藥物質量控制分析方法驗證技術指導原則課件

第十四章

生物藥物質量控制分析方法驗證1

第十四章

生物藥物質量控制分析方法驗證1第十四章

生物藥物質量控制分析方法驗證一、概述二、生物學測定常用方法三、方法的來源四、分析方法五、分析方法的驗證六、綜合分析2第十四章生物藥物質量控制分析方法驗證一、概述2中國美國英國鑒別方法化學反應顯色法，紅外吸收圖譜比對法，硫酸鹽的鑒別反應化學反應顯色法硫酸鹽的鑒別反應薄層色譜法化學反應顯色法硫酸鹽特征反應檢測項目酸度，溶液澄清度與顏色，硫酸鹽，有關物質，干燥失重，可見異物，不溶性微粒，異常毒性，細菌內毒素，無菌。PH值（4,5-7.0）干燥失重溶液檢查：溶液S、溶液外觀pH溶液S的pH（4.5-7.0）甲醇（氣相色譜）含量測定照抗生素微生物檢定法（通則1201)測定。色譜法色譜法鏈霉素

3鑒別方法化學反應顯色法，紅外吸收圖譜比對法，硫酸鹽的鑒別反應一、概述保證藥品安全、有效、質量可控是藥品研發(fā)和評價應遵循的基本原則，其中，對藥品進行質量控制是保證藥品安全有效的基礎和前提。方法驗證的目的是判斷采用的分析方法是否科學、合理，是否能有效控制產品的內在質量。4一、概述保證藥品安全、有效、質量可控是藥品研發(fā)和評價應遵循的生物藥品質控生物藥品質控中采用的方法包括理化分析方法和生物學測定方法。一般要使用動物、細胞或生物分子，因此對于生物學測定的判斷標準可適當靈活掌握對于定量測定方法應盡可能減少方法的變異，驗證的結果仍應能證明該方法具有相當?shù)臏蚀_性和可靠性，并應以能夠有效控制產品質量為基本標準。5生物藥品質控生物藥品質控中采用的方法包括理化分析方法和生物學二、生物學測定常用方法

生物學測定系指采用生物學方法，以反映被測物的生物學特性為目的的測定方法。6二、生物學測定常用方法生物學測定系指

（一）、酶反應試驗是指在體外能促進酶分子的活化或本身具備酶的活性，通過底物的變化檢測酶活性。主要用于酶、輔酶、激酶、激活劑、抑制劑等的活性測定。這類方法的變異相對較小，結果比較準確。7（一）、酶反應試驗7（二）、結合試驗是基于產品與某種物質的結合特性而設計的試驗，如免疫結合試驗。目前主要用于生物制品的鑒別。由于在結合試驗中測定的分子不一定都具有生物活性，所以一般不用作制品的活性（或效力）測定。這類方法的變異也相對較小。8（二）、結合試驗8（三）、細胞測定試驗是指產品可以誘導細胞產生可測定的應答，如細胞增殖、聚集、分化、死亡、遷移或產生特定的化學物質等。細胞測定試驗一般能較好地反映制品的生物學活性，常用于各種生物制品的活性（效力）測定。與上述兩類方法相比，這類方法的變異較大。與使用傳代細胞相比，使用原代細胞的方法變異更大。9（三）、細胞測定試驗9（四）、動物試驗是指以整體動物為試驗材料檢測制品生物學活性（或效力）的試驗方法，如動物保護力試驗，一般用于疫苗的效力測定。由于動物實驗的成本高、周期長和變異大，所以一般僅用于成品檢定。對于某些治療用的制品，由于其作用機理或本身化學性質的原因，難以建立體外測活的方法，也可以采用動物試驗方法測定，但由于這類方法的變異一般相對較大，在進一步的研究中應盡可能以體外法代替。10（四）、動物試驗10

鑒于一種測定方法僅能反映制品某一方面的特性，且方法的變異一般較大，為更好控制產品質量，必要時需同時采用多種方法進行測定。11鑒于一種測定方法僅能反映制品某一方面的特性，且方法的變異一三、方法的來源（種類）

根據(jù)質控分析方法的來源，可將方法分為兩大類，即標準方法和非標準方法。原則上，對于各類方法均需進行驗證，但依方法來源的不同對于驗證的要求有所不同。12三、方法的來源（種類）根據(jù)質控分析方法的來（一）、標準方法（或正式方法、法定方法）一般是指已有國家標準的質控方法，WHO推薦的質控方法也可作為重要參考。此類方法在被確定為標準方法前已經(jīng)過了適當?shù)尿炞C。

