社區(qū)獲得性肺炎不典型致病課件

社區(qū)獲得性肺炎非典型致病原

流行病學(xué)調(diào)查

解放軍總醫(yī)院

王睿

對(duì)于社區(qū)獲得性肺炎的致病原的研究是一個(gè)全世界比較關(guān)注的問(wèn)題。近年來(lái)，隨著對(duì)非典型致病原（肺炎支原體、肺炎衣原體、嗜肺軍團(tuán)菌）分離鑒定水平的提高，其在下呼吸道感染中的地位逐漸被人們所認(rèn)識(shí)。我國(guó)關(guān)于非典型致病原所致社區(qū)獲得性肺炎的研究很少，為了解非典型致病原感染現(xiàn)狀，我們參加了亞洲地區(qū)多中心社區(qū)獲得性肺炎流行病學(xué)調(diào)查。

資料和方法

病例入選標(biāo)準(zhǔn)

住院或門診病人，年齡大于18歲；X線胸片有新的浸潤(rùn)或?qū)嵶?，并且不能用其他原因解釋；病人同時(shí)必須有下列癥狀或體征至少3項(xiàng)：

（1）咳嗽、咳嗽加重或無(wú)痰干咳；

（2）痰性質(zhì)的突然改變；

（3）體溫>38℃或<36.1℃或在近24小時(shí)內(nèi)有明確的發(fā)熱

或體溫過(guò)低；

（4）肺部聽診有羅音或其他肺實(shí)變證據(jù)；

（5）白細(xì)胞增加；

（6）全身不適、肌肉痛或胃腸道癥狀

臨床資料

病例收集：

收集2001年11月至2002年3月解放軍總醫(yī)院、北京大學(xué)第三醫(yī)院、北京友誼醫(yī)院、海軍總醫(yī)院社區(qū)獲得性肺炎患者共52例。

年齡1886歲，平均年齡43.7521.5歲

男性29例，女性23例。

標(biāo)本采集：

取患者急性期及恢復(fù)期靜脈血標(biāo)本、

急性期尿標(biāo)本、

痰標(biāo)本（無(wú)痰者留取咽拭子），共有痰標(biāo)本49個(gè)，咽拭子標(biāo)本3個(gè)。

標(biāo)本采集方法與處理

1血清學(xué)標(biāo)本：

抽取靜脈血按常規(guī)方法分離血清，間隔2-4周再采血一次，與第一次標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。

2PCR標(biāo)本：

取患者痰標(biāo)本200l加入含1ml10:1TE緩沖液（pH8.0）的小離心管中；咽拭子標(biāo)本用1.0ml上述緩沖液浸泡棉簽，經(jīng)反復(fù)擠壓后棄掉棉簽。二者皆震蕩30秒后，-20℃保存至DNA提取。

3尿液標(biāo)本：

尿液用無(wú)菌容器留取，取1.5ml-20℃保存。

檢測(cè)方法

1血清學(xué)方法

肺炎支原體：應(yīng)用日本Fujirebio公司生產(chǎn)的SerodiaMycoⅡ診斷試劑盒檢測(cè)血清抗體。

陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)病期的變化，間隔2-4周采集的2次標(biāo)本的血清抗體滴度呈現(xiàn)4倍或4倍以上升高或減低，或抗體滴度持續(xù)1:160。

嗜肺軍團(tuán)菌：應(yīng)用美國(guó)MarDx公司生產(chǎn)的軍團(tuán)菌間接熒光抗體（IFA）試劑盒檢測(cè)血清IgG抗體。

陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：間隔2-4周采集的2次標(biāo)本的血清IgG抗體滴度呈現(xiàn)4倍或4倍以上升高或減低，判斷為陽(yáng)性。

肺炎衣原體：應(yīng)用美國(guó)Focus公司生產(chǎn)的衣原體微量免疫熒光（MIF）試劑盒檢測(cè)血清IgG、IgA抗體。

陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)病期的變化，間隔2-4周采集的2次標(biāo)本的血清IgG或IgA抗體滴度呈現(xiàn)4倍或4倍以上升高或減低，或IgG抗體滴度持續(xù)1：512。

