從哺乳動物和其它動物組織中提取出來的內(nèi)切–β–N乙酰氨基葡糖苷酸酶和從微生物體內(nèi)提取出來的內(nèi)切己糖胺酶。它是分子量為28500的單體蛋白質(zhì)，在50℃以下穩(wěn)定，催化作用的最適pH是5.5，最適溫度是38℃，可溶于50%的硫酸銨溶液，在70%飽和度硫酸銨溶液中的溶解度最小，凍干制劑能保持活力許多個月。水蛭透明質(zhì)酸酶的活力單位被定義為：在pH5.5和38℃的最適條件下，一小時內(nèi)從透明質(zhì)酸中釋放1微克葡萄糖還原當(dāng)量的還原糖所需的酶量。一個這樣的單位大約相當(dāng)于對從哺乳動物來源的透明質(zhì)酸酶規(guī)定的國際單位的20倍，比活力規(guī)定為每毫克蛋白含有的單位數(shù)。赫斯特（Hirst,1941）證實了水蛭透明質(zhì)酸酶強(qiáng)有力的抗菌性能在于能溶解體內(nèi)和體外細(xì)菌的多糖被膜并形成抗體。水蛭透明質(zhì)酸酶能促進(jìn)藥物迅速穿透皮膚并在皮內(nèi)擴(kuò)散，在治療血栓性疾病時不被肝素抑制，因而具有比哺乳動物來源的透明質(zhì)酸酶更大的應(yīng)用價值。芭格達(dá)薩蘿娃（Bagdasarova,1969）首先發(fā)現(xiàn)水蛭透明質(zhì)酸酶在治療青光眼（白內(nèi)障）方面有很好的效果。英國人用其治療心血管病，也取得了良好的效果。由于水蛭透明質(zhì)酸酶能降解在細(xì)胞間起聯(lián)系作用的粘多糖–透明質(zhì)酸，如果將它與水蛭膠原酶一起使用則可以分散動物組織的細(xì)胞，便于挑取單個細(xì)胞進(jìn)行分代培養(yǎng)或細(xì)胞克隆，這在生物工程中特別是細(xì)胞工程中應(yīng)用很廣泛并已成為眼科和整形醫(yī)學(xué)中的有力工具。不像哺乳動物來源的透明質(zhì)酸酶，水蛭透明質(zhì)酸酶不能降解軟骨素或硫酸軟骨素，故可以在生物化學(xué)上用來原位鑒定透明質(zhì)酸，研究滑液、HA–纖維蛋白以及其它含HA分子的細(xì)胞間基質(zhì)。

（三）前列腺素(Prostglandins)

俄羅斯國立莫斯科大學(xué)巴斯柯娃等人(Baskovaetal.,1987)應(yīng)用放射免疫方法從歐洲醫(yī)蛭的頭部和整個身體中檢測出前列腺素并且是以6–Keto–PGF(簡稱6–KF)的前體形式出現(xiàn)，這是一種前列腺素轉(zhuǎn)化成的產(chǎn)物，具有明顯的抑制血小板聚集和抗動脈硬化的功能特性，副作用也小，而血小板聚集是引起動脈粥樣硬化和心肌梗塞的主要起因。6–KF前體多為一個具有五碳環(huán)和兩個雙鍵側(cè)鏈的二十碳脂肪酸（PGI2）,它能迅速轉(zhuǎn)化為性能穩(wěn)定的最終產(chǎn)物6–KF，利用檢測6–KF的含量變化可以判斷PGI2的含量以及消長變化。研究表明前列腺素是人體內(nèi)分布最廣，作用極大的一類生物活性物質(zhì),它通過對某些激素的調(diào)節(jié)來控制人體平滑肌的收縮、血液供應(yīng)（血壓）、神經(jīng)傳遞、發(fā)炎反應(yīng)、電解質(zhì)出鈉以及血液凝固等生理過程。在實際應(yīng)用中可以作為消散血栓和抗動脈脈粥樣硬化的藥物，是制造一系列具有良好性能藥物的原料。

（四）安逖斯塔辛（Antistasin）

美國費(fèi)城賓夕法尼亞醫(yī)院的生物化學(xué)家加西克等人（Gasicetal.,1983-1986）從一種墨西哥水蛭（Haementeriaofficinalis）的唾液腺中分離出來一種含有119個氨基酸的多肽，取名安逖斯塔辛（Antistasin，ATS）。無數(shù)動物的和離體的，用水蛭的以及重組體的安逖斯塔辛（rATS）做的實驗證明ATS能通過抑制含有fxα因子的血清酶來阻止血液凝固以及動脈和靜脈血栓形成，抑制培養(yǎng)的主動脈光滑肌增生，也能減少實驗動物腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散，使腫瘤細(xì)胞保持運(yùn)動狀態(tài)而無法聚集在一處。這樣十分有利于腫瘤患者體內(nèi)的免疫系統(tǒng)將腫瘤細(xì)胞各個擊破。ATS還在免疫組織化學(xué)實驗中常常用來發(fā)現(xiàn)含有fxα因子的惡性細(xì)胞一小細(xì)胞癌，是一種具有巨大治療優(yōu)勢的fxα因子抑制劑。fxα因子是一種培養(yǎng)光滑肌細(xì)胞的促細(xì)胞分裂劑并且能造成從內(nèi)皮細(xì)胞來的促細(xì)胞分裂劑的釋放。在體內(nèi)，這些影響可能是對內(nèi)膜過度增生促成的主要因素，因此ATS有抑制從內(nèi)膜細(xì)胞來的以及在培養(yǎng)中來的fxα因子的作用。在動物模型中已證明ATS的體內(nèi)治療半壽期在30小時以上，它是一種穩(wěn)定的多肽抗凝劑。常用的抗凝劑肝素有較低的治療學(xué)指數(shù)以及較高的出血危險，有可能危及血小板功能的安全并且對抗凝血酶Ⅲ缺乏癥病人的治療是無效的。重組體的安逖斯塔辛（rATS）在體內(nèi)有長的治療半壽期，不會因治療劑量產(chǎn)生出血或影響出血時間。因此rATS是一種對正常止血有最小影響的有效血栓抑制劑。概括地說安逖斯塔辛（ATS）是一種有效的，實用的，具有出血性并發(fā)癥最小危險的抗凝劑，至少有等于促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin,EPO）一樣的商業(yè)價值。