采用此類方法前，也應對該方法進行適當?shù)尿炞C,如進行專屬性和精密度的驗證，以便證明在實際的使用條件下該方法也是適用的。13（一）、標準方法（或正式方法、法定方法）13（二）、非標準方法1、標準方法的替代方法此類方法系指由申報者提出的可取代標準方法的替代方法。申報者在決定采用此類方法時應持慎重的態(tài)度，并需提供表明新方法等同于或優(yōu)于原方法的依據(jù)以及全面的驗證資料，包括兩種方法的比較性資料。14（二）、非標準方法14

2、來自參考文獻的方法是指在專業(yè)雜志或著作上發(fā)表并介紹的方法，一般要認真對待此類方法，并需進行全面的驗證。應說明參考文獻的出處，附原文及譯文。152、來自參考文獻的方法15

3、自己建立的方法對于某些產品，尤其是創(chuàng)新性產品來講，由于缺少可參考的方法，通常需要自己建立一種新的分析方法，對于這類方法需進行全面而嚴格的驗證。163、自己建立的方法16四、分析方法生物藥品質控分析方法的準確性和可靠性與技術方法本身（包括方法的原理和方法的技術特點等）密切相關，一種系統(tǒng)的完整的分析方法應包括：17四、分析方法生物藥品質控分析方法的準確

（一）、分析方法的原理（二）、供試品應說明如何取樣，包括每次測定時取樣的數(shù)量、如何取用（單支或多支混合）等。（三）、測試用儀器及參數(shù)（四）、測試用試劑列出所有測試用的試劑和規(guī)格，并說明其來源。如果某些試劑為自制或對采購的試劑進行了加工處理，則應詳述制備或處理過程。18（一）、分析方法的原理18（五）、標準品或參考品的配備（六）、供試品的配備：（七）、測試過程按實驗步驟詳述整個實驗過程，說明關鍵步驟的實驗條件。（八）、計算盡可能以表格的形式顯示所獲取的數(shù)據(jù)，說明數(shù)據(jù)的處理方法，提供計算公式，并說明計算方法的出處及采用依據(jù)。（九）、結果報告：說明結果報告的形式（十）、判定標準：提供判定標準，說明判定標準的制定依據(jù)。19（五）、標準品或參考品的配備19五、分析方法的驗證

質控分析方法的驗證就是根據(jù)方法的需要測定該方法的專屬性、準確性、精密度、線性、范圍、檢測限度、定量限度、耐用性等幾個指標中的一個或幾個，用于不同檢測目的的試驗方法需進行不同參數(shù)的測定，下表為各種檢測方法通常需測定的參數(shù)。20五、分析方法的驗證質控分析方法的驗證就2121（一）專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能夠準確測定被分析物質的特性的能力。通常鑒別、雜質檢查、含量測定方法中均應考察其專屬性。如采用的方法不夠專屬，應采用多個方法予以補充。22（一）專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質、降解物、輔料等）可1、鑒別反應專屬性試驗要求證明能與可能共存的物質或結構相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的樣品呈正反應（可與已知對照物比較），而不含被測成分的樣品呈負反應，以及結構相似或組分中的有關化合物，也應呈負反應。231、鑒別反應專屬性試驗要求證明能與可能共存的物質或結構相似化2、雜質檢查作為純度檢查，所采用的分析方法應確?？蓹z出被分析物中雜質的含量，如有關物質、重金屬、殘留溶劑等。因此雜質檢查要求分析方法有一定的專屬性。242、雜質檢查作為純度檢查，所采用的分析方雜質可獲得:可向供試品中加入一定量的雜質，證明雜質與共存物質能得到分離和檢出，并具適當?shù)臏蚀_度與精密度。雜質或降解產物不能獲得:將供試品用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進行破壞（制劑應考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質個數(shù)和量。必要時可采用二極管陣列檢測和質譜檢測，進行色譜峰純度檢查。25雜質可獲得:253、含量測定含量測定目的是得到樣品中被分析物的含量或效價的準確結果。在雜質可獲得的情況下，對于主成分含量測定可在供試品中加入雜質或輔料，考察測定結果是否受干擾，并與未加雜質和輔料的試樣比較測定結果。263、含量測定含量測定目的是得到樣品中被分析物的含量或效價的準在雜質或降解產物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗證了的或藥典方法進行比較，比對兩種方法測定的結果。也可采用破壞性試驗（強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質或降解產物的試樣，用兩種方法進行含量測定比較測定結果。必要時進行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。27在雜質或降解產物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗證了的或藥（二）準確度準確度系指用該方法測定的結果與真實值或認可的參考值之間接近的程度。有時也稱真實度。一般以回收率（％）表示。一定的準確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項目均需要驗證準確度，如含量測定、雜質定量試驗等。28（二）準確度準確度系指用該方法測定的結果與真實值或認可的參考準確度應在規(guī)定的范圍內建立。該指標的驗證一般以回收率試驗來進行，試驗設計需考慮在規(guī)定范圍內，制備3個不同濃度的樣品，各測定3

