阿卡波糖片的含量測定方案

阿卡波糖片的含量測定方案一、設(shè)計(jì)背景隨著我國慢性病的不斷增加，糖尿病困擾著很多的人群，而在治療糖尿病的口服藥中阿卡波糖在臨床治療上的效果是非常明顯的，隨著我國慢性病的不斷增加，糖尿病困擾著很多的人群，而在治療糖尿病的口服藥中阿卡波糖、二甲雙胍等藥物在臨床治療上的效果是非常明顯的，在治療糖尿病的臨床醫(yī)學(xué)中，有人們常說的胰島素注射液，也有口服藥，在臨床上的應(yīng)用一般口服藥相比胰島素的注射液藥劑量大且效果也是非常明顯的，但是其副作業(yè)也是很大的，如果用量大或者長期使用，那么會(huì)造成腎損傷等疾病，雖然可依靠藥物質(zhì)量糖尿病，但是對(duì)于長期患有慢性病的患者還需要加強(qiáng)自身的鍛煉，同時(shí)配合健康飲食（少油、少鹽）等類型的類型的食物。本方案研究利用高效液色譜法檢測阿卡波糖的含量，充分利用先進(jìn)的儀器結(jié)合對(duì)比分析的方式對(duì)阿卡波糖原料以及阿卡波糖對(duì)照品進(jìn)行含量測定，分別記錄相關(guān)數(shù)值，分析阿卡波糖的含量。二、設(shè)計(jì)依據(jù)經(jīng)查閱“中國知網(wǎng)”相關(guān)的期刊文獻(xiàn)資料及《中國藥典》（2020年版）中的內(nèi)容得知，目前，可用于阿卡波糖含量測定方法主要有紫外-可見分光光度法和高效液色譜法等。在研究中發(fā)現(xiàn)，紫外-可見分光光度法專屬性較差，測量結(jié)果不夠準(zhǔn)確。而高效液相色譜法具有操作簡單、分離效果好、檢測快速、分析精密度高、結(jié)果準(zhǔn)確度好等優(yōu)點(diǎn)，適合測定制劑中的有效成分的含量，資料中有關(guān)采用高效液相色譜法測定制劑中主要成分含量的文獻(xiàn)較多。以患者安全為基礎(chǔ)，對(duì)其藥品質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格把控，其相關(guān)企業(yè)對(duì)其生產(chǎn)產(chǎn)品場地及生產(chǎn)過程進(jìn)行嚴(yán)格考察，同時(shí)，對(duì)其藥品進(jìn)行嚴(yán)格把控。本方案以《中國藥典》（2020版）四部通則檢驗(yàn)為依據(jù)，結(jié)合實(shí)際情況，對(duì)阿卡波糖片質(zhì)量檢驗(yàn)方案進(jìn)行設(shè)計(jì)，其相關(guān)設(shè)計(jì)因素包含：檢查、外觀性狀、含量測定、鑒別等項(xiàng)目因素。三、方案設(shè)計(jì)（一）儀器與試劑1. 儀器（1）Agilent1260液相系統(tǒng):G1311F四元梯度泵，G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器，生產(chǎn)廠家為杭州塞西科技有限公司，產(chǎn)自杭州瑞析科技有限公司G1316B柱溫箱，美國G4212BDAD二極管陣列檢測器；（2）德國賽多利斯BSA5201電子天平；（3）上海珂淮儀器公司KQ-800KDB型超聲儀；（4）上海鰲珍儀器公司DHG-9140A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；（5）虔鈞科技儀器有限公司RGX300EF微電腦人工氣候箱；（6）Millipore超純水處理系統(tǒng)。2. 試劑（1）辛烷磺酸鈉、磷酸二氫銨、氫氧化鈉為分析純、鹽酸、30%過氧化氫；（2）磷酸為色譜純、乙腈;（3）阿卡波糖對(duì)照品(批號(hào)AZW3M-HE，純度98.0%，東京化成工業(yè)株式會(huì)社)。（4）阿卡波糖片(規(guī)格:含阿卡波糖均為每片50mg，批號(hào):BXG1251，德國BayerHealthCareAG公司;批號(hào):BXGN242，德國BayerScheringPharma公司;批號(hào):BXGXG71，德國BayerPharmaAG公司;批號(hào):BXH-GKU1，BayerVitalGmbH公司)。（二）測定方法1.色譜條件（1）色譜柱:AlltimaC18色譜柱()；（2）流動(dòng)相:乙腈-10mmol·L－1磷酸二氫銨溶液(含0.04%辛烷磺酸鈉，磷酸調(diào)至3.3)(15：85)；（3）流速:；（4）檢測波長:200nm；（5）柱溫:30℃；（6）進(jìn)樣體積:。2.對(duì)照品溶液制備將對(duì)照品阿卡波糖以精密器具稱取約500mg，放置在200mL量瓶內(nèi)，加入適量水，利用超聲器具進(jìn)行溶解，并且以水進(jìn)行稀釋至刻度同時(shí)搖勻，完成配置對(duì)照品儲(chǔ)備液。