吩噻嗪類藥物課件

第九章

雜環(huán)類

藥物的分析藥物分析教研室AnalyticalofHeterocyclicdrugs第九章

雜環(huán)類

藥物的分析藥物分析教研室Analytical1吡啶類喹啉類托烷類吩噻嗪類苯并二氮雜卓類雜環(huán)類Contents吡啶類喹啉類托烷類吩噻嗪類苯并二氮雜卓類雜環(huán)類Content第一節(jié)吡啶類藥物的分析αβγβα123456吡啶(Pyridine)γααββ異煙肼(Isoniazid)尼可剎米(Nikethamide)

硝苯地平(Nifedipine)

第一節(jié)吡啶類藥物的分析αβγβα123456吡啶γααβ一、主要性質(zhì)與鑒別試驗第一節(jié)吡啶類藥物的分析1.吡啶環(huán)的特性——吡啶環(huán)開環(huán)

適用于α、α’位無取代，β或γ位被羧酸衍生物取代的異煙肼、尼克剎米A.戊烯二醛反應（k?ning反應）尼克剎米戊醛二烯一、主要性質(zhì)與鑒別試驗第一節(jié)吡啶類藥物的分析1.吡啶環(huán)的特第一節(jié)吡啶類藥物的分析在無水的條件下，吡啶及其衍生物與3,4-二硝基氯苯混合共熱或加熱至熔融，冷卻后，加醇制氫氧化鉀溶液將殘渣溶解，溶液呈紫紅色。B.二硝基氯苯反應（Vongerichten反應）異煙肼－氧化成羧基；尼克剎米－水解成羧基第一節(jié)吡啶類藥物的分析在無水的條件下，吡啶及其衍生物與3,2.弱堿性：吡啶環(huán)N原子為堿性原子，吡啶環(huán)pKb為8.8（水中），可用于鑒別和非水滴定。尼克剎米：除了吡啶環(huán)上的N原子外，吡啶環(huán)β位被酰氨基取代，遇堿水解釋放二乙胺。Chp2005鑒別：取本品10滴，加氫氧化鈉試液3ml，加熱，即發(fā)生二乙胺的臭氣，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍色。第一節(jié)吡啶類藥物的分析2.弱堿性：第一節(jié)吡啶類藥物的分析3.還原性第一節(jié)吡啶類藥物的分析異煙肼吡啶環(huán)γ位被酰肼所取代，有較強的還原性，可被不同的氧化劑氧化，也可與某些含有羰基的化合物發(fā)生縮合反應。異煙肼與硝酸銀－銀鏡反應Chp2005：取本品約10mg，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1ml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。

A.還原反應3.還原性第一節(jié)吡啶類藥物的分析異煙肼吡啶環(huán)γ位被酰肼所取B.縮合反應第一節(jié)吡啶類藥物的分析香草醛異煙腙(黃色結(jié)晶)取本品約0.1g，加水5ml溶解后，加10％香草醛的乙醇溶液1ml，搖勻，微熱，放冷，即析出黃色結(jié)晶；濾過，用稀乙醇重結(jié)晶，在105℃干燥后，依法測定（附錄ⅥC），熔點為228～231℃，熔融時同時分解。B.縮合反應第一節(jié)吡啶類藥物的分析香草醛異煙腙取本品約0第一節(jié)吡啶類藥物的分析異煙肼的其它鑒別反應①與亞硒酸作用，可將其還原為紅色硒的沉淀②與1,2-萘醌-4-磺酸在堿性介質(zhì)中，可縮合呈紅色。顯紅色第一節(jié)吡啶類藥物的分析異煙肼的其它鑒別反應①與亞硒酸作用，第一節(jié)吡啶類藥物的分析4.形成沉淀(重金屬鹽類或苦味酸)尼克剎米的鑒別：取本品2滴，加水1ml，搖勻，加硫酸銅試液2滴與硫氰酸銨試液3滴，即生成草綠色沉淀。異煙肼、尼克剎米可與氯化汞形成白色沉淀。5.分解產(chǎn)物異煙肼、尼克剎米等與無水碳酸鈉或氫氧化鈣共熱，可發(fā)生脫羧降解，并有吡啶臭味逸出。第一節(jié)吡啶類藥物的分析4.形成沉淀(重金屬鹽類或苦味酸)尼第一節(jié)吡啶類藥物的分析UV和IR第一節(jié)吡啶類藥物的分析UV和IR二、Detectionofspecificimpurities一、異煙肼中游離肼的檢查異煙肼不穩(wěn)定，游離肼即可能在原料中引入，又可能在貯藏過程中降解－誘變劑和致癌物質(zhì)1、TLC(BP、Ch.P)肼＋對二甲基苯甲醛→腙(顯色)2、比濁法(JP)專屬性差肼＋水楊醛乙醇液→混濁二、Detectionofspecificimpuri二、Detectionofspecificimpurities二、尼克剎米中有關(guān)物質(zhì)的檢查檢查方法：取本品，加甲醇制成每1ml中含40mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加甲醇分別稀釋成每1ml中含0.4mg和40μg的溶液，作為對照溶液(1)和(2)。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗，吸取上述三種溶液各10μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿－丙醇(75:25)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液(2)的主斑點比較，不得更深；如有1點超過時，應不深于對照溶液(1)的主斑點。TLC(無雜質(zhì)對照品－高低濃度對比法)二、Detectionofspecificimpuri二、Detectionofspecificimpurities三、二氫吡啶類有關(guān)物質(zhì)的檢查HPLC法測定，避光操作硝苯地平二、Detectionofspecificimpuri第二節(jié)喹啉類藥物的分析硫酸奎寧

