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基因工程試題基因工程試題基因工程試題資料僅供參考文件編號(hào):2022年4月基因工程試題版本號(hào):A修改號(hào):1頁(yè)次:1.0審核:批準(zhǔn):發(fā)布日期:基因工程試題A一、名詞解釋?zhuān)款}2分,共20分)1、轉(zhuǎn)染:2、質(zhì)粒不親和性:3、cDNA文庫(kù):4、RACE:5、基因工程:6、RT-PCR7、插入失活:8、S-D序列:9、穿梭質(zhì)粒載體:10、多克隆位點(diǎn):二、選擇題(每題1分,共15分)1()基因工程操作的三大基本元件是:(I供體II受體III載體IV抗體V配體)AI+II+IIIBI+III+IVCII+III+IVDII+IV+VEIII+IV+V2()基因工程的單元操作順序是A增,轉(zhuǎn),檢,切,接B切,接,轉(zhuǎn),增,檢C接,轉(zhuǎn),增,檢,切D檢,切,接,增,轉(zhuǎn)E切,接,增,轉(zhuǎn),檢3()生物工程的上游技術(shù)是A基因工程及分離工程B基因工程及發(fā)酵工程C基因工程及酶工程D基因工程及細(xì)胞工程E基因工程及蛋白質(zhì)工程4()下列對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶描述正確的是:A依賴于RNA的DNA聚合酶或稱為RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶B依賴于cDNA的DNA聚合酶或稱為cDNA指導(dǎo)的DNA聚合酶C依賴于DNA的DNA聚合酶或稱為DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶D依賴于RNA的RNA聚合酶或稱為rNA指導(dǎo)的RNA聚合酶5()下列對(duì)限制性內(nèi)切酶描述正確的是A限制性內(nèi)切酶可識(shí)別任一的DNA序列B使用限制性內(nèi)切酶時(shí),有時(shí)可出現(xiàn)星活性C限制性內(nèi)切酶可識(shí)別堿基數(shù)不超過(guò)5個(gè)D限制性內(nèi)切酶切割堿基序列產(chǎn)生都是黏性末端6()T4-DNA連接酶是通過(guò)形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起,其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是A2'-OH和5'-PB2'-OH和3'-PC3'-OH和2'-PD3'-OH和5'-PE5'-OH和3'-P7()下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述,錯(cuò)誤的是A連接反應(yīng)的最佳溫度為12—16B連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于10%C連接反應(yīng)緩沖體系的ATP濃度不能高于1mMD連接酶通常應(yīng)過(guò)量2-5倍EDTT在反應(yīng)中可加也可不加8()下列哪種克隆載體對(duì)外源DNA的容載量最大?A質(zhì)粒B黏粒C酵母人工染色體(YAC)Dλ噬菌體9()載體的功能是(I運(yùn)送外源基因高效進(jìn)入受體細(xì)胞II為外源基因提供復(fù)制能力III為外源基因提供整合能力)AIBI+IICI+IIIDII+IIIEI+II+III10()考斯質(zhì)粒(cosmid)是一種A天然質(zhì)粒載體B由入-DNA的cos區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C能裂解受體細(xì)胞的烈性載體D具有溶原性質(zhì)的載體E能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體11()下列有關(guān)基因的描述,錯(cuò)誤的是A蛋白質(zhì)是基因表達(dá)唯一的產(chǎn)物B基因是DNA鏈上具有編碼功能的片段C基因也可以是RNAD基因突變不一定導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)12()關(guān)于cDNA的最正確的提法是:A同mRNA互補(bǔ)的單鏈DNAB同mRNA互補(bǔ)的雙鏈DNAC以mRNA為模板合成的雙鏈DNAD以上都正確13()某一重組DNA(kb)的載體部分有兩個(gè)SmaI酶切位點(diǎn)。用SmaI酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長(zhǎng)度不同的帶子,其長(zhǎng)度總和與已知數(shù)據(jù)吻合,該重組分子插入片段上的SmaI酶切位點(diǎn)共有A5個(gè)B4個(gè)C3個(gè)D2個(gè)14()同一種質(zhì)粒DNA,以三種不同的形式存在,電泳時(shí),它們的遷移速率是:AOCDNA>SCDNP>LDNABSCDNA>LDNA>OCDNACLDNA>OCDNA>SCDNADSCDNA>OCDNA>LDNA15()cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是A成功率高B不含內(nèi)含子C操作簡(jiǎn)便D表達(dá)產(chǎn)物可以分泌E能糾正密碼子的偏愛(ài)性三、簡(jiǎn)答題(每題5分,共25分)1、什么是包涵體2、PCR反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容?基本反應(yīng)過(guò)程是什么?3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響?

