生化-第01章蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能

蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能第一章Structure

andFunction

ofProtein教學(xué)目的在學(xué)習(xí)生物化學(xué)的研究內(nèi)容、了解生物化學(xué)發(fā)展史的基礎(chǔ)上，使學(xué)生理解生物化學(xué)與衛(wèi)生相關(guān)學(xué)科的關(guān)系。在掌握蛋白質(zhì)分子組成和分子結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，學(xué)習(xí)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)。教學(xué)要求掌握蛋白質(zhì)的分子組成及其重要的理化性質(zhì)。熟悉氨基酸的分類及其兩性解離的性質(zhì)；α-螺旋的特點(diǎn)、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲。了解生物化學(xué)的定義、生物化學(xué)的研究對(duì)象。衛(wèi)生相關(guān)學(xué)科的關(guān)系，了解生了解生物化學(xué)與物化學(xué)的發(fā)展史。了解蛋白質(zhì)在生命活動(dòng)過程中的重要性，蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。教學(xué)內(nèi)容生物化學(xué)的定義，生物化學(xué)的發(fā)展簡史。生物化學(xué)研究的主要內(nèi)容，生物化學(xué)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系。蛋白質(zhì)在生命活動(dòng)過程中的重要性。蛋白質(zhì)的元素組成。蛋白質(zhì)的分子組成。組成蛋白質(zhì)分子的基本單位——氨基酸，氨基酸的結(jié)構(gòu)，氨基酸的分類，氨基酸兩性解離和等電點(diǎn)及其它理化性質(zhì)。教學(xué)內(nèi)容6．蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)肽鍵、肽鍵平面。谷胱甘肽及活性多肽。蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要形式α-螺旋及特點(diǎn)、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲，超二級(jí)結(jié)構(gòu)——模序，結(jié)構(gòu)域，蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)，維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的次級(jí)鍵。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，肌紅蛋白和血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)，別構(gòu)效應(yīng)。蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)蛋白質(zhì)的兩性電離性質(zhì)和等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)，蛋白質(zhì)的變性作用。蛋白質(zhì)的沉淀作用及常用的沉淀劑。蛋白質(zhì)常見的呈色反應(yīng)。9．蛋白質(zhì)的分類，蛋白質(zhì)的分離、純化，多肽鏈中氨基酸序列分析及蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的測定（

）。一、蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)(protein)是由許多氨基酸(aminoacids)通過肽鍵(peptidebond)相連形成的高分子含氮化合物。二、蛋白質(zhì)的生物學(xué)重要性1.蛋白質(zhì)是生物體重要組成成分分布廣：所有、組織都含有蛋白質(zhì)；細(xì)胞的各個(gè)部分都含有蛋白質(zhì)。含量高：蛋白質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)最豐富的有機(jī)分子，占干重的45％，某些組織含量更高，例如脾、肺及橫紋肌等高達(dá)80％。作為生物催化劑（酶）代謝調(diào)節(jié)作用免疫保護(hù)作用物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和運(yùn)動(dòng)與支持作用參與細(xì)胞間信息傳遞3.氧化供能2.蛋白質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能蛋白質(zhì)的分子組成The

Molecular

Component

of

Protein第一節(jié)組成蛋白質(zhì)的元素主要有C、H、O、N和S。有些蛋白質(zhì)含有少量磷或金屬元素鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬，個(gè)別蛋白質(zhì)還含有碘。蛋白質(zhì)元素組成的特點(diǎn)各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為16％。由于體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主，因此，只要測定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質(zhì)的大致含量：100克樣品中蛋白質(zhì)的含量(g

%)=

每克樣品含氮克數(shù)×6.25×1001/16%一、氨基酸——組成蛋白質(zhì)的基本單位存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成

蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種，且均屬L-氨基酸（甘氨酸除外）。CHRH3丙甘氨氨酸酸L-氨基酸的通式C+NH3COO-H非極性疏水性氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸*

20種氨基酸的英文名稱、縮寫符號(hào)及分類如下:二、氨基酸的分類甘氨酸

glycineGly

G5.97丙氨酸

alanine

Ala

A6.00纈氨酸

valine

Val

V5.96亮氨酸

leucine

Leu

L

5.98異亮氨酸

isoleucine

Ile

I

6.02苯丙氨酸

phenylalanine

Phe

F

5.48脯氨酸

proline

Pro

P

6.301.