(Quininesulfate)硫酸奎尼丁(quinidinesulfate)鹽酸環(huán)丙沙星(ciprofloxacinhydrochloride)第二節(jié)喹啉類藥物的分析硫酸奎寧硫酸奎尼丁(quinidin第二節(jié)喹啉類藥物的分析一、主要性質(zhì)1.堿性環(huán)丙沙星：鹽酸；奎寧、奎尼丁：二元酸－硫酸（喹核堿含脂環(huán)氮，堿性強）奎寧(左旋體)：pKb1為5.07pKb2為9.7，飽和水溶液pH為8.8，易溶于氯仿－無水乙醇(2:1)奎尼丁(右旋體)：pKb1為5.4 pKb2為10，易溶于沸水或乙醇喹啉環(huán)上的N原子具有堿性，與強酸成鹽2.旋光性硫酸奎寧(左旋體)——硫酸奎尼丁(右旋體)3.熒光特性硫酸奎寧和硫酸奎寧丁在稀硫酸中顯藍色熒光，鹽酸環(huán)丙沙星無熒光。第二節(jié)喹啉類藥物的分析一、主要性質(zhì)1.堿性環(huán)丙沙星：鹽酸二、Identification一、綠奎寧反應（Thalleioquin）

——奎寧和奎尼丁鑒別二醌基亞胺的胺鹽取其水溶液加溴試液2～3滴和氨試液1ml，即顯翠綠色；加酸至中性顯藍色；

酸性則呈紫紅色；翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、氯仿中不溶于醚。二、Identification一、綠奎寧反應（Thalle二、Identification二、光譜特征UV－鹽酸環(huán)丙沙星：取本品，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含8μg的溶液，照分光光度法(附錄ⅣA)測定，在277nm與315nm的波長處有最大吸收。

FLD－硫酸奎寧：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍色熒光。三、無機酸鹽硫酸奎寧、硫酸奎尼丁→硫酸根＋氯化鋇→白色沉淀↓鹽酸環(huán)丙沙星→鹽酸根＋硝酸銀→白色沉淀↓二、Identification二、光譜特征UV－鹽酸環(huán)丙三、Detectionofspecificimpurities一、硫酸奎寧1.酸度－酸性雜質(zhì)

取本品0.2g，加水20ml溶解后，測定pH值應為5.7～6.6。2.氯仿－乙醇不溶物

取本品2g，加氯仿－無水乙醇(2:1)的混合液15ml，在50℃加熱10min后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過，濾渣用上述混合液分5次洗滌，每次10ml，在105℃干燥至恒重，遺留殘渣不得過2mg。3.其他金雞納堿(TLC、HPLC)

三、Detectionofspecificimpuri三、Detectionofspecificimpurities1.酸度

取本品，加水制成每1ml中含25mg的溶液，測定pH值應為3.0～4.5。2.溶液的澄清度和顏色

取本品0.1g，加水10ml溶解后，溶液應澄清；如顯色，與黃色或黃綠色4號標準比色液(附錄ⅨA)比較，不得更深。3.有關(guān)物質(zhì)（HPLC）

二、鹽酸環(huán)丙沙星中特殊雜質(zhì)檢查三、Detectionofspecificimpuri第三節(jié)托烷類藥物莨菪烷(Tropane)莨菪醇(Tropine)硫酸阿托品

(atropine)氫溴酸東莨菪堿

(scopolaminehydrochloride)****第三節(jié)托烷類藥物莨菪烷(Tropane)莨菪醇(Trop第三節(jié)托烷類藥物一、主要性質(zhì)1.水解性（酯水解生成醇和酸）阿托品莨菪醇莨菪酸2.堿性