使量取器具對(duì)對(duì)照品儲(chǔ)備液進(jìn)行量取，其用水進(jìn)行稀釋，稀釋濃度分別約為0.25、0.40、0.50、0.60、0.75。對(duì)照品溶液中間濃度作為工作液，其標(biāo)準(zhǔn)以濃度與對(duì)照品比例平衡，結(jié)合方法系統(tǒng)適應(yīng)性研究。以微孔過濾膜過濾后再將對(duì)照品進(jìn)行進(jìn)樣。3.供試品溶液制備將阿卡波糖片取20片后，進(jìn)行精密稱重，研磨成細(xì)末，再利用相應(yīng)器具對(duì)其藥品細(xì)末取試驗(yàn)用量，其用量約阿卡波糖50mg，將其放置容量為100mL量瓶內(nèi)，加入適量水，振蕩1min，超聲(800w，40kHz)15min,以水進(jìn)行稀釋至刻度同時(shí)搖勻，經(jīng)微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。4.陰性溶液制備根據(jù)阿卡波糖片其說明書中顯示配方，其藥品成分中并不包含阿卡波糖陰性其對(duì)照粉末。以相應(yīng)器具稱取適量陰性對(duì)照粉末，按照“3”中方法進(jìn)行操作，并且，制備其陰性溶液。5.方法學(xué)考察（1）專屬性試驗(yàn)A.基質(zhì)干擾試驗(yàn)將混合對(duì)照品溶液、陰性溶液及供試品溶液單獨(dú)進(jìn)行分析，對(duì)其樣品中輔料與其他成分進(jìn)行考察，主要考察目的為是否對(duì)其測成分色譜峰具有影響。B.強(qiáng)制降解試驗(yàn)為確保試驗(yàn)準(zhǔn)確度與專屬性，試驗(yàn)分別在氧化、加熱、光照、堿化與酸化等相關(guān)條件下對(duì)其試驗(yàn)粉末進(jìn)行強(qiáng)制降解試驗(yàn)，對(duì)其降解產(chǎn)物進(jìn)行分析，考察其是否具備影響因素。樣品制備:將其阿卡波糖片借助器具進(jìn)行精密稱重，分成5份，每份重量約等于阿卡波糖50mg，每份約0.14g，將其放置容量為100mL量瓶內(nèi)，加入適量水。熱降解產(chǎn)物的考察:將樣品在其105℃烘箱內(nèi)加熱6h，冷卻至常溫后，按照“3”項(xiàng)中方法制備其供試品溶液，以備用。光降解產(chǎn)物的考察:將樣品置于微電腦人工氣候箱中，10000lux光照強(qiáng)度下進(jìn)行照射，其照射時(shí)間為6h,照射后，同“3”項(xiàng)中方法對(duì)其供試品溶液進(jìn)行制備，以備用。氧化產(chǎn)物的考察:將2ml過氧化氫溶液分別加入至樣品中，其濃度為30%，靜置6h后，同“3”項(xiàng)中方法進(jìn)行操作，制備其供試品溶液，以備用。酸降解產(chǎn)物的考察:將2mL鹽酸溶液放入樣品中，靜置6h后，以氫氧化鈉溶液中和成中性，同“3”項(xiàng)中方法進(jìn)行操作，制備其供試品溶液。堿降解產(chǎn)物的考察:將2ml氫氧化鈉溶液放入樣品中，靜置6h后，以鹽酸溶液中和成中性，同“3”項(xiàng)中方法進(jìn)行操作，制備其供試品溶液。將各條件降解供試品按“1”項(xiàng)中色譜條件進(jìn)行操作，均應(yīng)符合規(guī)定。（2）系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)、線性關(guān)系考察、檢測限及定量限取標(biāo)準(zhǔn)工作液連續(xù)進(jìn)樣6次，對(duì)其阿卡波糖色譜峰其對(duì)稱因子與平均理論塔板數(shù)進(jìn)行考察。將“2”項(xiàng)中各濃度對(duì)照品溶液10μL分別注入液相色譜儀，按“1”項(xiàng)中色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程要求r不低于0.999。將對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋后，進(jìn)樣測定；以信噪比(S/N)約為3.0時(shí)其濃度為檢測限，S/N約為10.0時(shí)其濃度為定量限，均應(yīng)符合規(guī)定。（3）精密度試驗(yàn)將供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣，進(jìn)樣次數(shù)為6次，計(jì)算得到阿卡波糖色譜峰峰面積，其RSD不高于2.0%，表明儀器其精密度良好。