9.4醫(yī)學(xué)蛭類化學(xué)感受器的特異性以及唾液腺分泌物的采集蛭類動物為了取食、生殖和自身的防御必須不斷地通過光、水波、化學(xué)物質(zhì)及物理刺激來接受周圍環(huán)境的信息，對每種信息又有相應(yīng)的感覺結(jié)構(gòu)。在水蛭身體中部體節(jié)上有由兩極細(xì)胞構(gòu)成的皮膚感器（sensillae），這種感器對微弱的水?dāng)_動和光刺激都非常敏感，可以發(fā)現(xiàn)和傳導(dǎo)這些微弱刺激。水蛭對包括食物在內(nèi)的種種化學(xué)刺激，特別是吸血種類對血液刺激的反應(yīng)都局限于頭部背唇及口部皮膚上的化學(xué)感受器(chemoreceptors)。所有的皮膚感受器都是通過神經(jīng)系統(tǒng)的傳導(dǎo)，使身體作出相關(guān)行為反應(yīng)的。美國埃利奧特博士（Elliott,1987）發(fā)表了她用掃描和透射電子顯微鏡觀察排列在歐洲醫(yī)蛭頭部及口部皮膚上化學(xué)感受器的結(jié)果。發(fā)現(xiàn)頭部背唇皮膚上有大小不同的兩類紐扣狀的纖毛墩（mound），較大的一類直徑約35微米，較小的一類直徑約10微米，它們由具有均勻長度的多纖毛細(xì)胞組成，這與具有長鞭狀纖毛和短硬纖毛的皮膚體節(jié)感器在形態(tài)和功能上都不相同。除了背唇皮膚上的纖毛墩以外，在口的內(nèi)側(cè)皮膚上還發(fā)現(xiàn)了一類由3一4根短棍棒狀突起構(gòu)成的結(jié)構(gòu)，也起到化學(xué)感受器的作用。同時她發(fā)現(xiàn)了吸血水蛭對氯化鈉和精氨酸的簡單混合液有如對全血一樣的作用，通過頭部背唇及口部皮膚上的化學(xué)感受器引起取食反應(yīng)。

圖9-7吸血水蛭化學(xué)感受器的掃描電子顯微鏡觀察1日本醫(yī)蛭頭部背唇化學(xué)感受器掃描電鏡圖；2

日本醫(yī)蛭纖毛感覺墩上的纖毛掃描電鏡圖；3湖北牛蛭頭部背唇化學(xué)感受器掃描電鏡圖；4湖北牛蛭纖毛感覺墩上的纖毛掃描電鏡圖；5日本醫(yī)蛭口部內(nèi)側(cè)皮膚上的短棍棒狀突起掃描電鏡圖；6湖北牛蛭口部內(nèi)側(cè)皮膚上的短棍棒狀突起掃描電鏡圖（筆者圖，2001）

(一)掃描電子顯微鏡觀察

為了弄清我國兩屬吸血水蛭化學(xué)感受器的特異性，筆者與武漢大學(xué)電子顯微鏡室的同事合作做了日本醫(yī)蛭和湖北牛蛭頭部背唇及口部皮膚的掃描電鏡觀察以及取食行為實驗。掃描電鏡觀察結(jié)果證明我國兩種吸血水蛭頭部背唇皮膚上也有兩類大小不等的纖毛感覺墩，呈帶狀排列，約150個左右，每個墩的中央是由長度均一的纖毛狀突起構(gòu)成的紐扣狀結(jié)構(gòu)，前者的纖毛較稠密，后者的纖毛較稀疏。較大的一類纖毛感覺墩在光學(xué)顯微鏡下不具色素斑點，而在掃描電鏡下日本醫(yī)蛭每纖毛感覺墩約有30根等長的纖毛，湖北牛蛭每纖毛感覺墩約有25根等長的纖毛，前者呈稠密的叢狀，后者呈稀疏的環(huán)狀（見照片圖組I:1,2和3，4）。在口部內(nèi)側(cè)皮膚上也有由3–4根短棍棒狀突起構(gòu)成的結(jié)構(gòu)，日本醫(yī)蛭的突起呈密集叢生狀，湖北牛蛭的突起呈稀疏叢生狀（見照片圖9-7:5和6）。

（二）取食行為實驗

為了驗證以上兩種吸血水蛭化學(xué)感受器的分布位置與取食反應(yīng)的關(guān)系，筆者特用兩組小玻璃杯分別盛以新鮮的豬血和牛血，杯口蒙上腸系膜并將其投入內(nèi)有兩種饑餓吸血水蛭的缸中。重復(fù)多次之后發(fā)現(xiàn)日本醫(yī)蛭頭部背唇及口部皮膚對盛以新鮮豬血的小玻璃杯非常敏感并喜食豬血，湖北牛蛭頭部背唇及口部皮膚對盛以新鮮牛血的小玻璃杯非常敏感并喜食牛血。同時又用經(jīng)過手術(shù)切除頭部背唇和口部皮膚以及只部分切開而不摘除頭部背唇和口部皮膚的兩種饑餓吸血水蛭做了以上實驗，重復(fù)多次之后發(fā)現(xiàn)切除頭部背唇和口部皮膚的個體對盛有新鮮豬血和牛血的小玻璃杯均無任何取食反應(yīng)發(fā)生，然而部分切開又不摘除頭部背唇和口部皮膚的個體對以上的小玻璃杯有與不切除頭部背唇和口部皮膚的個體同樣的取食反應(yīng)發(fā)生。這進(jìn)一步證明了兩種吸血水蛭的化學(xué)感受器均分布在頭部背唇和口部皮膚上。（三）吸血水蛭化學(xué)感受器的特異性以及唾液腺分泌物的采集