阿托品和東莨菪堿結(jié)構(gòu)中，五元脂環(huán)含有叔胺氮原子，較強的堿性，易于酸成鹽，如阿托品pKb1為4.353.旋光性第三節(jié)托烷類藥物一、主要性質(zhì)1.水解性（酯水解生成醇和酸一、托烷生物堿一般鑒別試驗(Vitaili反應)取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放冷，加乙醇2～3滴，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。二、Identification一、托烷生物堿一般鑒別試驗(Vitaili反應)取供試品約1二、氧化反應三、沉淀反應生物堿－與生物堿沉淀劑生成沉淀阿托品＋氯化汞醇試液→黃色沉淀東莨菪堿＋氯化汞醇→白色復鹽沉淀四、硫酸鹽和溴化物反應二、Identification二、氧化反應三、沉淀反應生物堿－與生物堿沉淀劑生成沉淀阿托品三、Detectionofspecificimpurities一、氫溴酸東莨菪堿洋金花粗粉乙醇/滲漉滲漉液減壓蒸餾浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3,CHCl3/提取總生物堿Na2CO3,CHCl3/分離東莨菪堿HBr/成鹽氫溴酸東莨菪堿（粗品）75%C2H5OH/精制成品酸度易氧化物——阿撲阿托品、顛茄堿其它生物堿——阿撲阿托品、其他含有不飽和雙鍵的有機物質(zhì)二、硫酸阿托品三、Detectionofspecificimpuri第四節(jié)吩噻嗪類藥物吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的衍生物，分子結(jié)構(gòu)中均含有硫氮雜蒽母核，基本結(jié)構(gòu)如下：R’:-H、-Cl、-CF3、-COCH3、-SCH2CH3R:具有2～3碳鏈的二甲或二乙胺基，或含氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物第四節(jié)吩噻嗪類藥物吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的衍生物，分子結(jié)一、主要性質(zhì)與鑒別第四節(jié)吩噻嗪類藥物1.UV硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)的π系統(tǒng)，紫外區(qū)三個吸收峰值，約205nm、254nm、300nm，最強多在254nm附近，根據(jù)2位、10位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。當母核的二價硫被氧化為砜或亞砜，則呈現(xiàn)四個峰值。藥物溶劑C(μg/ml)λmax(nm)A鹽酸氯丙嗪鹽酸(9→1000)52540.46915306－－鹽酸異丙嗪鹽酸(0.1mol/L)6249－883~937奮乃靜無水乙醇72580.65－鹽酸氟奮乃靜鹽酸(9→1000)10255－553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸(1→20)10256－630鹽酸硫利達嗪乙醇8264與315－－一、主要性質(zhì)與鑒別第四節(jié)吩噻嗪類藥物1.UV2.IR第四節(jié)吩噻嗪類藥物3.氧化呈色硫氮雜蒽母核中的二價硫易氧化，母核易被不同的氧化劑氧化成亞砜、砜等不同的產(chǎn)物，隨取代基的不同，呈現(xiàn)不同的顏色。藥物硫酸硝酸過氧化氫鹽酸氯丙嗪－顯紅色，漸變?yōu)榈S色－鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色，放置后顏色漸變深生成紅色沉淀，加熱即溶解，溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色－奮乃靜－－顯深紅色，放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色，溫熱后變成紅褐色－－鹽酸三氟拉嗪－生成微帶紅色的白色沉淀；放置后，紅色變深，加熱后變黃色－鹽酸硫利達嗪顯藍色－－2.IR第四節(jié)吩噻嗪類藥物3.氧化呈色硫氮雜蒽第四節(jié)吩噻嗪類藥物4.

金屬離子絡合顯色未氧化的硫可與金屬鈀離子形成配位化合物，而氧化產(chǎn)物亞砜、砜則不能，可用于鑒別和含有測定，具有專屬性。取本品約50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化鈀溶液3ml，既有沉淀生成，并顯紅色，再加過量的氯化鈀溶液，顏色變深。第四節(jié)吩噻嗪類藥物4.金屬離子絡合顯色未氧化的硫可與金1-二甲氨基-2-氯丙烷第四節(jié)吩噻嗪類藥物5.

分解產(chǎn)物特性（如氟奮乃靜等含氟有機藥物）紅色黃色二、有關(guān)物質(zhì)鑒別1.鹽酸異丙嗪1-二甲氨基-2-氯丙烷第四節(jié)吩噻嗪類藥物5.分解產(chǎn)物第四節(jié)吩噻嗪類藥物1-二甲氨基-2-氯丙烷2-二甲氨基-1-丙醇異丙美沙嗪此異構(gòu)體在丙酮中溶解度大，精制也不易除去。異丙嗪不太穩(wěn)定，易氧化，貯藏過程可能分解。第四節(jié)吩噻嗪類藥物1-二甲氨基-2-氯丙烷2-二甲氨基-第四節(jié)吩噻嗪類藥物方法——TLC法以自身高低濃度對照法控制其限量。

硅膠GF254

展開劑：環(huán)已烷-丙酮-二乙胺在紫外燈下檢視。注射劑的檢查中：采用二個限量的對照溶液規(guī)定：供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于3個；其雜質(zhì)斑點與對照溶液(2)的主斑點比較，不得更深；如有一個超過，應不深于對照溶液(1)的主斑點。第四節(jié)吩噻嗪類藥物方法——TLC法第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物NNClH3CO1234567892’地西泮(diazepam)

七元亞胺內(nèi)酰胺環(huán)奧普唑侖奧沙西泮(Oxazepam)氯氮卓(Chlordiazepoxide)NNNCH3OClH第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物NNClH3CO12345678第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、鑒別試驗

(一)化學鑒別試驗

1.沉淀反應

氯氮卓橙紅色沉淀阿普唑侖＋KBiI4

鹽酸氟西泮也生成橙紅色沉淀

氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，因此可以相互區(qū)別。阿普唑侖+遇硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、鑒別試驗(一)化學鑒第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物2.水解后呈芳伯胺反應

氯氮卓和奧沙西泮的鹽酸溶液(1→2)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅色沉淀，后者放置后顏色變暗。3.分解產(chǎn)物的反應