DNA模板的制備以及PCR擴(kuò)增

取200l上述標(biāo)本儲(chǔ)存液，13，000rpm離心30分鐘，收集標(biāo)本，去上清后加50l裂解液55℃水浴1小時(shí)，煮沸15分鐘，放于4℃，作為DNA模板備用。若PCR擴(kuò)增中有抑制劑存在，則用酚-氯仿抽提DNA。

PCR擴(kuò)增加用UNG預(yù)處理，消除既往DNA擴(kuò)增所致污染；若應(yīng)用內(nèi)參照檢測(cè)標(biāo)本中有抑制劑存在，則應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的酚-氯仿方法抽提DNA，再次擴(kuò)增。

結(jié)果

52例患者中有24例診斷為肺炎支原體感染，陽(yáng)性率為46.2%，其中支原體血清抗體和PCR檢測(cè)皆陽(yáng)性20例，確診陽(yáng)性率為38.5%；3例患者PCR陽(yáng)性而血清抗體陰性，1例患者血清抗體陽(yáng)性而PCR陰性，可疑陽(yáng)性率為7.7%，

2例患者診斷為嗜肺軍團(tuán)菌感染，陽(yáng)性率為3.8%。3例患者診斷為肺炎衣原體感染，陽(yáng)性率為5.8%。

3例患者存在合并感染，2例為肺炎支原體合并肺炎衣原體感染，1例為肺炎支原體合并嗜肺軍團(tuán)菌感染。

表152例患者感染分布情況表感染源感染病例數(shù)感染百分率可疑為單純支原體2140.4確診為單純支原體1732.7單純衣原體11.9單純軍團(tuán)菌11.9支原體+衣原體23.8支原體+軍團(tuán)菌11.9圖152例患者感染情況圖表2：15例肺炎支原體PCR（+）,雙份血清抗體滴度呈

4倍或4倍以上升高或減低的檢測(cè)值

編號(hào)

急性期血清抗體

恢復(fù)期血清抗體1<1:401:801:6401:163840<1:401:801:801:6401:204801:51206<1:401:801:51201:8192081:3201:2560表2：15例肺炎支原體PCR（+）,雙份血清抗體滴度呈

4倍或4倍以上升高或減低的檢測(cè)值

編號(hào)

急性期血清抗體

恢復(fù)期血清抗體9<1:401:640101:3278601:40960111:401:10240121:12801:10240131:6401:2048014<1:401:256015<1:401:80

說(shuō)明：15例患者占診斷為肺炎支原體感染的62.5%，占調(diào)查總?cè)藬?shù)的19%表3.5例肺炎支原體PCR（+），雙份血清抗體滴度持續(xù)大于或等于1：160的檢測(cè)值

編號(hào)

急性期血清抗體

恢復(fù)期血清抗體

161：3201：320171：25601：2560181：6401：640191：6401：640201：25601：1280

說(shuō)明：5例患者占診斷為肺炎支原體感染的20.8%，占調(diào)查總?cè)藬?shù)的9.6%

表57例患者混合細(xì)菌感染情況

患者編號(hào)混合感染的致病原1肺炎鏈球菌+肺炎支原體+嗜肺軍團(tuán)菌2流感嗜血桿菌+肺炎支原體3肺炎鏈球菌+肺炎支原體+肺炎衣原體4流感嗜血桿菌+肺炎支原體5肺炎支原體+肺炎衣原體6肺炎鏈球菌+流感嗜血桿菌+肺炎支原體7肺炎鏈球菌+肺炎支原體圖224例支原體CAP感染患者年齡分布圖

討論

近年來(lái)非典型致病原在社區(qū)獲得性肺炎中的作用逐漸受到重視。國(guó)外報(bào)道在社區(qū)獲得性肺炎中，由非典型致病原所致者大約占340%。大多數(shù)研究顯示肺炎支原體感染在非典型致病原所致的社區(qū)獲得性肺炎中發(fā)病率為首位，在成人CAP患者中占2-30%左右；軍團(tuán)菌屬作