次，即測定9

次，報告已知加入量的回收率（％）或測定結果平均值與真實值之差及其可信限。（二）準確度29準確度應在規(guī)定的范圍內建立。該指標的驗證一般以回收率試驗來進回收率回收試驗可在幾份相同試樣中加入適量待測組分的純品，以相同條件進行測定，按下式計算回收率：回收率＝添加組分試樣測定值－原試樣測定值/組分添加量×１００％回收率越高則認為方法越可靠。30回收率回收試驗可在幾份相同試樣中加入適量待測組分的純品，以

1、含量測定

原料藥可用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。

制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進行測定。（二）準確度311、含量測定（二）準確度31

2、雜質定量試驗雜質的定量試驗可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。

如果不能得到雜質或降解產物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經(jīng)過驗證的方法。當雜質的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應因子近似計算雜質含量（自身對照法）。并應明確單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（％）或是面積比（％）。

322、雜質定量試驗323333（三）精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一均質樣品，經(jīng)多次取樣進行一系列檢測所得結果之間的接近程度（離散程度）。該指標目的是考察分析方法在不同的時間、操作人員、試驗室下，所得結果的重現(xiàn)性和重復性。涉及定量測定的項目考察方法的精密度。

34（三）精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。取樣測定次數(shù)應有統(tǒng)計學意義，至少用6次結果進行評價。精密度可以從三個層次考察：重復性、中間精密度、重現(xiàn)性。（三）精密度35精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差1、重復性重復性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內，由一個分析人員測定所得結果的精密度。重復性測定可在規(guī)定范圍內，至少用9次測定結果進行評價，如制備3

個不同濃度的樣品，各測定3

次，或采用同一批樣品（把被測物濃度當作100％），用至少測定6

次的結果進行評價。361、重復性重復性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內，由2、中間精密度中間精密度系指在同一試驗室，由于試驗室內部條件改變，如時間、分析人員、儀器設備、測定結果的精密度。驗證設計方案中的變動因素一般為日期、分析人員、設備。372、中間精密度37天數(shù)操作者儀器（或色譜柱）第一天AABB第二天ABBA第三天AB(或A)BB(或A)38天數(shù)操作者儀器（或色譜柱）第一天AABB第二天ABBA第三天3、重現(xiàn)性指不同實驗室之間不同分析人員測定結果的精密度。當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現(xiàn)性試驗。393、重現(xiàn)性指不同實驗室之間不同分析人員測定結果的精密度。39（四）線性

線性系指在設計的范圍內，檢測結果與試樣中被分析物的濃度（量）直接呈線性比例關系的能力。線性是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質定量試驗和含量測定均需要驗證線性。做法:可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質濃度系列進行測定，至少制備5

個濃度。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性.40（四）線性40（五）范圍范圍系指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被分析物的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍通常用與分析方法的測試結果相同的單位（如百分濃度）表達。涉及到定量測定的檢測項目均需要對范圍進行驗證，如含量測定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質定量試驗等。41（五）范圍范圍系指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，測試方1、含量測定范圍應為測試濃度的80％～100％或更寬。2、雜質雜質測定時，范圍應根據(jù)初步實測，擬訂出規(guī)定限度的±20％。如果含量測定與雜質檢查同時測定，用面積歸一化法，則線性范圍應為雜質規(guī)定限度的-20％至含量限度（或上限）的+20％。（五）范圍421、含量測定（五）范圍42（六）檢測限檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。該驗證指標的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力。因此對雜質限度試驗，需證明方法具有足夠低的檢測限，以保證需要控制的雜質被測出。43（六）檢測限檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，1、直觀法直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。檢測限的測定是通過對一系列已知濃度被分析物的樣品進行分析，并以能準確（或被可靠）地檢測被測物的最小量或最低濃度來建立。（六）檢測限441、直觀法（六）檢測限442、信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1或2：1