有機氯化合物，氧瓶燃燒法破壞，生成HCl，以5%氫氧化鈉溶液吸收，硝酸酸化，顯氯化物反應。

第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物2.水解后呈芳伯胺反應3.分解產(chǎn)第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物4.硫酸－熒光反應：苯并二氮雜卓類藥物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下顯不同的顏色。藥物硫酸稀硫酸地西泮黃綠色黃色氯氮卓黃色紫色艾司唑侖亮綠色天藍色硝西泮淡藍色藍綠色第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物4.硫酸－熒光反應：藥物硫酸稀硫(二)UV第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物藥物溶劑C(μg/ml)λmax(nm)A地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282約0.23366－氯氮卓鹽酸(9→1000)7245、3080.65阿普唑侖鹽酸(9→1000)12264－鹽酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2、284±2比值1.95~2.50362±2－氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2，307±2－奧沙西泮乙醇10229，315±2(較弱)(二)UV第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物藥物溶劑C(μg第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物(三)TLC硅膠G薄層板，苯－丙酮(3:2)為展開劑，稀硫酸噴霧，105℃干燥30min，紫外燈下檢視熒光斑點藥物Rf值斑點顏色*單一點樣混合點樣自然光254nm365nm地西泮0.800.78無色黃色(m)黃色(m)氯氮卓0.340.34無色藍紫色(s)藍紫色(w)艾司唑侖0.220.20無色灰紫色(m)藍紫色(m)硝西泮0.720.72黃色紫色(w)紫色(w)奧沙西泮0.490.52黃色亮灰藍色(s)亮灰藍色(s)*s,m,w分別表示熒光的強、中、弱第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物(三)TLC硅膠G薄層板，二、有關(guān)物質(zhì)檢查第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物

TLCHPLCGC二、有關(guān)物質(zhì)檢查第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物TLC第六節(jié)含量測定

非水溶液滴定法氧化還原滴定法酸性染料比色法紫外分光光度法氣相色譜法高效液相色譜法液質(zhì)聯(lián)用法第六節(jié)含量測定非水溶液滴定法第六節(jié)含量測定一、非水溶液滴定法當HA酸性較強時，反應不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸第六節(jié)含量測定一、非水溶液滴定法當HA酸性較強時，反應不第六節(jié)含量測定供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果HClO4滴定空白試驗校正指示劑堿性溶液pKb>10，冰醋酸中滴定突躍不明顯，需加入醋酐，使堿性增強，突躍更明顯第六節(jié)含量測定供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為第六節(jié)含量測定問題討論1.適用范圍主要用于Kb＜10-8的有機堿鹽的含量測定。對堿性較弱的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點指示的方法，可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。

Kb為10-8～10-10時，宜選冰醋酸作為溶劑；

Kb為10-10～10-12時，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液；Kb＜10-12時，應用醋酐作為溶劑。冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增大?？Х纫?pKb=14.2)第六節(jié)含量測定問題討論1.適用范圍咖啡因(pKb=14第六節(jié)含量測定

2.酸根的影響高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2

量不足終點不明顯，結(jié)果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

過量(1～3倍)不影響測定結(jié)果3.滴定劑的穩(wěn)定性4.終點指示方法常用電位法和指示劑法第六節(jié)含量測定2.酸根的影響高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸應用實例游離弱堿性藥物：地西泮、尼克剎米或氯氮卓，基于氮原子的弱堿性可以結(jié)晶紫為指示劑，非水溶液直接滴定，終點顏色綠色～藍綠色～藍色不等。氫鹵酸鹽類藥物：加入過量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難電離的鹵化汞，再用高氯酸滴定，可用結(jié)晶紫、橙黃Ⅳ作為指示劑，或用電位法指示終點。硫酸鹽類藥物：硫酸為二元酸，但在非水介質(zhì)中只顯示一元酸解離為HSO4-第六節(jié)含量測定應用實例第六節(jié)含量測定第六節(jié)含量測定硝酸鹽類：滴定反應完全，硝酸破壞指示劑，使用電位滴定法指示終點。磷酸鹽類：冰醋酸中酸性極弱，直接滴定。A.硫酸阿托品測定(BH+)2·SO42-+HClO4→(BH+)·ClO4-+(BH+)·HSO4-一元強堿直接滴定冰醋酸、醋酐混合溶劑結(jié)晶紫第六節(jié)含量測定硝酸鹽類：滴定反應完全，硝酸破壞指示劑第六節(jié)含量測定B.硫酸奎寧測定3H+H+第六節(jié)含量測定B.硫酸奎寧測定3H+H+第六節(jié)含量測定二、氧化還原滴定法1.鈰量法吩噻嗪類藥物－自身顏色的變化+++Freeradical紅色自由基Bivalentcation二價陽離子，無色鄰二氮菲指示劑(鄰二氮菲亞鐵鹽溶液)(還原型)紅色(氧化型)淺藍色電位法、永停法第六節(jié)含量測定二、氧化還原滴定法1.鈰量法吩噻嗪類藥物第六節(jié)含量測定硝苯地平2.溴酸鉀法粉紅色消失第六節(jié)含量測定硝苯地平2.溴酸鉀法粉紅色消失第六節(jié)含量測定三、酸性染料比色法UV

第六節(jié)含量測定三、酸性染料比色法UV第六節(jié)含量測定應用示例氫溴酸東莨菪堿片的含量測定精密量取對照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液4ml，振搖提取后，靜置使分層；分取三氯甲烷液，照紫外-可見分光光度法，在420nm波長處分別測定吸光度，計算，即得。第六節(jié)含量測定應用示例氫溴酸東莨菪堿片的含量測定精密量取第六節(jié)含量測定影響因素