非極性疏水性氨基酸色氨酸

tryptophanTry

W5.89絲氨酸

serineSer

S5.68酪氨酸

tyrosine

Try

Y5.66半胱氨酸

cysteine

Cys

C

5.07蛋氨酸

methionine

Met

M

5.74天冬酰胺

asparagine

Asn

N

5.41谷氨酰胺glutamine

Gln

Q5.65蘇氨酸

threonineThr

T5.602.

極性中性氨基酸天冬氨酸aspartic

acidAsp

D2.97谷氨酸

glutamic

acid

Glu

E3.22賴氨酸lysineLys

K9.74精氨酸

arginineArg

R10.76組氨酸

histidineHis

H7.593.酸性氨基酸4.

堿性氨基酸幾種特殊氨基酸脯氨酸（亞氨基酸）CH2CHCOO-CH2NH2+CH2-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3半胱氨酸胱氨酸二硫鍵-HH-OOC-CH-CH2-SH+NH3+

HS-CH2-CH-COO-+NH3三、氨基酸的理化性質(zhì)1.兩性解離及等電點(diǎn)氨基酸是兩性電解質(zhì)，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。等電點(diǎn)(isoelectric

point,pI)在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時(shí)溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點(diǎn)。pH=pI氨基酸的兼性離子pH>pI+H++H+pH<pI陽離子陰離子R

CH

COOHNH2NH3+R

CH

COO-

+OH-R CH

COO-NH2R

CH COOH

+OH-NH3+2.紫外吸收色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在280

nm附近。大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質(zhì)溶液

280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的快速簡便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收3.茚三酮反應(yīng)氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成藍(lán)紫色化合物，其最大吸收峰在570nm處。由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關(guān)系，因此可作為氨基酸定量分析方法。四、肽（一）肽(peptide)*肽鍵(peptidebond)是由一個(gè)氨基酸的-羧基與另一個(gè)氨基酸的-氨基脫水縮合而形成的化學(xué)鍵。ONH2-CH-CH

OH甘氨酸OHONH-CH-CH

H甘氨酸+-HOHNH2-CH-C-N-CH-COH

H

H

OH甘氨酰甘氨酸肽鍵O*肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽……由十個(gè)以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。肽鏈中的氨基酸分子因?yàn)槊撍s合而基團(tuán)不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。氨基的一端N

末端：多肽鏈中有C

末端：多肽鏈中有羧基的一端多肽鏈有兩端*

多肽鏈(polypeptide

chain)是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結(jié)構(gòu)。N末端C末端牛核糖核酸酶（二）幾種生物活性肽1.谷胱甘肽(glutathione,

GSH)2GSHGSH過氧化物酶H2O22H2OGSSGGSH還原酶NADPH+H+NADP+體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽2.多肽類激素及神經(jīng)肽蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)The

Molecular

Structure

of

Protein第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括一級(jí)結(jié)構(gòu)(primary

structure)二級(jí)結(jié)構(gòu)(secondary

structure)三級(jí)結(jié)構(gòu)(tertiary

structure)四級(jí)結(jié)構(gòu)(quaternary

structure)高級(jí)結(jié)構(gòu)一、蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)定義蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指多肽鏈中氨基酸的排列順序。主要的化學(xué)鍵肽鍵，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。二、蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)定義蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對(duì)空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象 。主要的化學(xué)鍵：氫鍵（一）肽單元參與肽鍵的6個(gè)原子C1

、

C、O、N、H、C2位于同一平面，C1

和C2

在平面上所處的位置為反式(trans)構(gòu)型，此同一平面上的6個(gè)原子構(gòu)成了所謂的肽單元(peptide

unit)

。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要形式-螺旋(

-helix)-折疊(-pleated

sheet)-轉(zhuǎn)角(-turn)無規(guī)卷曲(random

coil)（二）

-螺旋（三）-折疊（四）-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲-轉(zhuǎn)角無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結(jié)構(gòu)。（五）模體在許多蛋白質(zhì)分子中，可發(fā)現(xiàn)二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個(gè)特殊的空間構(gòu)象，被稱為模體(motif)。鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體鋅指結(jié)構(gòu)（六）氨基酸殘基的側(cè)鏈對(duì)二級(jí)結(jié)構(gòu)形成的影響蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)是以一級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適合形成-螺旋或β-折疊，它就會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。三、蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)（一）定義整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對(duì)空間位置。即肽鏈中所有原子在三

