雞新城疫的診斷課件

技能訓(xùn)練8

雞新城疫的診斷技能訓(xùn)練8

雞新城疫的診斷掌握雞新城疫的臨床診斷和實驗室診斷的方法實訓(xùn)目標實訓(xùn)目標疑似雞新城疫病死雞、剪刀、鑷子、病理剖檢記錄表、工作服、膠靴、圍裙、橡膠手套和來蘇兒等。9～11日齡SPF雞胚、恒溫箱、照蛋器、蛋盤、接種箱、注射器（1～5ml）、針頭、中號鑷子、剪刀、眼科剪刀和鑷子、毛細吸管、橡皮乳頭、滅菌平皿、試管、吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精燈、試管架、膠布、蠟、錐子、煮沸消毒器、消毒劑（3%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸）、離心機、離心管、生理鹽水、96孔V型微量血凝集反應(yīng)板、微量吸液器、混合振蕩器；1%雞紅細胞懸液、雞新城疫弱毒疫苗、雞新城疫標準陽性血清等。儀器材料疑似雞新城疫病死雞、剪刀、鑷子、病理剖檢記錄表、工作服、膠靴方法步驟（一）ND的臨床診斷（二）ND的實驗室診斷方法步驟（一）ND的臨床診斷（一）ND的臨床診斷1．按家禽尸體剖檢程序，首先檢查雞的體表組織，然后檢查皮下組織，最后打開體腔，暴露整個胸腔和腹腔器官，檢查內(nèi)部組織器官。雞新城疫主要檢查消化道病變。2．將剖檢所見填寫于病理剖檢記錄表內(nèi)。3．根據(jù)剖檢記錄，歸納分析進行初步診斷。（一）ND的臨床診斷1．按家禽尸體剖檢程序，首先檢查雞的體（二）ND的實驗室診斷1．病毒的分離培養(yǎng)2．病毒的鑒定（二）ND的實驗室診斷1．病毒的分離培養(yǎng)1．病毒的分離培養(yǎng)（1）病料采集與處理分離病毒的材料應(yīng)來自早期病例病雞撲殺后應(yīng)用無菌操作采取脾、腦、肺、肝、腎等器官組織混合將病料制成1∶5～1∶10的乳劑，每毫升加入青霉素10000單位、鏈霉素10mg，以抑制可能污染的細菌置冰箱中作用2～4h，然后離心沉淀，取其上清液作為接種材料。在這同時，應(yīng)對接種材料作無菌檢查如有細菌生長，應(yīng)將原始材料再作除菌處理，也可改用細菌濾器過濾除菌。1．病毒的分離培養(yǎng)（1）病料采集與處理（2）雞胚接種用9～11日齡的SPF雞胚（如果沒有SPF雞胚，也可用非免疫雞胚），將上述處理過的材料，取0.1～0.2ml接種于尿囊腔內(nèi)。接種后以熔化的石蠟將卵殼上的接種孔封閉，繼續(xù)置溫箱內(nèi)。每日上下午各照蛋一次，連續(xù)觀察5d，接種24h內(nèi)死亡的雞胚，廢棄不用，于24h后死亡的雞胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上（氣室向上）。然后用無菌操作吸取尿囊液，并做無菌檢查，尿囊液渾濁應(yīng)廢棄。留下無菌的尿囊液置低溫冰箱保存，供作進一步鑒定。在這同時可將雞胚傾入一平皿內(nèi)，仔細觀察病變。由新城疫病毒致死的雞胚，胚體全身充血，在胚頭、胸、背、翅和趾部有小出血點，尤其以翅，趾部明顯，這在診斷上有參考價值。（2）雞胚接種2．病毒的鑒定（1）微量血凝試驗（HA）（2）微量血凝抑制試驗（HI）2．病毒的鑒定（1）微量血凝試驗（HA）（1）微量血凝試驗（HA）一方面判斷分離病毒是否具有血凝性，另一方面確定HI試驗中所用抗原的HA滴度。①用微量移液器向反應(yīng)板每個孔分別加生理鹽水50μl，共加12孔。