時相應的濃度或注入儀器的量確定檢測限。其他方法有基于工作曲線的斜率和響應的標準偏差進行計算的方法等。（六）檢測限452、信噪比法（六）檢測限45（七）定量限

定量限系指試樣中的被分析物能夠被定量測定的最低量，其測定結果應具有一定的準確度和精密度。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10：1時相應的濃度或注入儀器的量進行確定。46（七）定量限定量限系指試樣中的被分析物能1、直觀法直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。定量限一般通過對一系列含有已知濃度被測物的樣品進行分析，在準確度和精密度都符合要求的情況下，來確定被測物能被定量的最小量。（七）定量限471、直觀法（七）定量限472、信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般可接受的信噪比是10：1。

（七）定量限482、信噪比法（七）定量限48（八）耐用性耐用性系指測定條件發(fā)生細小變動時，測定結果保持不受影響的承受程度。耐用性主要考察方法本身對于可變試驗因素的抗干擾能力。開始研究分析方法時，就應考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。49（八）耐用性耐用性系指測定條件發(fā)生細小變動時，測定結果保持不典型的變動因素包括：液相色譜法中流動相的組成和pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫、流速等。氣相色譜法中載氣及流速、不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，擔體、柱溫，進樣口和檢測器溫度等。經(jīng)試驗，應說明小的變動能否通過設計的系統(tǒng)適用性試驗，以確保方法有效。（八）耐用性50典型的變動因素包括：（八）耐用性50(九）系統(tǒng)適用性試驗對一些儀器測試方法，在進行方法驗證時，有必要將分析設備、電子儀器與實驗操作、被測試樣品等一起當作完整的系統(tǒng)進行評估。系統(tǒng)適用性是對整個系統(tǒng)進行評估的指標。51(九）系統(tǒng)適用性試驗對一些儀器測試方法，在進行方法驗證時，有六、綜合分析1、有關方法驗證評價的一般考慮總體上，方法驗證應圍繞驗證目的和一般原則來進行，方法驗證內容的選擇和試驗設計方案應合理、充分，驗證過程應規(guī)范嚴謹。并非每個分析方法都要進行所有內容的驗證。

如雜質的限度,試驗分析方法一般需要驗證專屬性和檢測限，而對于精密度、線性、定量限等涉及定量測定的項目，則一般不需要進行驗證。52六、綜合分析1、有關方法驗證評價的一般考慮522、方法驗證的整體性、系統(tǒng)性和靈活性.

方法驗證內容之間相互關聯(lián)，是一個整體。例如，對于鑒別項目所需要的專屬性，一般一種分析方法不太可能完全鑒別被分析物，此時采用兩種或兩種以上分析方法可加強鑒別項目的整體專屬性。532、方法驗證的整體性、系統(tǒng)性和靈活性.53方法驗證指標之間存在較多的關聯(lián)性，可以相互補充。如原料藥含量測定采用容量滴定法時，專屬性略差，但假如在雜質檢測時采用了專屬性較強的色譜法，則一般認為整個檢測方法也具有較強的專屬性。總之，由于實際情況較復雜，在方法驗證過程中，具體情況應具體分析，不提倡教條地去進行方法驗證。54方法驗證指標之間存在較多的關聯(lián)性，可以相555556565757585859596060

第十四章

生物藥物質量控制分析方法驗證61

第十四章

生物藥物質量控制分析方法驗證1第十四章

生物藥物質量控制分析方法驗證一、概述二、生物學測定常用方法三、方法的來源四、分析方法五、分析方法的驗證六、綜合分析62第十四章生物藥物質量控制分析方法驗證一、概述2中國美國英國鑒別方法化學反應顯色法，紅外吸收圖譜比對法，硫酸鹽的鑒別反應化學反應顯色法硫酸鹽的鑒別反應薄層色譜法化學反應顯色法硫酸鹽特征反應檢測項目酸度，溶液澄清度與顏色，硫酸鹽，有關物質，干燥失重，可見異物，不溶性微粒，異常毒性，細菌內毒素，無菌。PH值（4,5-7.0）干燥失重溶液檢查：溶液S、溶液外觀pH溶液S的pH（4.5-7.0）甲醇（氣相色譜）含量測定照抗生素微生物檢定法（通則1201)測定。色譜法色譜法鏈霉素