水性最佳pH值：使得BH+和In-最多

酸性染料及其濃度：定量結(jié)合，產(chǎn)物溶解性好；可稍過量

有機溶劑的選擇：提取效率高，氯仿最理想

水分的影響：影響結(jié)果，脫水劑或濾紙除去水分

酸性染料里面的有色雜質(zhì)第六節(jié)含量測定影響因素水性最佳pH值：使得BH+和In四、UV第六節(jié)含量測定1.直接紫外測定奧沙西泮原料的測定——229nm采用標準對照法測定。鹽酸異丙嗪片的測定——249nm測定A。鹽酸異丙嗪注射液的測定——299nm測定A

2.萃取后紫外測定堿化，有機溶劑萃取游離型堿，使其與制劑輔料分離，再用分光光度法測定3.萃取-雙波長分光光度法堿化，有機溶劑萃取，在254nm、277nm波長處測定吸收，用吸收度之差計算含量，以消除抗氧劑的干擾。四、UV第六節(jié)含量測定1.直接紫外測定奧沙西泮原料的測定4.二階導數(shù)分光光度法第六節(jié)含量測定5.鈀離子比色法吩噻嗪類藥物Pd2+pH2.0紅色配合物500nm通過空白試驗對照法，可選擇性地消除吩噻嗪類藥物中氧化物的干擾，準確測定未被氧化的吩噻嗪藥物的含量。4.二階導數(shù)分光光度法第六節(jié)含量測定5.鈀離子比色法吩噻五、GC第六節(jié)含量測定分離效能好、靈敏度高、選擇性好、用量少、分析速度快有機堿或其鹽類均可直接GC分析，但鹽解離的酸對色譜柱和檢測器會損害，因此一般將生物堿鹽的水溶液先堿化，用有機溶劑提取游離堿后再分析。六、HPLC固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）流動相：水－甲醇或水－乙腈系統(tǒng)，極性較強

極性較強的組分在分離時先流出柱子，極性較弱的組分后流出柱子，適合于共存組分極性差異較大樣品的分析。雜環(huán)類藥物分析一般加入掃尾劑二乙胺或三乙胺。五、GC第六節(jié)含量測定分離效能好、靈敏度高、選擇性好、用第六節(jié)含量測定Ion-PairHPLC測定雜環(huán)類藥物中吡啶類、喹啉類等藥物時，主要采用烷基磺酸鹽（如戊烷磺酸鈉、庚烷磺酸鈉）或其他鹽類。影響條件：流動相一般呈酸性，以利于生物堿的離解；離子對試劑的非極性部分越大，形成的離子對分配系數(shù)越大，保留時間越長（十二烷基磺酸鈉＞庚烷磺酸鈉＞戊烷磺酸鈉）。第六節(jié)含量測定Ion-PairHPLC測定雜環(huán)類藥物中第六節(jié)含量測定七、LC-MS/MS三重四極桿(QQQ)第六節(jié)含量測定七、LC-MS/MS三重四極桿(QQQ)ThankYou!ThankYou!58第九章

雜環(huán)類

藥物的分析藥物分析教研室AnalyticalofHeterocyclicdrugs第九章

雜環(huán)類

藥物的分析藥物分析教研室Analytical59吡啶類喹啉類托烷類吩噻嗪類苯并二氮雜卓類雜環(huán)類Contents吡啶類喹啉類托烷類吩噻嗪類苯并二氮雜卓類雜環(huán)類Content第一節(jié)吡啶類藥物的分析αβγβα123456吡啶(Pyridine)γααββ異煙肼(Isoniazid)尼可剎米(Nikethamide)

硝苯地平(Nifedipine)

第一節(jié)吡啶類藥物的分析αβγβα123456吡啶γααβ一、主要性質(zhì)與鑒別試驗第一節(jié)吡啶類藥物的分析1.吡啶環(huán)的特性——吡啶環(huán)開環(huán)

適用于α、α’位無取代，β或γ位被羧酸衍生物取代的異煙肼、尼克剎米A.戊烯二醛反應（k?ning反應）尼克剎米戊醛二烯一、主要性質(zhì)與鑒別試驗第一節(jié)吡啶類藥物的分析1.吡啶環(huán)的特第一節(jié)吡啶類藥物的分析在無水的條件下，吡啶及其衍生物與3,4-二硝基氯苯混合共熱或加熱至熔融，冷卻后，加醇制氫氧化鉀溶液將殘渣溶解，溶液呈紫紅色。B.二硝基氯苯反應（Vongerichten反應）異煙肼－氧化成羧基；尼克剎米－水解成羧基第一節(jié)吡啶類藥物的分析在無水的條件下，吡啶及其衍生物與3,2.弱堿性：吡啶環(huán)N原子為堿性原子，吡啶環(huán)pKb為8.8（水中），可用于鑒別和非水滴定。尼克剎米：除了吡啶環(huán)上的N原子外，吡啶環(huán)β位被酰氨基取代，遇堿水解釋放二乙胺。Chp2005鑒別：取本品10滴，加氫氧化鈉試液3ml，加熱，即發(fā)生二乙胺的臭氣，能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍色。第一節(jié)吡啶類藥物的分析2.弱堿性：第一節(jié)吡啶類藥物的分析3.還原性第一節(jié)吡啶類藥物的分析異煙肼吡啶環(huán)γ位被酰肼所取代，有較強的還原性，可被不同的氧化劑氧化，也可與某些含有羰基的化合物發(fā)生縮合反應。異煙肼與硝酸銀－銀鏡反應Chp2005：取本品約10mg，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1ml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。