②換一吸頭吸取50μl待檢病毒液，加于第1孔的生理鹽水中，并用移液器擠壓3～5次使病毒混和均勻，然后取50μl移入第二孔，混勻后取50μl移入第3孔，依次倍比稀釋到第11孔，第11孔中液體混勻后從中吸出50μl棄去。第12孔不加病毒抗原，作對照。③換一吸頭吸取1％紅細胞懸液依次加入1～12個孔中，每孔加50μl。④加樣完畢，將反應(yīng)板置于微型振蕩器上振蕩1min。并放室溫（18～20℃）下作用30～40min，或置37℃恒溫培養(yǎng)箱中作用15～30min取出，觀察并判定結(jié)果。（1）微量血凝試驗（HA）一方面判斷分離病毒是否具有血凝性11可編輯11可編輯⑤結(jié)果判定及記錄“＋”表示紅細胞完全凝集。紅細胞凝集后完全沉于反應(yīng)孔底層，呈顆粒狀，邊緣不整或鋸齒狀，而上層液體中無懸浮的紅細胞。“－”表示紅細胞未凝集。反應(yīng)孔底部的紅細胞沒有凝集成一層，而是全部沉淀成小圓點，位于小孔最底端，邊緣水平?！啊馈北硎静糠帜＜t細胞下沉情況介于“＋”與“－”之間。新城疫病毒液能凝集雞的紅細胞，但隨著病毒液被稀釋，其凝集紅細胞的作用逐漸變?nèi)?。稀釋到一定倍?shù)時，就不能使紅細胞出現(xiàn)明顯的凝集，從而出現(xiàn)可疑或陰性結(jié)果。⑤結(jié)果判定及記錄血凝試驗（HA）孔號試劑123……9101112生理鹽水505050……50505050病毒液505050……5050501%的紅細胞505050……50505050振蕩1min，置于室溫30~40min，或置37℃溫箱15~30min結(jié)果觀察（血凝價）凝不凝不凝不滑滑滑棄血凝試驗（HA）孔號123…HA視頻HA視頻用上述分離病毒制備4單位病毒，再用標準的陽性血清進行HI試驗。①用微量移液器向1～12號孔中分別加入50μl生理鹽水。②換一吸頭取標準陽性血清50μl置于第１孔中，擠壓3～5次混勻，吸出50μl放入第二孔中，然后依次倍比稀釋至第10孔，并將第10孔的液體混勻后取50μl棄去。第11孔為病毒對照，第12孔為鹽水對照。③用微量移液器吸取稀釋好的4個血凝單位的病毒抗原，向1～11孔中分別加50μl。然后，振蕩1min，將反應(yīng)板置室溫下作用20min，或在37℃恒溫培養(yǎng)箱中作用5～10min。④取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入1％紅細胞懸液50μl，再將反應(yīng)板置于微型振蕩器上振蕩15～30s，混和均勻。⑤將反應(yīng)板置37℃溫箱中作用15～30min后取出，觀察并記錄結(jié)果。（2）微量血凝抑制試驗（HI）用上述分離病毒制備4單位病毒，再用標準的陽性血清進行HI試驗⑥結(jié)果判斷和記錄“－”表示紅細胞凝集抑制。高濃度的新城疫抗體能抑制新城疫病毒對雞紅細胞的凝集作用，使反應(yīng)孔中的紅細胞呈圓點狀沉淀于反應(yīng)孔底端中央，而不出現(xiàn)血凝現(xiàn)象?！埃北硎炯t細胞完全凝集。隨著血清被稀釋，它對病毒血凝作用的抑制減弱，反應(yīng)孔中的病毒逐漸表現(xiàn)出血凝作用，而最終使紅細胞完全凝集，沉于反應(yīng)孔底層，邊緣不整或呈鋸齒狀。“±”表示不完全抑制。紅細胞下沉情況介于“－”與“＋”之間。如果待檢抗體被標準陽性血清所中和，則確診為NDV。