為了驗證豬血和牛血中何種成分可以通過兩種吸血水蛭化學(xué)感受器引起取食反應(yīng)。筆者用三組小玻璃杯分別盛以哺乳動物血液中均含有的150mM氯化鈉，1mML精氨酸以及150mM氯化鈉和1mML精氨酸，杯口蒙上腸系膜并將其投入內(nèi)有兩種饑餓吸血水蛭的缸中。重復(fù)多次之后發(fā)現(xiàn)兩種饑餓的吸血水蛭均對盛有150mM氯化鈉和1mML精氨酸的小玻璃杯非常感興趣，有如取食血液一樣地取食這種混合液。這種對哺乳動物血液中固有成分（氯化鈉和精氨酸）必須濃度的選擇性識別是專一的，這在引起起取食反應(yīng)的過程中起決定作用。由于氯化鈉和精氨酸都是以很高的濃度存在于哺乳動物血液和汗液中的，我們可以利用哺乳動物的血液和汗液在野外誘撲各種吸血水蛭，也可以利用必須濃度的氯化鈉和精氨酸在室內(nèi)從饑餓的活體吸血水蛭體內(nèi)大量提取重要的心血管藥物原料一醫(yī)學(xué)蛭類唾液腺分泌物。一條饑餓的活體吸血水蛭可以反復(fù)使用6–7次，這比用頭部或整個身體勻漿后做生化提取、分離和純化要節(jié)省大量的試劑、時間和金錢。吸血水蛭唾液腺分泌物大量提取技術(shù)的解決，將大大促進(jìn)醫(yī)學(xué)蛭類的藥物開發(fā)和利用。

9.5

醫(yī)學(xué)蛭類唾液腺分泌物活性成分的分離、純化與活力測定(一)水蛭素的分離、純化與活力測定

此段以我國產(chǎn)的日本醫(yī)蛭為對象，先將其充分饑餓再采用以上唾液腺分泌物的采集方法大量提取唾液腺分泌物，置冰箱中冷凍保存待用。解凍后取250–300ml加進(jìn)4倍置冰箱中4℃下預(yù)冷的含15%水的冷丙酮，攪拌后置冰箱中4℃下讓其沉淀過夜，次日吸出上清丙酮并離心，在所得沉淀中加入預(yù)冷的三氯乙酸（約25ml）使其溶解，離心除去殘渣，待上樣進(jìn)行柱層析。

陰離子交換柱層析

取適量二乙基氨基纖維素陰離子交換劑（DEAE-C52）加蒸餾水使其膨脹，按常規(guī)方法依次用0.5mol/L的NaOH-NaCl混合液、0.5mol/L的HCl及0.5mol/L的NaOH-NaCl混合液各浸泡300分鐘后用蒸餾水洗滌至中性。裝柱（2cmx60cm）至所需高度，用pH4.6的0.1mol/L檸檬酸鈉緩沖液平衡；用5ml的唾液腺分泌物濃縮液或上述三氯乙酸溶液上樣進(jìn)行梯度洗脫并用核酸蛋白檢測儀記錄繪制出洗脫曲線，分段收集洗脫液，流速為30ml/小時。經(jīng)檢測將有活力部分集中于透析袋中用甘油濃縮，再用雙縮脲法測總蛋白質(zhì)含量，繼續(xù)以下凝膠過濾柱層析。雙縮脲法測總蛋白質(zhì)含量

取一系列試管分別加進(jìn)0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0的標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白溶液（6mg/ml）,用水補(bǔ)足至2ml，然后分別加進(jìn)4ml的雙縮脲試劑（每升溶液中含1.50gCuSO4?5H2O和6.0gNaKC4H4O6?4H2O,30gNaOH)，在室溫下放置30分鐘，用721分光光度計在540nm處比色，光密度分別為0，0.066，0.135，0.210，0.285，0.340。以光密度為縱坐標(biāo)，牛血清白蛋白（BSA）含量為橫坐標(biāo)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。取2.0ml于透析袋中用甘油濃縮后的樣品按上述方法測540nm處的比色，便可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到對應(yīng)的蛋白質(zhì)含量的微克數(shù)。用測得的蛋白質(zhì)含量結(jié)合用凝血酶滴定測得的數(shù)據(jù)，便可以求算出樣品中水蛭素的比活力。日本醫(yī)蛭唾液腺分泌物提取液純化總得率為15%；純化后的產(chǎn)物的比活力為6708AT-U/mg蛋白。凝膠過濾柱層析

取適量的交聯(lián)葡聚糖離子交換劑（SephadexG25）加蒸餾水浸泡4小時，按常規(guī)方法用0.5mol/LNaOH-0.5mol/LNaCl混合液浸泡半小時，抽濾除去鹼液并用蒸餾水洗滌至中性，加熱煮沸除去氣泡。裝柱（1.5cmx50cm）至所需高度，用pH7.4的0.1mol/LTris-HCl-NaCl緩沖液平衡，將上述有活力洗脫液的透析袋甘油濃縮液上樣，洗脫并用核酸蛋白檢測儀記錄繪制出洗脫曲線，分段收集洗脫液，流速為90ml/小時。分別檢測活力，將有活力部分集中于透析袋中用甘油濃縮。再檢測活力后，待用DU-70貝克曼分光光度計在200nm至400nm波長范圍內(nèi)掃描，便能確定所得產(chǎn)物的純度。凝血酶滴定法檢測水蛭素的含量

這是德國馬克沃德特（Markwardt，1970）首先報道的一種測定水蛭素含量的方法，這種測定方法用得十分廣泛，至今仍然被美國Sigma生化試劑公司和英國水蛭生物藥物公司作為標(biāo)準(zhǔn)測定方法而列入水蛭素的規(guī)格和價目表中。具體步驟是用微量進(jìn)樣器將50微升未知水蛭素含量的被測日本醫(yī)蛭唾液腺分泌物提取液加至溶有0.5%牛血纖維蛋白原的200微升pH7.4的0.1mol/LTris-HCl-NaCl緩沖液中，混合均勻后在室溫下以每分鐘1微升的速度遞次加入100抗凝單位/毫升標(biāo)準(zhǔn)凝血酶稀釋液并及時攪拌，讓其與牛血纖維蛋白原和未知水蛭素含量的被測溶液充分混合均勻，當(dāng)在1分鐘內(nèi)出現(xiàn)膠凍狀凝塊時即為滴定終點。從滴定的凝血酶量，可以推算出被測溶液中水蛭素的活力單位。研究表明水蛭素與凝血酶之間相互作用的部位主要處于水蛭素分子的C端。測定結(jié)果表明日本醫(yī)蛭唾液腺分泌物提取液中水蛭素的含量為4抗凝單位/毫升（AT-U/ml）。凝血酶滴定法是一種簡易、省時、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的水蛭素活力測定方法，然而測定結(jié)果受到環(huán)境溫度和凝血酶活力的影響很大，也受到操作人員對方法掌握的熟練程度的影響。氣溫太高或太低、凝血酶活力喪失以及試劑稀釋不恰當(dāng)均能造成測定結(jié)果的較大偏差，其最適溫度范圍應(yīng)在25-37℃之間。除此之外，還有分光光度法、光散射法和血纖維蛋白肽A放射免疫法等幾種方法可以采用，這里不加多寫。（二）蛭透明質(zhì)酸酶的分離、純化與活力測定通過硫酸銨分級沉淀進(jìn)行酶的分離與純化