A.還原反應3.還原性第一節(jié)吡啶類藥物的分析異煙肼吡啶環(huán)γ位被酰肼所取B.縮合反應第一節(jié)吡啶類藥物的分析香草醛異煙腙(黃色結(jié)晶)取本品約0.1g，加水5ml溶解后，加10％香草醛的乙醇溶液1ml，搖勻，微熱，放冷，即析出黃色結(jié)晶；濾過，用稀乙醇重結(jié)晶，在105℃干燥后，依法測定（附錄ⅥC），熔點為228～231℃，熔融時同時分解。B.縮合反應第一節(jié)吡啶類藥物的分析香草醛異煙腙取本品約0第一節(jié)吡啶類藥物的分析異煙肼的其它鑒別反應①與亞硒酸作用，可將其還原為紅色硒的沉淀②與1,2-萘醌-4-磺酸在堿性介質(zhì)中，可縮合呈紅色。顯紅色第一節(jié)吡啶類藥物的分析異煙肼的其它鑒別反應①與亞硒酸作用，第一節(jié)吡啶類藥物的分析4.形成沉淀(重金屬鹽類或苦味酸)尼克剎米的鑒別：取本品2滴，加水1ml，搖勻，加硫酸銅試液2滴與硫氰酸銨試液3滴，即生成草綠色沉淀。異煙肼、尼克剎米可與氯化汞形成白色沉淀。5.分解產(chǎn)物異煙肼、尼克剎米等與無水碳酸鈉或氫氧化鈣共熱，可發(fā)生脫羧降解，并有吡啶臭味逸出。第一節(jié)吡啶類藥物的分析4.形成沉淀(重金屬鹽類或苦味酸)尼第一節(jié)吡啶類藥物的分析UV和IR第一節(jié)吡啶類藥物的分析UV和IR二、Detectionofspecificimpurities一、異煙肼中游離肼的檢查異煙肼不穩(wěn)定，游離肼即可能在原料中引入，又可能在貯藏過程中降解－誘變劑和致癌物質(zhì)1、TLC(BP、Ch.P)肼＋對二甲基苯甲醛→腙(顯色)2、比濁法(JP)專屬性差肼＋水楊醛乙醇液→混濁二、Detectionofspecificimpuri二、Detectionofspecificimpurities二、尼克剎米中有關(guān)物質(zhì)的檢查檢查方法：取本品，加甲醇制成每1ml中含40mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加甲醇分別稀釋成每1ml中含0.4mg和40μg的溶液，作為對照溶液(1)和(2)。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗，吸取上述三種溶液各10μl，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿－丙醇(75:25)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液(2)的主斑點比較，不得更深；如有1點超過時，應不深于對照溶液(1)的主斑點。TLC(無雜質(zhì)對照品－高低濃度對比法)二、Detectionofspecificimpuri二、Detectionofspecificimpurities三、二氫吡啶類有關(guān)物質(zhì)的檢查HPLC法測定，避光操作硝苯地平二、Detectionofspecificimpuri第二節(jié)喹啉類藥物的分析硫酸奎寧

(Quininesulfate)硫酸奎尼丁(quinidinesulfate)鹽酸環(huán)丙沙星(ciprofloxacinhydrochloride)第二節(jié)喹啉類藥物的分析硫酸奎寧硫酸奎尼丁(quinidin第二節(jié)喹啉類藥物的分析一、主要性質(zhì)1.堿性環(huán)丙沙星：鹽酸；奎寧、奎尼?。憾幔蛩幔ㄠ藟A含脂環(huán)氮，堿性強）奎寧(左旋體)：pKb1為5.07pKb2為9.7，飽和水溶液pH為8.8，易溶于氯仿－無水乙醇(2:1)奎尼丁(右旋體)：pKb1為5.4 pKb2為10，易溶于沸水或乙醇喹啉環(huán)上的N原子具有堿性，與強酸成鹽2.旋光性硫酸奎寧(左旋體)——硫酸奎尼丁(右旋體)3.熒光特性硫酸奎寧和硫酸奎寧丁在稀硫酸中顯藍色熒光，鹽酸環(huán)丙沙星無熒光。第二節(jié)喹啉類藥物的分析一、主要性質(zhì)1.堿性環(huán)丙沙星：鹽酸二、Identification一、綠奎寧反應（Thalleioquin）

——奎寧和奎尼丁鑒別二醌基亞胺的胺鹽取其水溶液加溴試液2～3滴和氨試液1ml，即顯翠綠色；加酸至中性顯藍色；

酸性則呈紫紅色；翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、氯仿中不溶于醚。二、Identification一、綠奎寧反應（Thalle二、Identification二、光譜特征UV－鹽酸環(huán)丙沙星：取本品，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含8μg的溶液，照分光光度法(附錄ⅣA)測定，在277nm與315nm的波長處有最大吸收。

FLD－硫酸奎寧：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即顯藍色熒光。三、無機酸鹽硫酸奎寧、硫酸奎尼丁→硫酸根＋氯化鋇→白色沉淀↓鹽酸環(huán)丙沙星→鹽酸根＋硝酸銀→白色沉淀↓二、Identification二、光譜特征UV－鹽酸環(huán)丙三、Detectionofspecificimpurities一、硫酸奎寧1.酸度－酸性雜質(zhì)

