木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（Lip）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)-微量法UPLC-MS-4258

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（Lip）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。貨號(hào)：UPLC-MS-4258規(guī)格：100T/96S產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。

微量法試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一液體115mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體5mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體3mL×1瓶2-8℃保存產(chǎn)品說(shuō)明：木質(zhì)素過(guò)氧化物酶（EC4）（Lip）是一種含亞鐵血紅素的過(guò)氧化物酶，是木質(zhì)素的生物降解過(guò)程中的主要木質(zhì)素降解酶類。Lip在飼料資源開(kāi)發(fā)以及廢水、廢物處理領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。藜蘆醇可以被Lip催化發(fā)生氧化反應(yīng)，其產(chǎn)物藜蘆醛在310nm處有最大吸收峰，以藜蘆醇為反應(yīng)底物，通過(guò)測(cè)定310nm處藜蘆醛的吸光值，可以判定Lip的酶活性。LipVeratrylAlcohol Veratraldehyde(310nm)注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計(jì)///微量玻璃比色皿/96孔（UV板）、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1試劑一體積（mL）1:5~10的比例（0.1g1mL一）加入試劑一，冰浴勻漿；10000g4℃10min，取上清置冰上待測(cè)。2、細(xì)菌或細(xì)胞樣本：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）500~1000:1的比例（500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一）加入試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（300W，超聲3s，間隔7s3min），10000g4℃10min，取上清置冰上待測(cè)。3、培養(yǎng)液或其他液體：直接檢測(cè)。若溶液渾濁則離心后取上清進(jìn)行測(cè)定。二、測(cè)定步驟1、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至310nm，蒸餾水調(diào)零。237℃10min6:2:120μL樣本+180μL工作液加入微量玻璃比色皿/96孔（UV板）進(jìn)行測(cè)定。3、加樣表（在微量玻璃比色皿/96孔（UV板）中依次加入下列試劑)：試劑名稱（μL）測(cè)定管試劑一（μL）120試劑二（μL）40樣本（μL）20試劑三（μL）20將上述試劑分別加入微量玻璃比色皿/96孔（UV板）后迅速吹打混勻，從加完最后一個(gè)試劑開(kāi)始計(jì)時(shí)，記15sA137℃水浴鍋/5min（培養(yǎng)箱有控溫功能的可以將溫度調(diào)至37℃），5min15sA2ΔA=A2-A1，注意保證測(cè)定時(shí)間的準(zhǔn)確性。三、Lip活力的計(jì)算用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下：按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算酶活定義：37℃，pH4.5mg1nmolLip活性（U/mgprot）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣×Cpr)÷T=215.05×ΔA÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活定義：37℃，pH4.5g1nmolLip活性（U/g質(zhì)量）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T=215.05×ΔA÷W按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算酶活定義：37℃，pH4.5104細(xì)菌/1nmolLip活性（U/104cell）ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T=215.05×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量按照樣本體積計(jì)算37℃，pH4.5mL1nmolLip活性（U/mL）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷V樣÷T=215.05×ΔAε：藜蘆醛摩爾消光系數(shù)：9300L/mol/cm；d:比色皿光徑，0.6cm；V反總：反應(yīng)總體積，2×10-4L；V樣：加入樣本體積，0.02mL，V用96孔UV板測(cè)定的計(jì)算公式如下：按樣本蛋白質(zhì)濃度計(jì)算酶活定義：37℃，pH4.5mg1nmolLip活性（U/mgprot）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣×Cpr)÷T=358.42×ΔA÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活定義：37℃，pH4.5g1nmolLip活性（U/g質(zhì)量）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T=358.42×ΔA÷W按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計(jì)算酶活定義：37℃，pH4.5104細(xì)菌/1nmolLip活性（U/104cell）=ΔA×V反總÷(?×d)×109÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)÷T=358.42×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量按照樣本體積計(jì)算酶活定義：37℃，pH4.5條件下，每mL血清或液體樣本每分鐘氧化1nmol藜蘆醇所需酶量為一個(gè)酶活單位。Lip活性（U/mL）=ΔA