分別取一定體積的日本醫(yī)蛭和湖北牛蛭唾液腺分泌物提取液，緩慢加固體硫酸銨至40%飽和度，在冰浴中攪拌10分鐘，并在700轉(zhuǎn)/分鐘下離心20分鐘，取上清液調(diào)硫酸銨飽和度至80%，同上離心取沉淀，將此沉淀懸浮于10mlpH7.0的70%飽和度硫酸銨溶液中，充分?jǐn)嚢璨⑼想x心取沉淀，溶于5mlpH7.0的50%飽和度硫酸銨溶液中，同上離心取上清液，裝入透析袋中對無離子水透析，直至用10%BaCl2檢測無沉淀時終止，量取透析后液體體積，留適量用作測酶活及測蛋白質(zhì)含量。整個過程采用3，5-二硝基水楊酸(DNS)比色法監(jiān)測酶活。通過二乙基氨基纖維素陰離子交換劑（DEAE-C52）柱層析進(jìn)一步分離與純化酶

將預(yù)處理的DEAE-C52裝柱（1.5cmx50cm），用pH7.1的0.05mol/L

Tris-HCl緩沖液平衡過夜。上樣后，待記錄儀基線平穩(wěn)后再依次用pH6.0的0.1mol/L檸檬酸緩沖液，pH5.6的0.1mol/L乙酸緩沖液（含0.1mol/LNaCl）,pH4.0的0.1mol/L乙酸緩沖液（含0.2mol/LNaCl）洗脫，流速為40ml/小時。測定結(jié)果表明pH5.6下的洗脫峰水蛭透明質(zhì)酸酶（HAse）酶活力最高。將該峰的洗脫液裝入透析袋中對無離子水透析，然后加入3倍體積的冷丙酮沉淀，最后將沉淀抽干置-20℃下保存。制定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

用15℃下烘干到衡重的葡萄糖配制250微克/毫升的標(biāo)準(zhǔn)液，在成梯度容量的各標(biāo)準(zhǔn)液中加3毫升3，5-二硝基水楊酸(DNS),在沸水浴中5分鐘顯色后用自來水冷卻至室溫并加蒸餾水稀釋。用72型分光光度計在550nm處測定光密度OD值,用OD550對葡萄糖微克數(shù)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品中酶活力的測定

在0.8mlpH5.5的0.02mol/L檸檬酸緩沖液中加0.2ml

的5mg/ml透明質(zhì)酸溶液和0.2ml待測樣品于38℃水浴中精確保溫30分鐘，然后將試管浸入沸水中終止反應(yīng)。取0.1ml以上降解液加3，5-二硝基水楊酸(DNS)試劑顯色，同時用0.2ml煮沸的酶液作對照測A550（吸光率），根據(jù)光密度OD550從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出還原糖的微克數(shù)。每毫升樣品中酶活力單位數(shù)（I.U./ml）=還原糖在標(biāo)準(zhǔn)曲線上的微克數(shù)X12。結(jié)果表明用常規(guī)糖定量3，5-二硝基水楊酸(DNS)比色法測水蛭透明質(zhì)酸酶（HAse）較傳統(tǒng)濁度法更簡單和可靠，靈敏性和專一性都較好。日本醫(yī)蛭的產(chǎn)率為17.8%，湖北牛蛭的產(chǎn)率為14.3%。用福林(Folin)-酚試劑法測蛋白質(zhì)含量

首先按照常規(guī)方法測定吸光率A540，制定出牛血清蛋白(BSA)標(biāo)準(zhǔn)曲線。蛋白質(zhì)含量(mg/ml)=A540x3.91,取1.0ml樣品按上法測A540便可以在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到對應(yīng)的微克數(shù)。用測得的蛋白質(zhì)含量可以推算出樣品的比活力。結(jié)果表明日本醫(yī)蛭的比活力為3529u/mg,湖北牛蛭的的比活力為2352u/mg。從以上結(jié)果看出，兩者在分離和純化之后比活力都提高很多，且比活力之比在純化之后下降了。從理論上看，經(jīng)過純化之后兩者的比活力應(yīng)該很接近，但其比活力之比仍大于1，這說明湖北牛蛭純化的結(jié)果不如日本醫(yī)蛭理想。