取本品0.2g，加水20ml溶解后，測定pH值應為5.7～6.6。2.氯仿－乙醇不溶物

取本品2g，加氯仿－無水乙醇(2:1)的混合液15ml，在50℃加熱10min后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過，濾渣用上述混合液分5次洗滌，每次10ml，在105℃干燥至恒重，遺留殘渣不得過2mg。3.其他金雞納堿(TLC、HPLC)

三、Detectionofspecificimpuri三、Detectionofspecificimpurities1.酸度

取本品，加水制成每1ml中含25mg的溶液，測定pH值應為3.0～4.5。2.溶液的澄清度和顏色

取本品0.1g，加水10ml溶解后，溶液應澄清；如顯色，與黃色或黃綠色4號標準比色液(附錄ⅨA)比較，不得更深。3.有關(guān)物質(zhì)（HPLC）

二、鹽酸環(huán)丙沙星中特殊雜質(zhì)檢查三、Detectionofspecificimpuri第三節(jié)托烷類藥物莨菪烷(Tropane)莨菪醇(Tropine)硫酸阿托品

(atropine)氫溴酸東莨菪堿

(scopolaminehydrochloride)****第三節(jié)托烷類藥物莨菪烷(Tropane)莨菪醇(Trop第三節(jié)托烷類藥物一、主要性質(zhì)1.水解性（酯水解生成醇和酸）阿托品莨菪醇莨菪酸2.堿性

阿托品和東莨菪堿結(jié)構(gòu)中，五元脂環(huán)含有叔胺氮原子，較強的堿性，易于酸成鹽，如阿托品pKb1為4.353.旋光性第三節(jié)托烷類藥物一、主要性質(zhì)1.水解性（酯水解生成醇和酸一、托烷生物堿一般鑒別試驗(Vitaili反應)取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放冷，加乙醇2～3滴，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。二、Identification一、托烷生物堿一般鑒別試驗(Vitaili反應)取供試品約1二、氧化反應三、沉淀反應生物堿－與生物堿沉淀劑生成沉淀阿托品＋氯化汞醇試液→黃色沉淀東莨菪堿＋氯化汞醇→白色復鹽沉淀四、硫酸鹽和溴化物反應二、Identification二、氧化反應三、沉淀反應生物堿－與生物堿沉淀劑生成沉淀阿托品三、Detectionofspecificimpurities一、氫溴酸東莨菪堿洋金花粗粉乙醇/滲漉滲漉液減壓蒸餾浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3,CHCl3/提取總生物堿Na2CO3,CHCl3/分離東莨菪堿HBr/成鹽氫溴酸東莨菪堿（粗品）75%C2H5OH/精制成品酸度易氧化物——阿撲阿托品、顛茄堿其它生物堿——阿撲阿托品、其他含有不飽和雙鍵的有機物質(zhì)二、硫酸阿托品三、Detectionofspecificimpuri第四節(jié)吩噻嗪類藥物吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的衍生物，分子結(jié)構(gòu)中均含有硫氮雜蒽母核，基本結(jié)構(gòu)如下：R’:-H、-Cl、-CF3、-COCH3、-SCH2CH3R:具有2～3碳鏈的二甲或二乙胺基，或含氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物第四節(jié)吩噻嗪類藥物吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的衍生物，分子結(jié)一、主要性質(zhì)與鑒別第四節(jié)吩噻嗪類藥物1.UV硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)的π系統(tǒng)，紫外區(qū)三個吸收峰值，約205nm、254nm、300nm，最強多在254nm附近，根據(jù)2位、10位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。當母核的二價硫被氧化為砜或亞砜，則呈現(xiàn)四個峰值。藥物溶劑C(μg/ml)λmax(nm)A鹽酸氯丙嗪鹽酸(9→1000)52540.46915306－－鹽酸異丙嗪鹽酸(0.1mol/L)6249－883~937奮乃靜無水乙醇72580.65－鹽酸氟奮乃靜鹽酸(9→1000)10255－553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸(1→20)10256－630鹽酸硫利達嗪乙醇8264與315－－一、主要性質(zhì)與鑒別第四節(jié)吩噻嗪類藥物1.UV2.IR第四節(jié)吩噻嗪類藥物3.氧化呈色硫氮雜蒽母核中的二價硫易氧化，母核易被不同的氧化劑氧化成亞砜、砜等不同的產(chǎn)物，隨取代基的不同，呈現(xiàn)不同的顏色。藥物硫酸硝酸過氧化氫鹽酸氯丙嗪－顯紅色，漸變?yōu)榈S色－鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色，放置后顏色漸變深生成紅色沉淀，加熱即溶解，溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色－奮乃靜－－顯深紅色，放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色，溫熱后變成紅褐色－－鹽酸三氟拉嗪－生成微帶紅色的白色沉淀；放置后，紅色變深，加熱后變黃色－鹽酸硫利達嗪顯藍色－－2.IR第四節(jié)吩噻嗪類藥物3.氧化呈色硫氮雜蒽第四節(jié)吩噻嗪類藥物4.

金屬離子絡合顯色未氧化的硫可與金屬鈀離子形成配位化合物，而氧化產(chǎn)物亞砜、砜則不能，可用于鑒別和含有測定，具有專屬性。取本品約50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化鈀溶液3ml，既有沉淀生成，并顯紅色，再加過量的氯化鈀溶液，顏色變深。第四節(jié)吩噻嗪類藥物4.金屬離子絡合顯色未氧化的硫可與金1-二甲氨基-2-氯丙烷第四節(jié)吩噻嗪類藥物5.