4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么?5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么?四、論述題(每題10分,共40分)1簡(jiǎn)述載體構(gòu)建的一般過(guò)程2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)是什么?3如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率?4試述3′RACE技術(shù)原理和方法基因工程試題標(biāo)準(zhǔn)答案及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)A一、選擇題(每題1分,共15分)1、A2、A3、A4、A5、B6、D7、E8、C9、E10、B11、A12、C13、D14、B15、B二、名詞解釋?zhuān)款}2分,共20分)1、轉(zhuǎn)染:專(zhuān)指感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞捕獲和表達(dá)噬菌體DNA分子的生命過(guò)程。2、質(zhì)粒不親和性:在沒(méi)有選擇壓力的情況下,兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。3、cDNA文庫(kù):是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4、RACE:是一種通過(guò)PCR進(jìn)行cDNA末端快速克隆的技術(shù),是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈后用PCR技術(shù)擴(kuò)增出某個(gè)特異位點(diǎn)到3,或5,端之間未知序列的方法。5、基因工程:在分子水平上的進(jìn)行的遺傳操作,指將一種或多種微生物的基因或基因組提取出來(lái),或人工合成基因,按著人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)密的設(shè)計(jì),經(jīng)過(guò)體外加工重組,轉(zhuǎn)移到另一種生物體的細(xì)胞內(nèi),使之能在受體細(xì)胞遺傳并獲得新的遺傳性狀的技術(shù)。6、RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA,以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈,然后用已知一對(duì)引物,擴(kuò)增嵌合分子,這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR7、Insertinaction:即插入失活,基因工程載體上的某些選擇標(biāo)記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點(diǎn),在該位點(diǎn)用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶處理,并將外源DNA片段插入該位點(diǎn),則插入的外源DNA片段將破壞原有基因的讀碼框,往往導(dǎo)致原有的選擇標(biāo)記基因無(wú)法翻譯表達(dá),或即使翻譯表達(dá),形成的也是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì),這一現(xiàn)象稱為插入失活。。8、S-D序列:在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合位點(diǎn)上,含有一個(gè)轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖體RNA3,末端堿基互補(bǔ)的序列,該序列最初由Shine、Dalgarno發(fā)現(xiàn),故后來(lái)命名為Shine—Dalgarno序列,簡(jiǎn)稱S-D序列。9、穿梭質(zhì)粒載體:指一類(lèi)由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記,因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、MCS:指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的DNA片段。三、簡(jiǎn)答題(共25分,每題5分)1、什么是包涵體?重組蛋白在胞內(nèi)表達(dá)時(shí),常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在,這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達(dá)時(shí)的普遍現(xiàn)象,這是由于肽鏈折疊過(guò)程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯(cuò)誤聚合,而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、PCR反應(yīng)體系包括哪些內(nèi)容?基本反應(yīng)過(guò)程是什么?PCR反應(yīng)體系所要求的條件:a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補(bǔ)的DNA引物(約20個(gè)堿基左右)。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如:TagDNA聚合酶。c、dNTP。d、作為模板的目的DNA序列,E無(wú)菌水,F(xiàn),緩沖液PCR反應(yīng)體系的基本反應(yīng)過(guò)程:預(yù)變性、變性、退火、延伸、復(fù)延伸。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響?⑴酶的純度。⑵DNA樣品的純度。⑶DNA的甲基化程度。⑷酶切反應(yīng)的溫度與時(shí)間。⑸DNA分子的構(gòu)型。⑹限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么?①能在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行獨(dú)立和穩(wěn)定的自我復(fù)制②具有合適的限制內(nèi)切酶位點(diǎn)③具有合適的選擇標(biāo)記基因5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么?是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn):①證實(shí)了DNA是遺傳物質(zhì)②揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理③遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明:①限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與DNA切割②DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接③基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問(wèn)答題(每題10分,共40分)1簡(jiǎn)述載體構(gòu)建的一般過(guò)程A目的基因分析(1)ORF分析(2)酶切位點(diǎn)分析B載體選擇與分析(1)多克隆位點(diǎn)分析(2)抗性標(biāo)記分析(3)啟動(dòng)子與其他篩選標(biāo)記分析C連接體系與連接時(shí)間確定2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)是什么??jī)?yōu)點(diǎn):大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡(jiǎn)單、成本低廉,基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景知識(shí)清楚,對(duì)其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較了解,而且歷經(jīng)二十年的基因工程實(shí)踐,大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實(shí)驗(yàn)體系,有多種適用的寄主菌株和載體系列,大腸桿菌易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點(diǎn):在通常情況下,細(xì)菌的RNA聚合酶不能識(shí)別真核的啟動(dòng)子;許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過(guò)翻譯后的加工修飾,如正確的折疊和組裝,而細(xì)菌中通常并沒(méi)有這樣的修飾機(jī)制,從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無(wú)法產(chǎn)生有活性的蛋白;外源真核基因所表達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的蛋白酶識(shí)別,并被當(dāng)做“異已分子”降解掉。3如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率?⑴提高啟動(dòng)子強(qiáng)度⑵縮短啟動(dòng)子同克隆基因間距離⑶高效的翻譯起始序列⑷高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)⑸提高質(zhì)??截悢?shù)及穩(wěn)定性⑹用以下方法提高翻譯水平:①調(diào)整SD序列與AUG間的距離②用點(diǎn)突變的方法改變某些堿基③增加mRNA的穩(wěn)定性的⑺減輕細(xì)胞的代謝負(fù)荷:①誘導(dǎo)表達(dá)②表達(dá)載體的誘導(dǎo)復(fù)制⑻提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性,防止其降解:①克隆一段原核序列,表達(dá)融合蛋白②采用某種突變菌株③表達(dá)分泌蛋白質(zhì)4試述3′RACE技術(shù)原理和方法PCR用于擴(kuò)增代表mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點(diǎn)與其3′或5′末端之間區(qū)域的部分cDNA稱為快速擴(kuò)增cDNA末端技術(shù)。如果已敿目的mRNA的一片段鏈內(nèi)短序列,據(jù)此或設(shè)計(jì)基因特異引物,用原先存在的poly(A)尾(

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