的排布位置。主要的化學(xué)鍵疏水鍵、離子鍵、氫鍵和Van

der

Waals力等。肌紅蛋白(Mb)N

端C端纖連蛋白分子的結(jié)構(gòu)域（二）結(jié)構(gòu)域大分子蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)?？煞指畛梢粋€(gè)或數(shù)個(gè)球狀或纖維狀的區(qū)域，折疊得較為緊密，各行使其功能，稱為結(jié)構(gòu)域( )

。NSH3SH2蛋白激酶C可被磷酸化酪氨酸殘基細(xì)胞癌

src的表達(dá)產(chǎn)物Src結(jié)構(gòu)展開圖此蛋白是典型的非受體型酪氨酸蛋白激酶，含三個(gè)結(jié)構(gòu)域：SH2、SH3和蛋白激酶。其C端含一個(gè)可被磷酸化的酪氨酸殘基。SH2和SH3可分別識(shí)別蛋白質(zhì)的相關(guān)結(jié)構(gòu)，并與之相結(jié)合。蛋白激酶結(jié)構(gòu)域具有蛋白激酶活性（見第十九章

細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)）。（三）分子伴侶分子伴侶(chaperon)通過提供一個(gè)保護(hù)環(huán)境從而加速蛋白質(zhì)折疊成天然構(gòu)象或形成四級(jí)結(jié)構(gòu)。分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結(jié)合隨后松開，如此重復(fù)進(jìn)行可防止錯(cuò)誤的發(fā)生，使肽鏈正確折疊。分子伴侶也可與錯(cuò)誤的肽段結(jié)合，使之解聚后，再誘導(dǎo)其正確折疊。分子伴侶在蛋白質(zhì)分子折疊過程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級(jí)結(jié)構(gòu)，稱為蛋白質(zhì)的亞基(subunit)。蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。亞基之間的結(jié)合要是氫鍵和離子鍵，疏水作用。四、蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)血紅蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu)五、蛋白質(zhì)的分類根據(jù)蛋白質(zhì)組成成分單純蛋白質(zhì)結(jié)合蛋白質(zhì)=蛋白質(zhì)部分+非蛋白質(zhì)部分根據(jù)蛋白質(zhì)形狀纖維狀蛋白質(zhì)球狀蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系The

Relation

of

Structure

and

Functionof

Protein第三節(jié)（一）一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ)一、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系牛核糖核酸酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)二硫鍵天然狀態(tài)，有催化活性尿素、

β-巰基乙醇去除尿素、

β-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性（二）一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系例：鐮刀形紅細(xì)胞貧血HbA

β

肽鏈N-val

·his

·leu

·thr

·pro

·

glu

·glu

·····C(146)HbS

β

肽鏈N-val

·his

·leu

·thr

·pro

·

val·glu

·····C(146)這種由蛋白質(zhì)分子發(fā)生變異所導(dǎo)致的疾病，稱為“分子病”。一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。（一）肌紅蛋白與血紅蛋白的結(jié)構(gòu)二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合，Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分?jǐn)?shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白的構(gòu)象變化與結(jié)合氧肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線*

協(xié)同效應(yīng)(cooperativity)一個(gè)寡聚體蛋白質(zhì)的一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個(gè)亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應(yīng)。如果是促進(jìn)作用則稱為正協(xié)同效應(yīng)(positive

cooperativity)如果是抑制作用則稱為負(fù)協(xié)同效應(yīng)(negative

cooperativity)變構(gòu)效應(yīng)(allosteric

effect)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱為變構(gòu)效應(yīng)。蛋白質(zhì)空間構(gòu)象改變可引起疾病阿爾茨海默?。ˋlzeimer，s

disease）帕金森?。≒arkinson，s

disease）瘋牛病第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與分離純化The

Physical

and

Chemical

Charactersand

Separation

and

Purification

ofProtein（一）蛋白質(zhì)的兩性電離蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。*

蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(isoelectric

point,pI)當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。一、理化性質(zhì)（二）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自1

萬至100

萬之巨，其分子的直徑可達(dá)1

～100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。*蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素顆粒表面電荷水化膜++++++

+帶正電荷的蛋白質(zhì)———－－———帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)水化膜+

+++

+

+++帶正電荷的蛋白質(zhì)—－

－——－－

－帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質(zhì)的聚沉（三）蛋白質(zhì)的變性、沉淀和凝固*

蛋白質(zhì)的變性(denaturation)在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。變性的本質(zhì)——

破壞非共價(jià)鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。造成變性的因素如加熱、乙醇等 、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑等