9.6

我國對醫(yī)學(xué)蛭類及其天然水蛭素的應(yīng)用現(xiàn)狀與前景

近年來，我國各相關(guān)部門對醫(yī)學(xué)蛭類及其天然水蛭素的開發(fā)與應(yīng)用開始重視，做了不少的工作。根據(jù)中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫的統(tǒng)計，從1994年至2002年底全國各科技期刊發(fā)表了與水蛭醫(yī)藥應(yīng)用有關(guān)的文章多達(dá)1000篇以上，然而明確注明以吸哺乳動物血液的醫(yī)學(xué)蛭類為對象并指明蛭類種名的文章不多，其中大多數(shù)文章以及中藥市場銷售的水蛭中成藥實際上用的是不吸哺乳動物血液，只取食螺類體液的寬體金線蛭做原料的。由于寬體金線蛭不含醫(yī)學(xué)蛭類體內(nèi)含有的水蛭素等生物活性物質(zhì)，其體內(nèi)所含有的成分及其作用機(jī)理都沒有搞清楚，因此筆者未將這部分文章和水蛭中成藥產(chǎn)品包括在本章的內(nèi)容中。以下介紹一些應(yīng)用效果明顯和具有很好應(yīng)用前景的例子。湖北省中醫(yī)藥研究院通過藥理、藥效、毒性和臨床試驗，研制并經(jīng)國家醫(yī)藥局批準(zhǔn)的醫(yī)學(xué)蛭類國家級新藥–脈血康膠囊（腸溶），系用日本醫(yī)蛭經(jīng)冷凍、勻漿、干燥、研磨和鈷60照射滅菌等步驟制成。該藥富含水蛭素、透明質(zhì)酸酶、血管擴(kuò)張劑、纖維蛋白酶抑制劑、抗血栓素等成分，具有極強(qiáng)的活血化瘀、破血散結(jié)作用。通過對日本醫(yī)蛭唾液腺分泌物提取液及整體勻漿液的生化和藥理實驗表明它們均有較強(qiáng)的抗凝血酶活性，對家兔血漿的復(fù)鈣時間、凝血酶原時間均有顯著延長作用，具有較強(qiáng)的纖溶活性，隨著劑量的增加而加強(qiáng)活性呈量效關(guān)系。能有效地抑制血栓形成和血小板黏附，明顯縮短紅細(xì)胞電泳時間，降低血清膽固醇TC及血清甘油三酯TG，對微循環(huán)有明顯的改善作用。通過安全性動物實驗證明日本醫(yī)蛭無毒無副作用，對肝、腎無損害。臨床試驗治療腦中風(fēng)有效率達(dá)86%，是用于治療與血栓形成有關(guān)的心腦血管疾病的有效制劑?？捎糜谥委熌X血栓、顱內(nèi)血腫、缺血性中風(fēng)、動脈粥樣硬化、冠心病、心絞痛、高血脂癥、高血壓引起的頭痛和胸悶等。此藥已在重慶多泰藥業(yè)有限公司萬盛制藥廠投產(chǎn)并上市銷售。中國科學(xué)院水生生物研究所由筆者負(fù)責(zé)的醫(yī)學(xué)蛭類應(yīng)用研究課題組于1987年8月至10月與湖北醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院骨科彭建強(qiáng)等醫(yī)生合作，開展了將醫(yī)蛭吸血法用于治療斷指再植術(shù)后瘀血的研究。這是我國首次應(yīng)用饑餓的吸血種日本醫(yī)蛭對五例經(jīng)過高難度末節(jié)顯微外科再植手術(shù)的斷指進(jìn)行的治療處理，取得了明顯的治療效果，使原來沒有把握接活的斷指都存活了下來。通常斷指再植手術(shù)之后，靜脈血管回流往往發(fā)生障礙，從而減少了動脈血液的供應(yīng)，引起組織的壞死。外科醫(yī)生曾嘗試過用各種機(jī)械和化學(xué)的方法來預(yù)防組織壞死都沒有成功，然而利用饑餓的吸血水蛭卻可以清除閉塞組織中淤積的血液，使靜脈血管變得通暢，防止了壞死發(fā)生，從而為毛細(xì)血管長入組織贏得了時間，這是一種理想的治療方法，其細(xì)菌感染的危險性也極小，可以說比機(jī)械和化學(xué)的方法都要安全、經(jīng)濟(jì)和簡便。第一例斷指病人系被汽車發(fā)電機(jī)切斷左手食指和中指后13個小時做的顯微外科再植手術(shù)，食指僅接通動脈而沒有找到靜脈；第二例斷指病人系沖床夾斷右手食指后4個半小時做的顯微外科再植手術(shù)，食指僅接通動脈而沒有找到靜脈；第三例斷指病人系右手5指和左手3指被切紙機(jī)切斷后4個小時做的顯微外科再植手術(shù)，其中右手中指沒有找到靜脈，環(huán)指雖然吻合了靜脈，但回流不通暢。所有的斷指顯微外科再植手術(shù)之后，立即用經(jīng)100毫升生理鹽水加4萬單位慶大霉素浸泡15分鐘的饑餓日本醫(yī)蛭對以上再植的斷指進(jìn)行吸血治療，每日2–3次。吸血治療之前先在再植的斷指末端切一小口，并用生理鹽水搽洗傷口，然后用2–4條處理好的日本醫(yī)蛭在切口上吸血。在治療期間，同時用青霉素、氨芐青霉素給病人注射，以提高抗感染能力。五例再植斷指病人的斷指經(jīng)過4–5天的吸血治之后，繼續(xù)注射以上抗生素15–30天，腫脹漸漸消失，青紫或發(fā)白的斷指逐漸變得紅潤，血液循環(huán)也恢復(fù)正常。再植的斷指生長良好，均未出現(xiàn)細(xì)菌感染（見照片圖9-8）。這項工作的成功也為在我國開展耳朵、鼻子、腳趾、皮瓣靜脈瘀血和脈管炎等顯微外科手術(shù)，使用醫(yī)蛭吸血法治療術(shù)后瘀血提供了方法和經(jīng)驗。1985年一個5歲的美國男孩和他被狗咬掉了的耳朵一起被急送到波士頓兒童醫(yī)院進(jìn)行再植手術(shù)。因為耳朵的血管非常細(xì)，幾乎肉眼都難以看清，極易產(chǎn)生藥物難以奏效的并發(fā)癥，通常很難再植成功。經(jīng)過12小時的再植手術(shù)才將斷了的靜脈和動脈接了起來，血液開始在接上的血管里流動了。但是，由于在靜脈里形成的血塊阻礙了血液流回心臟，手術(shù)后3天再植的耳朵就因為血管充血而呈現(xiàn)紫黑色，盡管使用了肝素和小切口放血，情況仍然危急。在不得已的情況下，醫(yī)生從英國水蛭生物藥物公司得到一批處于饑餓狀態(tài)下的醫(yī)用水蛭并被空運(yùn)至美國波士頓。經(jīng)過一星期使用醫(yī)蛭吸血法治療術(shù)后瘀血，共用去24條醫(yī)用水蛭，男孩再植縫合的耳朵重新豎了起來并顯示出了血?dú)?，血液循環(huán)恢復(fù)了正常，兩周后男孩出了醫(yī)院，這真是一個醫(yī)療的奇跡。湖北醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院骨科彭建強(qiáng)、陳振光等（1988）在湖北醫(yī)學(xué)院學(xué)報第9卷第4期上報道了醫(yī)蛭吸血法用于用于處理皮瓣靜脈淤血的實驗研究，他們在大白鼠下腹部島狀皮瓣上制成淤血皮瓣模型，爾后用日本醫(yī)蛭吸血，取得較好的效果。吸血組皮瓣總存活率為93.9%（46/49），未吸血組僅為14.3%（5/49），小切口放血加肝素生理鹽水沖洗組為25%（8/32）。實驗結(jié)果表明醫(yī)蛭吸血法能有效地解除組織靜脈淤血，故可將此法用于吻合血管皮瓣移至或者斷指再植術(shù)后靜脈淤血不宜手術(shù)探查的病人。