雞新城疫的診斷課件血凝抑制試驗（HI）孔號試劑123……9101112生理鹽水505050……50505050待檢血清505050……50504單位病毒505050……505050振蕩1min，置于室溫20min，或置37℃溫箱中5~10min。1%紅細胞505050……50505050振蕩15~30s，置37℃溫箱15~30min結(jié)果觀察（血凝抑制價）不凝凝凝不凝滑不滑不滑滑棄血凝抑制試驗（HI）孔號12HI視頻HI視頻課后作業(yè)1.寫出實習報告；2.掌握ND的臨床診斷的方法；3.掌握ND的實驗室診斷方法課后作業(yè)1.寫出實習報告；20可編輯20可編輯技能訓(xùn)練8

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雞新城疫的診斷掌握雞新城疫的臨床診斷和實驗室診斷的方法實訓(xùn)目標實訓(xùn)目標疑似雞新城疫病死雞、剪刀、鑷子、病理剖檢記錄表、工作服、膠靴、圍裙、橡膠手套和來蘇兒等。9～11日齡SPF雞胚、恒溫箱、照蛋器、蛋盤、接種箱、注射器（1～5ml）、針頭、中號鑷子、剪刀、眼科剪刀和鑷子、毛細吸管、橡皮乳頭、滅菌平皿、試管、吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精燈、試管架、膠布、蠟、錐子、煮沸消毒器、消毒劑（3%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸）、離心機、離心管、生理鹽水、96孔V型微量血凝集反應(yīng)板、微量吸液器、混合振蕩器；1%雞紅細胞懸液、雞新城疫弱毒疫苗、雞新城疫標準陽性血清等。儀器材料疑似雞新城疫病死雞、剪刀、鑷子、病理剖檢記錄表、工作服、膠靴方法步驟（一）ND的臨床診斷（二）ND的實驗室診斷方法步驟（一）ND的臨床診斷（一）ND的臨床診斷1．按家禽尸體剖檢程序，首先檢查雞的體表組織，然后檢查皮下組織，最后打開體腔，暴露整個胸腔和腹腔器官，檢查內(nèi)部組織器官。雞新城疫主要檢查消化道病變。2．將剖檢所見填寫于病理剖檢記錄表內(nèi)。3．根據(jù)剖檢記錄，歸納分析進行初步診斷。（一）ND的臨床診斷1．按家禽尸體剖檢程序，首先檢查雞的體（二）ND的實驗室診斷1．病毒的分離培養(yǎng)2．病毒的鑒定（二）ND的實驗室診斷1．病毒的分離培養(yǎng)1．病毒的分離培養(yǎng)（1）病料采集與處理分離病毒的材料應(yīng)來自早期病例病雞撲殺后應(yīng)用無菌操作采取脾、腦、肺、肝、腎等器官組織混合將病料制成1∶5～1∶10的乳劑，每毫升加入青霉素10000單位、鏈霉素10mg，以抑制可能污染的細菌置冰箱中作用2～4h，然后離心沉淀，取其上清液作為接種材料。在這同時，應(yīng)對接種材料作無菌檢查如有細菌生長，應(yīng)將原始材料再作除菌處理，也可改用細菌濾器過濾除菌。1．病毒的分離培養(yǎng)（1）病料采集與處理（2）雞胚接種用9～11日齡的SPF雞胚（如果沒有SPF雞胚，也可用非免疫雞胚），將上述處理過的材料，取0.1～0.2ml接種于尿囊腔內(nèi)。接種后以熔化的石蠟將卵殼上的接種孔封閉，繼續(xù)置溫箱內(nèi)。每日上下午各照蛋一次，連續(xù)觀察5d，接種24h內(nèi)死亡的雞胚，廢棄不用，于24h后死亡的雞胚，立即取出置4℃冰箱冷4h以上（氣室向上）。然后用無菌操作吸取尿囊液，并做無菌檢查，尿囊液渾濁應(yīng)廢棄。