。應(yīng)用舉例臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來

及滅菌。此外,

防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如 等）的必要條件。若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性(renaturation)。天然狀態(tài)，有催化活性尿素、

β-巰基乙醇去除尿素、

β-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性蛋白質(zhì)沉淀蛋白質(zhì)從溶液中析出現(xiàn)象。1、鹽析：硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。2、 沉淀蛋白質(zhì)：乙醇、

等3、重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)：Pb2+、Hg2+、Ag+4、生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)：鞣酸、、鎢酸、三氯醋酸（四）蛋白質(zhì)的紫外吸收由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收峰。蛋白質(zhì)的OD280與其濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)定量測定。（五）蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)⒈茚三酮反應(yīng)(ninhydrin

reaction)蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。⒉雙縮脲反應(yīng)(biuret

reaction)蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。二、蛋白質(zhì)的分離和純化蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)與常用的純化方法蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)

常用的純化方法分子質(zhì)量

離心凝膠過濾

透析、超濾電荷離子交換層析電泳等電聚焦溶解度調(diào)整pH調(diào)整離子強(qiáng)度降低介電常數(shù)特異結(jié)合部位親和層析親和洗脫其他性質(zhì)吸附層析液相層析氣相層析二、蛋白質(zhì)的提取與純化原理（一）改變蛋白質(zhì)的溶解度鹽析：高濃度中性鹽使蛋白質(zhì)從溶液中析出沉淀：降低溶液的介電常數(shù)，使蛋白質(zhì)分子間相互吸引而沉淀（二）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的分離方法離心(centrifugation)：利用機(jī)械的快速旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，將不同密度的物質(zhì)進(jìn)行分離根據(jù)轉(zhuǎn)速分類：常用離心機(jī)<10

000rpm高速離心機(jī)20

000~25

000

rpm超速離心機(jī)>50000

rpm相對(duì)離心力（×g）=1.119×10–5

×（rpm）2×r

[g:gravity,rpm:

revolution

per

minut,r:離心半徑]根據(jù)應(yīng)用分類：分析型離心機(jī)型離心機(jī)透析(dialysis):磁力攪拌器透析前透析后透析袋通過透析，小分子通透透析袋，散布于透析液中，大分子量的蛋白質(zhì)不能通透透析袋，留在透析袋內(nèi)。從而，蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)通過透析被分離除去。超濾（ultrafiltration）:磁力攪拌器待超濾的蛋白質(zhì)溶液在一定的壓力下，使蛋白質(zhì)溶液在通過一定孔徑的超濾膜時(shí)，小分子量物質(zhì)濾過，而大分子量的蛋白質(zhì)被截留，從而達(dá)到分離純化的目的。這種方法既可以純化蛋白質(zhì)，又可達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。加壓的氮?dú)獬瑸V膜凝膠過濾（gel

filtration）：凝膠過濾又稱分子篩層析，在層析柱內(nèi)填充惰性的微孔膠粒（如交聯(lián)葡聚糖），將蛋白質(zhì)溶液加入柱上部后，小分子物質(zhì)通過膠粒的微孔進(jìn)入膠粒，向動(dòng)的路徑加長，移動(dòng)緩慢；大分子物質(zhì)不能或很難進(jìn)入膠粒，通過膠粒間的空隙向動(dòng)，其流動(dòng)的路徑短，移動(dòng)速度較快，從而達(dá)到按不同分子量將溶液中各組分分開的目的洗脫液膠粒樣品小分子大分子蛋白濃度洗脫體積試管走行方向各試管進(jìn)行連續(xù)收集凝膠過濾分離蛋白質(zhì)示意圖凝膠過濾洗脫洗脫洗脫樣品凝膠顆粒大分子先洗脫下來小分子后洗脫下來凝膠過濾分離蛋白質(zhì)示意圖根據(jù)各種蛋白質(zhì)在一定的pH環(huán)境下所帶電荷種類與數(shù)量不同的特點(diǎn)，將不同蛋白質(zhì)予以分離。常用的方法有：離子交換層析電泳等電聚焦。（三）根據(jù)蛋白質(zhì)電荷性質(zhì)的分離方法低鹽濃度洗脫液高鹽濃度洗脫液混合蛋白質(zhì)離子交換層析柱

++

++++++++++++

++各試管進(jìn)行連續(xù)收集離子交換層析分離蛋白質(zhì)示意圖試管走行方向離子交換層析(ion

exchangechromatography