高效液相色譜法測定阿苯達唑原料藥的含量獲獎科研報告

高效液相色譜法測定阿苯達唑原料藥的含量獲獎科研報告摘要：為建立一種阿苯達唑原料藥含量測定的高效液相方法，采用方法：色譜條件：AgilentODSC18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;以甲醇為流動相A;磷酸二氫鈉水溶液（11g→800ml）為流動相B，甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=65：35時，流速為0.8ml/min，阿苯達唑對照品主峰保留時間為3.044min;分離度良好，掃描波長為292nm，柱溫：30℃，結果阿苯達唑原料及溶劑峰均得到良好分離。阿苯達唑在2μg/ml～1200μg/ml濃度范圍內(nèi)線性良好（R2=0.99999，n=6），平均回收率98.0%，RSD為0.5%，定量限為0.1μg/ml，并得出結論：高效液相色譜法靈敏、準確，專屬性強，重現(xiàn)性好，可用于阿苯達唑原料藥含量的測定及質量控制。

關鍵詞：阿苯達唑高效液相色譜法紫外分光光度法含量測定

阿苯達唑（Abendazole）是一種抗寄生蟲的廣譜藥物，對阿苯達唑線蟲、棘球蚴、絳蟲、吸蟲等具有較好的驅除作用[1-2]，在獸醫(yī)臨床廣泛應用。我們通常會采用高氯酸滴定法和紫外分光光度法來測定阿苯達唑原料粉的含量，這兩種方法在《中華人民共和國獸藥典》[3]中都有提到，但高氯酸滴定法和紫外分光光度法[4]受環(huán)境因素的影響較大，使得結果的專屬性較差，準確度偏低。并且在獸藥廠生產(chǎn)時可以看到，有些不良商家以次充好，僅僅用滴定法或紫外的方法都不能準確、有效地檢測原料含量，所以本文利用高效液相色譜法[5-6]，建立一種檢測阿苯達唑原料藥的方法。本文通過實際應用表明該方法可以準確快速地測定阿苯達唑原料藥的含量，并且更有效地排除其他外界因素的影響，更好地通過含量測定控制阿苯達唑原料藥的質量。本方法專屬性強，重現(xiàn)性高，可以為阿苯達唑原料藥含量測定提供新的參考。

1.材料

1.1試劑。阿苯達唑對照品（中國藥品生物制品檢定所）;阿苯達唑原料（連云港市亞輝醫(yī)藥化工有限公司，批號：9011237）;甲醇，色譜級;磷酸二氫鈉;高氯酸，分析純;水，自制超純水。

1.2儀器。LC-20A島津高效液相色譜儀;AgilentODSC18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;FA1004型電子天平;μV-5500PC型紫外可見光光度計;DHG-9030A電熱鼓風干燥箱。

2.方法與結果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗。AgilentODSC18（5μm，3.0×150mm）色譜柱;以甲醇為流動相A;磷酸二氫鈉水溶液（11g→800ml）為流動相B，通過篩選不同比例的流動相，得出當甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=65：35時，流速為0.8ml/min，阿苯達唑對照品主峰保留時間為3.044min;拖尾因子1.00;分離度為3.3，表明主峰和雜質峰分離度良好，因此選擇其作為最佳的色譜條件;通過紫外分光光度計在200nm～400nm處掃描，得出在292nm處有最大紫外吸收，故確定掃描波長為292nm;柱溫：30℃;進樣量：10μl。理論板數(shù)阿苯達唑峰計算不低于2000。

2.2對照品溶液的制備。取阿苯達唑對照品在電子天平上精確稱定10mg置200ml量瓶中，移取5ml冰乙酸使對照品溶解，再用流動相稀釋至刻度線處，將定容后的對照品溶液超聲50min，配得0.05mg/ml對照品溶液。

2.3原料藥供試品溶液的制備。稱取阿苯達唑供試品原料0.1g，用流動相A稀釋制成每1ml中約含1mg的溶液，搖勻。將搖勻定容的溶液超聲10min，精確移取，用流動相B稀釋制成1ml中約含0.05mg/ml的溶液。

2.4重復性實驗。取0.05mg/ml阿苯達唑對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，檢測其峰面積，重復上述實驗6次，計算6次峰面積的RSD值為0.4%，表示其重復性良好。

2.5穩(wěn)定性實驗。取0.05mg/ml阿苯達唑對照品溶液放置2、4、6、8、12、24、36、48h，注入液相色譜儀進樣，計算各時間的色譜峰面積的RSD值為0.5%，說明在常溫放置條件48小時內(nèi)，溶液穩(wěn)定性良好。

2.6定量限。將2.2項下的對照品溶液用無水乙醇逐級稀釋，信噪比10：1時，檢出濃度為0.1μg/ml為定量限。

2.7線性及范圍。將2.2項下配制的阿苯達唑對照品溶液濃度為1、2、3、4、5、6、10μg/mL分別進樣20μL測定峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。以對照品峰面積對其濃度進行線性回歸，回歸方程：Y=381274.4237X+5349.3，R2=0.99999，表明2μg/ml-1200μg/ml濃度范圍內(nèi)峰面積與濃度呈良好的線性關系。

2.8加樣回收率。分別精確量取原料品溶液配制的1mg/ml供試品溶液3ml置6個100ml容量瓶中，再精密量取對照品溶液配制的1mg/ml對照品溶液2ml和5ml各3份，分別加入該6個容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度。超聲15min，用0.45μl微孔濾膜過濾，進樣為10μl，測定各自的阿苯達唑含量，計算回收率、平均回收率及RSD值，測定結果見表一：

2.9含量測定。按2.3實驗步驟配制0.10mg/ml供試品溶液，用外標法測定阿苯達唑含量（高效液相色譜圖見圖一，圖二），并將測定結果紫外分光光度法測定結果進行對比。表二數(shù)據(jù)表明，我們所建立的高效液相色譜法能夠準確測定阿苯達唑百分含量。

3.結果與討論

3.1本文通過使用紫外分光光度法進行波長掃描，得出阿苯達唑原料在292nm處有最大吸收波長，從而作為最佳波長掃描范圍。3.2本文通過研究不同的流動相比例和流速，最終確定在甲醇—磷酸二氫鈉水溶液=60：40時，流速為0.8ml/min，主峰和有關物質分離度良好，因此選擇其作為最佳的色譜條件。

3.3本文所建立的方法優(yōu)點在于：通過與標準品進行對照，專屬性強，耗時短，出峰時間早，主峰和雜質峰分離度良好，可以很清晰地看出有關物質的存在，在獸藥廠進行原料藥檢測時，可以很好地發(fā)現(xiàn)不良商家的以壞充好的意圖。傳統(tǒng)