留下無菌的尿囊液置低溫冰箱保存，供作進一步鑒定。在這同時可將雞胚傾入一平皿內(nèi)，仔細觀察病變。由新城疫病毒致死的雞胚，胚體全身充血，在胚頭、胸、背、翅和趾部有小出血點，尤其以翅，趾部明顯，這在診斷上有參考價值。（2）雞胚接種2．病毒的鑒定（1）微量血凝試驗（HA）（2）微量血凝抑制試驗（HI）2．病毒的鑒定（1）微量血凝試驗（HA）（1）微量血凝試驗（HA）一方面判斷分離病毒是否具有血凝性，另一方面確定HI試驗中所用抗原的HA滴度。①用微量移液器向反應(yīng)板每個孔分別加生理鹽水50μl，共加12孔。②換一吸頭吸取50μl待檢病毒液，加于第1孔的生理鹽水中，并用移液器擠壓3～5次使病毒混和均勻，然后取50μl移入第二孔，混勻后取50μl移入第3孔，依次倍比稀釋到第11孔，第11孔中液體混勻后從中吸出50μl棄去。第12孔不加病毒抗原，作對照。③換一吸頭吸取1％紅細胞懸液依次加入1～12個孔中，每孔加50μl。④加樣完畢，將反應(yīng)板置于微型振蕩器上振蕩1min。并放室溫（18～20℃）下作用30～40min，或置37℃恒溫培養(yǎng)箱中作用15～30min取出，觀察并判定結(jié)果。（1）微量血凝試驗（HA）一方面判斷分離病毒是否具有血凝性31可編輯11可編輯⑤結(jié)果判定及記錄“＋”表示紅細胞完全凝集。紅細胞凝集后完全沉于反應(yīng)孔底層，呈顆粒狀，邊緣不整或鋸齒狀，而上層液體中無懸浮的紅細胞?！埃北硎炯t細胞未凝集。反應(yīng)孔底部的紅細胞沒有凝集成一層，而是全部沉淀成小圓點，位于小孔最底端，邊緣水平?！啊馈北硎静糠帜?。紅細胞下沉情況介于“＋”與“－”之間。新城疫病毒液能凝集雞的紅細胞，但隨著病毒液被稀釋，其凝集紅細胞的作用逐漸變?nèi)酢Ｏ♂尩揭欢ū稊?shù)時，就不能使紅細胞出現(xiàn)明顯的凝集，從而出現(xiàn)可疑或陰性結(jié)果。⑤結(jié)果判定及記錄血凝試驗（HA）孔號試劑123……9101112生理鹽水505050……50505050病毒液505050……5050501%的紅細胞505050……50505050振蕩1min，置于室溫30~40min，或置37℃溫箱15~30min結(jié)果觀察（血凝價）凝不凝不凝不滑滑滑棄血凝試驗（HA）孔號123…HA視頻HA視頻用上述分離病毒制備4單位病毒，再用標準的陽性血清進行HI試驗。①用微量移液器向1～12號孔中分別加入50μl生理鹽水。②換一吸頭取標準陽性血清50μl置于第１孔中，擠壓3～5次混勻，吸出50μl放入第二孔中，然后依次倍比稀釋至第10孔，并將第10孔的液體混勻后取50μl棄去。第11孔為病毒對照，第12孔為鹽水對照。③用微量移液器吸取稀釋好的4個血凝單位的病毒抗原，向1～11孔中分別加50μl。然后，振蕩1min，將反應(yīng)板置室溫下作用20min，或在37℃恒溫培養(yǎng)箱中作用5～10min。④取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入1％紅細胞懸液50μl，再將反應(yīng)板置于微型振蕩器上振蕩15～30s，混和均勻。⑤將反應(yīng)板置37℃溫箱中作用15～30min后取出，觀察并記錄結(jié)果。（2）微量血凝抑制試驗（HI）用上述分離病毒制備4單位病毒，再用標準的陽性血清進行HI試驗⑥結(jié)果判斷和記錄“－”表示紅細胞凝集抑制。高濃度的新城