圖9-8應(yīng)用醫(yī)蛭吸血法治療斷指再植術(shù)后瘀血

a.左手食指和中指再植手術(shù)后用醫(yī)蛭吸血治療；

b.吸血治療結(jié)束后的左手食指和中指；

c.右手5指再植手術(shù)后用醫(yī)蛭吸血治療；

d.吸血治療結(jié)束后的右手5指（楊潼，彭建強(qiáng)等，1988）

中國中醫(yī)研究院廖福龍、李文等人使用我國產(chǎn)的日本醫(yī)蛭、菲牛蛭、湖北牛蛭、尖細(xì)金線蛭、寬體金線蛭和光潤金線蛭干粉提取制備成0.12克/毫升原液，用其做的抗血小板聚集實驗和抗凝全血與血漿復(fù)鈣實驗，完成了七種水蛭抗血小板聚集與抗凝血研究。他們選用健康的新西蘭種家兔為供血動物，用光密度法測定血小板聚集的百分率，用常規(guī)枸櫞酸鈉抗凝血。結(jié)果顯示日本醫(yī)蛭、菲牛蛭和湖北牛蛭都表現(xiàn)出抗血小板聚集作用，其中日本醫(yī)蛭在3.08毫克/毫升濃度下抑制ADP誘導(dǎo)作用；菲牛蛭在9.23毫克/毫升濃度時對血小板最大聚集百分率（PAm）和一分鐘時血小板聚集百分率（PAr）都有顯著的抑制；湖北牛蛭則需要較高濃度才抑制腺苷二磷酸（ADP）誘導(dǎo)血小板聚集作用；幾種金線蛭超聲提取物則表現(xiàn)了不同程度的促血小板聚集作用，前兩種金線蛭的水煎提取物則表現(xiàn)了顯著的抑制血小板聚集作用。日本醫(yī)蛭、菲牛蛭和湖北牛蛭都表現(xiàn)了強(qiáng)大的抗凝血作用；三種金線蛭的抗凝血作用相對較弱。又據(jù)該院歐興長、張秋海等人（1996）在天然產(chǎn)物研究與開發(fā)第8卷第2期上報道了四種水蛭抗凝血酶作用的研究。結(jié)果表明日本醫(yī)蛭和菲牛蛭兩個吸血種具有很強(qiáng)的抗凝血酶活性，寬體金線蛭和光潤金線蛭兩個非吸血種則只有很弱的抗凝血酶活性。上海中醫(yī)藥大學(xué)吳大正、韓志芬等人（2002）在上海中醫(yī)藥雜志第8期上報道了水蛭素對凝血酶造成的血管內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性增高的抑制作用。他們將新生牛主動脈分離獲得的單個內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)于微孔濾膜上，直至形成致密的單層細(xì)胞。通過灌流Hanks液或含5克L1白蛋白的Hanks液后，測定經(jīng)10單位/毫升凝血酶溶液或經(jīng)10單位/毫升凝血酶溶液加10單位/毫升水蛭素處理的液體濾過系數(shù)（Kf）、液體濾過流量（JV）和蛋白質(zhì)滲透壓反射系數(shù)（Q）。結(jié)果證明水蛭素能夠抑制因凝血酶造成的Kf和JV降低，以及Q的升高。凝血酶能夠引起血管內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性的增高，而水蛭素則能減輕凝血酶的作用。成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院眼科袁曉輝、王萬杰等人（2000）在眼科新進(jìn)展第4期上報道了水蛭素預(yù)防眼內(nèi)增生性病變的初步觀察。他們?yōu)榱颂接懹盟嗡仡A(yù)防眼內(nèi)增生性病變的效果，采用建立實驗性眼外傷動物模型，隨機(jī)分為實驗組和對照組。在實驗組玻璃體腔內(nèi)注入小劑量的水蛭素（每只眼10抗凝單位），對照組采用空白對照，分別觀察2組1、3、5、7、14d玻璃體混濁及眼底增殖膜形成情況。結(jié)果是實驗組1、3、5d玻璃體混濁及眼底增殖膜形成明顯低于對照組（p<0.05）。結(jié)論是水蛭素對眼內(nèi)增生性病變形成有早期的預(yù)防作用。該院眼科鄭燕林與重慶醫(yī)科大學(xué)蔣紀(jì)愷（2001）在中國眼科雜志第1期上報道了水蛭素對外傷性增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變細(xì)胞外基質(zhì)的影響。他們?yōu)榱颂接懰嗡貙ν鈧栽錾圆Ａw視網(wǎng)膜病變(PVR)細(xì)胞外基質(zhì)形成的影響。制造穿孔性眼外傷的動物模型，將水蛭素0.1ml(10單位)注入兔玻璃體腔內(nèi)，對照組注入0.1ml的生理鹽水，用放射免疫法測定玻璃體腔內(nèi)粘連蛋白(Laminin,LN)IV型膠原(IVcollagen,IVC)的含量。結(jié)果在外傷后1周水蛭素組與對照組比較LN和IVC含量下降（p<0.05）。結(jié)論：水蛭素對外傷性增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變（PVR）細(xì)胞外基質(zhì)的形成具有一定的抑制作用。

福建中醫(yī)學(xué)院祁明信、黃秀榕等人（2001）在眼科研究第3期上報道了水蛭滴眼液防治半乳糖白內(nèi)障的實驗研究。他們用SD大鼠復(fù)制半乳糖白內(nèi)障模型，配制水蛭滴眼液并以白內(nèi)障滴眼液作為陽性對照，動態(tài)觀察并比較兩組滴眼液對半乳糖白內(nèi)障的影響。在實驗第10天測定兩組晶狀體的超氧化物歧酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化酶（GSH-PX）、谷胱甘肽（GSH）和可溶性蛋白（SP）的含量。結(jié)果表明水蛭滴眼液組較對照組晶狀體渾濁速度慢，程度也輕。水蛭滴眼液組SOD，GSH-PX,GSH的含量均顯著高于對照組。同時也證明水蛭滴眼液具有較好的延緩和減輕半乳糖白內(nèi)障的作用。第四軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院實驗動物中心楊文清、施新猷等人（1999）在上海實驗動物科學(xué)第4期上報道了光化學(xué)法致大鼠腦血栓及水蛭提取物的治療作用。他們根據(jù)光化學(xué)原理以自制的冷光源（LG105B）誘導(dǎo)大鼠大腦中動脈血栓形成并觀察其后動物行為學(xué)改變、腦水腫程度、腦梗塞面積以及尿激酶和水蛭提取物的治療作用。結(jié)果為誘導(dǎo)后4、12、24小時出現(xiàn)的行為學(xué)改變，以24小時最顯著；腦水腫也以24小時最為嚴(yán)重；腦梗塞灶約占腦（嗅球、小腦和低位腦干除外）切片面積的10.51%；尿激酶和水蛭提取物處理后以上改變均有明顯的改善。以水蛭提取物（2克/公斤）處理可使腦水腫程度下降29%，腦梗塞面積縮小45%。結(jié)果還表明用冷光源（LG105B）可成功建立大鼠大腦中動脈腦血栓模型，水蛭提取物可減輕其腦梗塞程度。他們還在該校學(xué)報（2001年第2期）上報道了水蛭提取物對大鼠腦血栓后腦組織MDA、SOD和NO含量的影響。為了探討光化學(xué)法誘導(dǎo)大鼠腦血栓形成中丙二醛(MCA)，NO和SOD含量的變化及水蛭提取物(EFH)對腦組織保護(hù)作用的機(jī)理，采用光化學(xué)法誘導(dǎo)大鼠大腦中動脈（MCA）腦血栓形成模型；觀察腦缺血后以及藥物作用后4小時、24小時腦組織勻漿中MDA、SOD和NO的含量變化。結(jié)果表明大鼠腦缺血后4小時腦組織勻漿中MDA的含量增高，24小時明顯增高；24小時EFH治療組的MDA明顯降低，由4.77±0.24