分解產(chǎn)物特性（如氟奮乃靜等含氟有機藥物）紅色黃色二、有關(guān)物質(zhì)鑒別1.鹽酸異丙嗪1-二甲氨基-2-氯丙烷第四節(jié)吩噻嗪類藥物5.分解產(chǎn)物第四節(jié)吩噻嗪類藥物1-二甲氨基-2-氯丙烷2-二甲氨基-1-丙醇異丙美沙嗪此異構(gòu)體在丙酮中溶解度大，精制也不易除去。異丙嗪不太穩(wěn)定，易氧化，貯藏過程可能分解。第四節(jié)吩噻嗪類藥物1-二甲氨基-2-氯丙烷2-二甲氨基-第四節(jié)吩噻嗪類藥物方法——TLC法以自身高低濃度對照法控制其限量。

硅膠GF254

展開劑：環(huán)已烷-丙酮-二乙胺在紫外燈下檢視。注射劑的檢查中：采用二個限量的對照溶液規(guī)定：供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于3個；其雜質(zhì)斑點與對照溶液(2)的主斑點比較，不得更深；如有一個超過，應不深于對照溶液(1)的主斑點。第四節(jié)吩噻嗪類藥物方法——TLC法第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物NNClH3CO1234567892’地西泮(diazepam)

七元亞胺內(nèi)酰胺環(huán)奧普唑侖奧沙西泮(Oxazepam)氯氮卓(Chlordiazepoxide)NNNCH3OClH第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物NNClH3CO12345678第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、鑒別試驗

(一)化學鑒別試驗

1.沉淀反應

氯氮卓橙紅色沉淀阿普唑侖＋KBiI4

鹽酸氟西泮也生成橙紅色沉淀

氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，因此可以相互區(qū)別。阿普唑侖+遇硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、鑒別試驗(一)化學鑒第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物2.水解后呈芳伯胺反應

氯氮卓和奧沙西泮的鹽酸溶液(1→2)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅色沉淀，后者放置后顏色變暗。3.分解產(chǎn)物的反應

有機氯化合物，氧瓶燃燒法破壞，生成HCl，以5%氫氧化鈉溶液吸收，硝酸酸化，顯氯化物反應。

第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物2.水解后呈芳伯胺反應3.分解產(chǎn)第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物4.硫酸－熒光反應：苯并二氮雜卓類藥物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下顯不同的顏色。藥物硫酸稀硫酸地西泮黃綠色黃色氯氮卓黃色紫色艾司唑侖亮綠色天藍色硝西泮淡藍色藍綠色第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物4.硫酸－熒光反應：藥物硫酸稀硫(二)UV第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物藥物溶劑C(μg/ml)λmax(nm)A地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282約0.23366－氯氮卓鹽酸(9→1000)7245、3080.65阿普唑侖鹽酸(9→1000)12264－鹽酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2、284±2比值1.95~2.50362±2－氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2，307±2－奧沙西泮乙醇10229，315±2(較弱)(二)UV第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物藥物溶劑C(μg第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物(三)TLC硅膠G薄層板，苯－丙酮(3:2)為展開劑，稀硫酸噴霧，105℃干燥30min，紫外燈下檢視熒光斑點藥物Rf值斑點顏色*單一點樣混合點樣自然光254nm365nm地西泮0.800.78無色黃色(m)黃色(m)氯氮卓0.340.34無色藍紫色(s)藍紫色(w)艾司唑侖0.220.20無色灰紫色(m)藍紫色(m)硝西泮0.720.72黃色紫色(w)紫色(w)奧沙西泮0.490.52黃色亮灰藍色(s)亮灰藍色(s)*s,m,w分別表示熒光的強、中、弱第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物(三)TLC硅膠G薄層板，二、有關(guān)物質(zhì)檢查第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物

TLCHPLCGC二、有關(guān)物質(zhì)檢查第五節(jié)苯并二氮雜卓類藥物TLC第六節(jié)含量測定

非水溶液滴定法氧化還原滴定法酸性染料比色法紫外分光光度法氣相色譜法高效液相色譜法液質(zhì)聯(lián)用法第六節(jié)含量測定非水溶液滴定法第六節(jié)含量測定一、非水溶液滴定法當HA酸性較強時，反應不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸第六節(jié)含量測定一、非水溶液滴定法當HA酸性較強時，反應不第六節(jié)含量測定供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果HClO4滴定空白試驗校正指示劑堿性溶液pKb>10，冰醋酸中滴定突躍不明顯，需加入醋酐，使堿性增強，突躍更明顯第六節(jié)含量測定供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為第六節(jié)含量測定問題討論1.適用范圍主要用于Kb＜10-8的有機堿鹽的含量測定。對堿性較弱的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點指示的方法，可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。

Kb為10-8～10-10時，宜選冰醋酸作為溶劑；

Kb為10-10～10-12時，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液；Kb＜10-12時，應用醋酐作為溶劑。冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增大?？Х纫?pKb=14.2)第六節(jié)含量測定問題討論1.適用范圍咖啡因(pKb=14第六節(jié)含量測定

2.酸根的影響高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2

量不足終點不明顯，結(jié)果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

過量(1～3倍)不影響測定結(jié)果3.滴定劑的穩(wěn)定性4.終點指示方法常用電位