生物藥物的微生物限檢查NO

第一節(jié)生物藥物被微生物污染后引起的質(zhì)量變化藥物質(zhì)量變化原因內(nèi)因----沉淀,水解,氧化等外因----被微生物污染污染源：制藥原料,廠房設(shè)備,空氣,操作人員,包裝材料等生產(chǎn)環(huán)節(jié)第1頁(yè)/共17頁(yè)一、生物藥物染菌的范圍與原因1.范圍涉及全部劑型，各種藥物2.原因

@

微生物的特征個(gè)體小，種類(lèi)多，繁殖快

@生產(chǎn)過(guò)程和設(shè)備

“死角”

@制藥原料和藥物本身的性質(zhì)植物性原料：土壤微生物，植物病原菌，人獸糞便動(dòng)物性原料：寄生微生物，病原微生物第2頁(yè)/共17頁(yè)二生物藥物被微生物污染后引起的質(zhì)量變化藥品理化性質(zhì)改變表現(xiàn)為外觀、氣味、染色、稠度、PH、產(chǎn)生氣體等藥品含微生物毒性代謝物黃曲霉藥效的變化藥物失活第3頁(yè)/共17頁(yè)三意義保證藥品質(zhì)量檢測(cè)藥物生產(chǎn)工藝的科學(xué)性,合理性和管理水平第4頁(yè)/共17頁(yè)第二節(jié)微生物限度檢查法

微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法。檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵菌數(shù)及控制菌(致病菌)檢查。第5頁(yè)/共17頁(yè)滅菌制劑：系指采用某一物理、化學(xué)方法殺滅或除去所有活的微生物繁殖體和芽孢的一類(lèi)藥物制劑。①注射用制劑②眼用制劑③植入型制劑④創(chuàng)面用制劑⑤手術(shù)用制劑

無(wú)菌檢查第6頁(yè)/共17頁(yè)第7頁(yè)/共17頁(yè)操作環(huán)境

微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢查全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈驗(yàn)證。培養(yǎng)溫度和時(shí)間

本檢查法中細(xì)菌培養(yǎng)溫度為30~35oC；時(shí)間為48小時(shí)。霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為23~28oC；時(shí)間為72小時(shí)?？刂凭囵B(yǎng)溫度為35~37oC；時(shí)間為48小時(shí)。眼用制劑微生物限度檢查用薄膜過(guò)濾法，培養(yǎng)時(shí)間為7天。第8頁(yè)/共17頁(yè)三微生物限度檢查步驟1.供試品的制備2.限度檢查方法

①、常規(guī)法②、稀釋法③、離心沉淀集菌法④、薄膜過(guò)濾法⑤、中和法⑥、離心和培養(yǎng)基稀釋法⑦、離心和薄膜過(guò)濾法

第9頁(yè)/共17頁(yè)微生物限度檢查常用檢驗(yàn)設(shè)備及器材

恒溫培養(yǎng)箱30～35℃36±1℃霉菌培養(yǎng)箱25～28℃恒溫水浴箱45±1℃凈化工作臺(tái)生物顯微鏡1500X體視顯微鏡或放大鏡電冰箱電熱干燥箱250～300℃高壓蒸汽消毒器電子天平或藥物天平感量0.1g勻漿儀或研缽錐形瓶100ml，250ml，500ml，1000ml第10頁(yè)/共17頁(yè)直形吸管1ml，10ml量杯10ml試管18x180mm，13x200mm，30x200mm試管筒培養(yǎng)皿9cm培養(yǎng)皿筒陶瓦蓋12cm量筒100ml，500ml，1000ml濾器及微孔濾膜孔徑0.45±0.02um注射器1ml，5ml，10ml，30ml載玻片及蓋玻片接種針及接種環(huán)試管架第11頁(yè)/共17頁(yè)乙醇燈康氏振蕩器離心機(jī)500～4000／min紫外燈365nm玻璃或搪瓷消毒缸（帶蓋）大、小橡皮乳頭乙醇棉球或碘伏棉球滅菌剪刀、鑷子、鋼錐滅菌稱(chēng)樣紙滅菌不銹鋼藥匙火柴、記號(hào)筆（玻璃鉛筆）白瓷盤(pán)、洗手盆實(shí)驗(yàn)記錄紙第12頁(yè)/共17頁(yè)1、含抑菌藥物為什么會(huì)染菌？2、如何確定含抑菌成分？3、含抑菌成分供試液的制備方法有那些？第13頁(yè)/共17頁(yè)

4．含抑菌成分供試品凡含防腐劑或抑菌成分且影響檢驗(yàn)（供試品按常規(guī)檢查法，加入規(guī)定量的對(duì)照菌，不能檢出時(shí)）的供試品，可根據(jù)供試品的性質(zhì)，控制菌的特性及檢驗(yàn)條件等按以下方法之一或兩種以上方法聯(lián)合應(yīng)用處理后，依法檢查。同時(shí)做陽(yáng)性和陰性對(duì)照。①稀釋法：將供試品種入較大量的培養(yǎng)基中，使該供試液稀釋至不具抑菌作用的濃度（使該供試液稀釋至陽(yáng)性對(duì)照菌能生長(zhǎng)的濃度）。此法用作控制菌檢查和限度檢查。本法適用于抑菌作用不強(qiáng)的中藥、化學(xué)藥品的檢驗(yàn)。第14頁(yè)/共17頁(yè)②離心沉淀集菌法：取規(guī)定量的供試液于無(wú)菌刻度離心管中，離心（每分鐘3000轉(zhuǎn)）30分鐘，棄去上清液，留底部集菌液約2ml，再稀釋成原規(guī)定的供試液。如有不溶性藥渣，可先離心（每分鐘500轉(zhuǎn)）5分鐘，取全部上層液，再行集菌處理。本法適用于一些抑菌作用不強(qiáng)的中、西藥品，如蜜丸、水丸、片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑及液體制劑。③薄膜過(guò)濾法：取規(guī)定量的供試液，置稀釋劑100ml中，搖勻，以無(wú)菌操作加入裝有直徑約50mm、孔徑不大于0.45um±0.02um的微孔濾膜過(guò)濾器中，減壓抽干后，用稀釋劑沖洗濾膜3次，每次50～100ml，取出濾膜備檢。沖洗時(shí)每次最好不少于100ml，可以將培養(yǎng)基加入濾器或取出濾膜，加入增菌培養(yǎng)基中，可以用加入濾器中供試品的量來(lái)控制檢驗(yàn)量，也可以把濾膜取出來(lái)剪成2～4片，使每片相當(dāng)于供試品1g或1ml，放入增菌培養(yǎng)基中，作控制菌檢驗(yàn)。第15頁(yè)/共17頁(yè)本法適用于水溶性抑菌成分的中、西藥品和滴眼劑等制劑的“滅活”處理。安放濾膜時(shí)，注意濾膜與濾器應(yīng)密合，防止濾膜破損、漏液。本法所用濾膜孔徑0.45um±0.02um。④（鈍化）中和法：凡含磺胺、汞、砷類(lèi)或防腐劑的供試品，可用相應(yīng)的試劑鈍化活性因子，中和毒性后制成供試液?；前奉?lèi)藥物中和法取規(guī)定量含磺胺類(lèi)的供試品，于100ml增菌液中加入含1％對(duì)氨基苯甲酸約1～