mol·L-l降為2.51±0.44

mol·L-l（P<0.05）,與模型組相比24小時SOD的活性明顯增高（P<0.05），NO的含量在腦缺血后2小時降低。24小時與假手術(shù)組相比明顯升高。安徽醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院陳貴海、李孟峰等人（1998）在中國危重病急救醫(yī)學(xué)第5期上報道了水蛭對腦出血大鼠血三碘甲狀腺素T3、甲狀腺素T4、PRL、生長激素GH、CS的影響。他們用不同劑量的水蛭粗提液喂飼腦出血大鼠，第7天取血以RIA法測激素濃度，結(jié)果證明水蛭對腦出血大鼠血中T3、T4、PRL、GH、CS濃度異常有緩解作用并呈量效關(guān)系,水蛭可改善出血后下丘腦-垂體-靶腺軸的功能紊亂。在國外，英國新科學(xué)家雜志曾報道印度醫(yī)學(xué)專家用水蛭治療靜脈曲張，取得了很好的效果。靜脈曲張一般由腿部靜脈中控制血液單向流動的瓣膜功能失常引起，其癥狀主要表現(xiàn)為因血液過分淤積而造成患者腿部腫脹，甚至發(fā)生潰瘍。通常用腿部打繃帶的辦法來對靜脈曲張患者進(jìn)行治療，但這一過程往往比較痛苦，而且還容易引發(fā)皮膚過敏。印度孟買KEM醫(yī)院等單位利用水蛭有效地去除了靜脈曲張患者腿部的淤血，最終消除了患者的潰瘍或腫脹癥狀。研究人員發(fā)現(xiàn)相對于含氧量較多的動脈血，吸血水蛭更“鐘情”于靜脈血，他們利用吸血水蛭對20名患者進(jìn)行了試驗，結(jié)果所有患者的潰瘍都得到治愈，18名患者腿部的腫脹大幅度地減輕。國外研究人員還發(fā)現(xiàn)吸血水蛭的唾液腺分泌物提取液能明顯阻礙轉(zhuǎn)移性肺腫瘤的生長，能抑制腫瘤細(xì)胞膠原酶活性，兩種吸血水蛭唾液天門冬酸酶能抑制血小板分泌三磷酸腺苷，從而阻止了血小板的聚集。近代研究證明凝血酶是調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能的活化劑，如對成纖維細(xì)胞和脾細(xì)胞的增殖；血小板和內(nèi)皮細(xì)胞的分泌；血小板、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的前列腺素合成；對單核細(xì)胞的趨向性以及平滑肌的收縮性都有影響。凝血酶通過與細(xì)胞表面結(jié)合點的作用，影響細(xì)胞的功能。當(dāng)凝血酶與水蛭素結(jié)合后，則失去了與這些細(xì)胞表面結(jié)合點作用的能力。又據(jù)雅虎新聞網(wǎng)轉(zhuǎn)載2003年11月4日路透通訊社健康新聞報道醫(yī)學(xué)蛭類有助于減緩關(guān)節(jié)炎的疼痛?，F(xiàn)今醫(yī)學(xué)蛭類的應(yīng)用僅限于外科手術(shù)后血液凝固問題的治療，KlinikenEssen-Mitte的GustavJ.Dobos博士及其同事最近斷言醫(yī)學(xué)蛭類唾液含有能減輕關(guān)節(jié)炎癥狀的抗炎癥物質(zhì)和其他化學(xué)物質(zhì)。在一項膝關(guān)節(jié)炎病人的研究中，Dobos博士的小組將用4至6條吸血水蛭做的單一治療與用一種對關(guān)節(jié)炎常見的治療作了比較。吸血水蛭被用于24個病人患病的膝關(guān)節(jié)疼痛點并讓其在上吸血大約70分鐘，直至離去。該新發(fā)現(xiàn)已在內(nèi)科學(xué)年刊中報道。七天之后，疼痛傷痕在吸血水蛭組中比在用常見的治療方法組中有了較大程度的改善。而且，在功能、僵硬和總的關(guān)節(jié)炎癥狀方面的受益能維持直到治療后的91天，該治療安全而且容易被接受。據(jù)路透社2004年6月28日華盛頓訊，美國食品及藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)了用吸血水蛭作為愈合皮膚、移植和恢復(fù)循環(huán)的工具，還批準(zhǔn)了法國RicarimpexSAS公司的吸血水蛭可以用于醫(yī)療上市。

9.7醫(yī)學(xué)蛭類的生殖生物學(xué)與飼養(yǎng)繁殖

(一)