（4）重復(fù)性試驗(yàn)將同一批樣品進(jìn)行精密稱取，份數(shù)為6份，按“3”項(xiàng)中方法對(duì)其供試品溶液進(jìn)行配置后，分別進(jìn)樣測定，RSD不超過2.0%，表明方法其重復(fù)性良好。（5）回收率試驗(yàn)取空白基質(zhì)約0.14g，精密稱定，再分別精密加入“2”項(xiàng)中對(duì)照品儲(chǔ)備液16、20、24mL，按“3”項(xiàng)中方法進(jìn)行操作，并制備其各回收率溶液，進(jìn)行進(jìn)樣測定。其每個(gè)濃度制備為3份，共計(jì)9份樣品。以實(shí)際測得量和理論加入量比值作為回收率，計(jì)算回收率，其RSD不超過2.0%，表明方法回收率良好。（6）穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品溶液分別于配制后的0，2，4，8，12，24h進(jìn)行進(jìn)樣分析，計(jì)算得出24h內(nèi)阿卡波糖色譜峰峰面積，其RSD值不高于1.5%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。6.樣品測定對(duì)批號(hào)BXHGKU1，BXG1251，BXGXG71與BXGN242及阿卡波糖片利用建立方法將其含量測定，測定樣品份數(shù)為2份，獲取其平均值。四、設(shè)計(jì)檢測波長選擇、試劑屬性、提取溶劑輔助液及方法學(xué)驗(yàn)證為本方案中重要因素。因檢測波長直接影響其試驗(yàn)流動(dòng)相要求，所以，在檢測波長選擇中將200nm作為檢測波長，其主要目的是為保障阿卡波糖得出最大響應(yīng)值，并且降低干擾。在測定其吸光度中，主要以流動(dòng)相置1cm石英吸收至池中，并在空白路中不放置任何物質(zhì)情況下進(jìn)行測定。結(jié)合流動(dòng)相范圍200-400nm波長內(nèi)掃描，并在200nm范圍內(nèi)測定其吸光度，結(jié)果得出，其流動(dòng)相吸光度為0.1486，范圍在220-240nm時(shí)，其吸光度小于0.080，范圍在241-250nm時(shí)，其吸光度小于0.054，范圍為251-300nm時(shí)，其吸光度小于0.049，范圍為300-400nm時(shí)，其吸光度小于0.041，其要求均符合其HPLC檢測中紫外檢測器對(duì)流動(dòng)相標(biāo)準(zhǔn)；為保障其測定結(jié)果準(zhǔn)確性及專屬性，對(duì)其試劑不同不同色譜柱進(jìn)行分別檢驗(yàn)，主要目的是為了對(duì)比其不同試劑中理論塔板數(shù)與阿卡波糖色譜峰對(duì)稱性中因素，評(píng)比其試驗(yàn)中最佳試劑；對(duì)其提取液進(jìn)行選擇，因水其自身特質(zhì)，可保證色譜峰峰型良好的基礎(chǔ)上，提取較為完全，并且其操作簡便，最終以水為提取液；本方案主要參照較為有名的國際同行ICH方法學(xué)進(jìn)行驗(yàn)證，對(duì)其強(qiáng)制降解試驗(yàn)給予系統(tǒng)化研究。在其強(qiáng)制降解試驗(yàn)中表明，其酸化、堿化、加熱情況下未見明顯色譜峰，僅在其氧化條件下發(fā)生其明顯色譜峰，但對(duì)其阿卡波糖不具備干擾條件。本方案在原有測定方法基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，其建立分析方法具有簡便、快速、專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確等優(yōu)勢。結(jié)合方法學(xué)考察，其精密度穩(wěn)定性、重復(fù)性及回收率均呈良好狀態(tài)。綜上所述，本測定方法可用于阿卡波糖片中質(zhì)量監(jiān)控及阿卡波糖準(zhǔn)確評(píng)定具有一定參考意義，并值得推廣。五、附件材料高效液相色譜儀電子分析天平六、參考文獻(xiàn)[1]蘭浩,李文斌,陳勤.阿卡波糖片聯(lián)合甘精胰島素治療糖尿病患者的臨床效果分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2019,25(14):31-34.[2]戴文鑫,梁健成.擺藥機(jī)藥盒中阿卡波糖的穩(wěn)定性分析[J].中國藥物經(jīng)濟(jì)學(xué),2019,14(05):63-67.[3]王俊慧.甘精胰島素注射液聯(lián)合阿卡波糖片治療老年2型糖尿病的效果[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2019,26(23):31-33.[4]黃