醫(yī)學(xué)蛭類的生殖和發(fā)育蛭類動物是雌雄同體動物，雄性生殖器官先成熟，行異體受精并且借助在前端滑出頭部的繭（cocoon）繁殖后代。醫(yī)學(xué)蛭類包括的醫(yī)蛭科和山蛭科種類的雄性生殖器官除10對精巢和輸精管外，精管膨腔較為復(fù)雜，由一包有單細(xì)胞前列腺層的球狀基部和包有陰莖的陰莖鞘組成。陰莖鞘是一甚粗大的肌肉性管，其內(nèi)是一盤曲的管狀陰莖，可以翻出體外。交配時兩個個體的頭部方向相反地腹面緊貼，一個個體的陰莖插入另一個體雌性生殖孔內(nèi)的陰道內(nèi)傳遞精子。事實上大多數(shù)的交配都是單方面輸送精子到對方，而不是同時互相交換精子。雌性生殖器官由一對或多或少伸長的卵巢囊及其包含的卵巢組成，它們在前面伸出輸卵管并匯合成一條肌肉性的總輸卵管，再經(jīng)由陰道和雌生殖孔開口向外（見前面生殖系統(tǒng)圖）。卵從卵巢囊中產(chǎn)生并與從另一個體來的精子結(jié)合，最后被輸卵管中的蛋白包上。一旦受精完成，受精卵就會通過雌孔迅速地產(chǎn)到由身體前部少數(shù)生殖體節(jié)的腺體或稱環(huán)帶腺分泌成的繭內(nèi)。通常從交配到產(chǎn)繭要經(jīng)過數(shù)十天至一個月的時間，這大概是精子經(jīng)過組織進(jìn)行遷移所需的時間。環(huán)帶區(qū)的體壁有兩類為形成繭提供物質(zhì)的腺體：一類是分泌繭外壁物質(zhì)的腺體；另一類是分泌蛋白液的腺體，受精卵在繭內(nèi)懸浮于此蛋白液之中。在醫(yī)蛭科和山蛭科種類中，繭在形成過程中不是被壓扁而是保持圓形。整個身體的前段由于肌肉的收縮而變得長而細(xì)，往身體和繭壁之間的空隙里注入蛋白營養(yǎng)液和一些受精卵。然后緩緩地向后移動身體并從繭內(nèi)脫出，當(dāng)頭部通過繭的前、后孔時借助前吸盤腺體產(chǎn)生的填塞物將這兩個孔封閉起來。在這個階段繭是無色的和半透明的松軟囊狀物，幾天之后變成暗棕色而且?guī)缀醪煌该鞯膱杂材遥ㄒ妶D9-9）。此外，繭壁通常分化成一蜂窩狀或海綿狀的外層和一光滑的內(nèi)層。由于醫(yī)蛭科和山蛭科種類的繭產(chǎn)在陸地上，海綿層的作用之一是減少水分的損耗。海綿層是環(huán)帶腺分泌物夾雜空氣形成的泡沫經(jīng)過干燥之后形成的。蛭類動物受精卵的分裂是以螺旋型為基礎(chǔ)的，首先在垂直面上分裂，以便將受精卵分裂成4個大裂球。每個大裂球然后在動物極一端分割出一個小裂球，由于在分割時卵裂軸的傾斜而使小裂球稍偏向一側(cè)。當(dāng)首一層以順時針方向移位時，第二層則以反時針方向移位，反過來也是一樣，每一層都是從前一層相反的方向來彌補(bǔ)。較早幾層小裂球同時繼續(xù)按照傾斜的軸分割，最后形成一個在大裂球頂上具有小裂球蓋的中空囊胚并通過反轉(zhuǎn)或外包法形成原腸胚。我國云南西南部的日本山蛭在每年5–9月的雨季里進(jìn)行繁殖，7月初可以見到幼蛭，到8月初時特別多。每下一場雨即

圖9-9

兩種醫(yī)學(xué)蛭類繭的外形和卵裂a(bǔ).海南山蛭的繭；b.日本醫(yī)蛭的繭c.螺旋卵裂的圖解（a,b自宋大祥，1978；c自Waddington,1956）孵出一批幼蛭。通常長約5–9厘米，呈圓柱形，背面的斑紋不太明顯，生長迅速。我國海南島東部和中部山區(qū)的海南山蛭在每年8–9月及11–12月有兩次產(chǎn)繭期，每隔5–7天產(chǎn)下一個繭，可以接連產(chǎn)4–10個繭。繭的大小為12–14毫米ⅹ11–12毫米，外層呈蜂窩狀，為五角形或六角形的一個個碗狀窩。(二)醫(yī)學(xué)蛭類的飼養(yǎng)和繁殖

醫(yī)學(xué)蛭類的飼養(yǎng)和繁殖在歐洲已經(jīng)有了100多年的歷史，1990年于以色列耶路撒冷召開的第三屆國際水蛭科學(xué)家會議上，從事了40多年水蛭飼養(yǎng)和繁殖的法國水蛭養(yǎng)殖家J.Desbarax提出了一篇“水蛭養(yǎng)殖100余年以及我本人40余年的歷史回顧”，值得我們借鑒，現(xiàn)將其摘要如下。1845年2月在法國Bordeaux港船塢附近，一個叫Bechade的人開了一間批發(fā)水蛭的商號，這已不是一個新興的行業(yè)。在那段時間里，許多馬和牛的主人養(yǎng)大水蛭，然后按重量賣給商人并賺得一些利潤。Bechade的任務(wù)是收購、養(yǎng)殖和出售水蛭，他并沒有成為富翁而于1867年將這一業(yè)務(wù)傳給了他的女婿DeBest。隨著營業(yè)、儲藏和生產(chǎn)基地的擴(kuò)大，這家商號便改名為DeBest–Bechade，在1870年至1880年間平均每年用柳條筐和運(yùn)貨馬車運(yùn)輸并批發(fā)掉25萬至40萬條醫(yī)用水蛭。1881年Ricard接收了該商號的業(yè)務(wù)并將其更名為Ricard–DeBest–Bechade，他開始通過郵局出售水蛭，首先使業(yè)務(wù)擴(kuò)大到法國各大城市，而后至西歐各國，在1900年代銷售量增加至每年80萬條。1911年一位采礦工程師LucienDesbarax,也就是文章作者的父親繼承了Ricard的事業(yè)，他試圖改善原有的營銷方式和養(yǎng)殖方法，但是隨著第一次世界大戰(zhàn)的到來使這項事業(yè)不得不擱置下來。戰(zhàn)后的1930年至1938年間業(yè)務(wù)擴(kuò)大到每年營銷4噸重的醫(yī)用水蛭，LucienDesbarax只好組織了有60多人的漁民在春、秋季節(jié)去沼澤和湖泊里撲捉。在第二次世界大戰(zhàn)期間這項事業(yè)更加困難了，1943年L