63鑒別方法化學反應顯色法，紅外吸收圖譜比對法，硫酸鹽的鑒別反應一、概述保證藥品安全、有效、質量可控是藥品研發(fā)和評價應遵循的基本原則，其中，對藥品進行質量控制是保證藥品安全有效的基礎和前提。方法驗證的目的是判斷采用的分析方法是否科學、合理，是否能有效控制產品的內在質量。64一、概述保證藥品安全、有效、質量可控是藥品研發(fā)和評價應遵循的生物藥品質控生物藥品質控中采用的方法包括理化分析方法和生物學測定方法。一般要使用動物、細胞或生物分子，因此對于生物學測定的判斷標準可適當靈活掌握對于定量測定方法應盡可能減少方法的變異，驗證的結果仍應能證明該方法具有相當?shù)臏蚀_性和可靠性，并應以能夠有效控制產品質量為基本標準。65生物藥品質控生物藥品質控中采用的方法包括理化分析方法和生物學二、生物學測定常用方法

生物學測定系指采用生物學方法，以反映被測物的生物學特性為目的的測定方法。66二、生物學測定常用方法生物學測定系指

（一）、酶反應試驗是指在體外能促進酶分子的活化或本身具備酶的活性，通過底物的變化檢測酶活性。主要用于酶、輔酶、激酶、激活劑、抑制劑等的活性測定。這類方法的變異相對較小，結果比較準確。67（一）、酶反應試驗7（二）、結合試驗是基于產品與某種物質的結合特性而設計的試驗，如免疫結合試驗。目前主要用于生物制品的鑒別。由于在結合試驗中測定的分子不一定都具有生物活性，所以一般不用作制品的活性（或效力）測定。這類方法的變異也相對較小。68（二）、結合試驗8（三）、細胞測定試驗是指產品可以誘導細胞產生可測定的應答，如細胞增殖、聚集、分化、死亡、遷移或產生特定的化學物質等。細胞測定試驗一般能較好地反映制品的生物學活性，常用于各種生物制品的活性（效力）測定。與上述兩類方法相比，這類方法的變異較大。與使用傳代細胞相比，使用原代細胞的方法變異更大。69（三）、細胞測定試驗9（四）、動物試驗是指以整體動物為試驗材料檢測制品生物學活性（或效力）的試驗方法，如動物保護力試驗，一般用于疫苗的效力測定。由于動物實驗的成本高、周期長和變異大，所以一般僅用于成品檢定。對于某些治療用的制品，由于其作用機理或本身化學性質的原因，難以建立體外測活的方法，也可以采用動物試驗方法測定，但由于這類方法的變異一般相對較大，在進一步的研究中應盡可能以體外法代替。70（四）、動物試驗10

鑒于一種測定方法僅能反映制品某一方面的特性，且方法的變異一般較大，為更好控制產品質量，必要時需同時采用多種方法進行測定。71鑒于一種測定方法僅能反映制品某一方面的特性，且方法的變異一三、方法的來源（種類）

根據(jù)質控分析方法的來源，可將方法分為兩大類，即標準方法和非標準方法。原則上，對于各類方法均需進行驗證，但依方法來源的不同對于驗證的要求有所不同。72三、方法的來源（種類）根據(jù)質控分析方法的來（一）、標準方法（或正式方法、法定方法）一般是指已有國家標準的質控方法，WHO推薦的質控方法也可作為重要參考。此類方法在被確定為標準方法前已經(jīng)過了適當?shù)尿炞C。

采用此類方法前，也應對該方法進行適當?shù)尿炞C,如進行專屬性和精密度的驗證，以便證明在實際的使用條件下該方法也是適用的。73（一）、標準方法（或正式方法、法定方法）13（二）、非標準方法1、標準方法的替代方法此類方法系指由申報者提出的可取代標準方法的替代方法。申報者在決定采用此類方法時應持慎重的態(tài)度，并需提供表明新方法等同于或優(yōu)于原方法的依據(jù)以及全面的驗證資料，包括兩種方法的比較性資料。74（二）、非標準方法14

2、來自參考文獻的方法是指在專業(yè)雜志或著作上發(fā)表并介紹的方法，一般要認真對待此類方法，并需進行全面的驗證。應說明參考文獻的出處，附原文及譯文。752、來自參考文獻的方法15

3、自己建立的方法對于某些產品，尤其是創(chuàng)新性產品來講，由于缺少可參考的方法，通常需要自己建立一種新的分析方法，對于這類方法需進行全面而嚴格的驗證。763、自己建立的方法16四、分析方法生物藥品質控分析方法的準確性和可靠性與技術方法本身（包括方法的原理和方法的技術特點等）密切相關，一種系統(tǒng)的完整的分析方法應包括：77四、分析方法生物藥品質控分析方法的準確

（一）、分析方法的原理（二）、供試品應說明如何取樣，包括每次測定時取樣的數(shù)量、如何取用（單支或多支混合）等。（三）、測試用儀器及參數(shù)（四）、測試用試劑列出所有測試用的試劑和規(guī)格，并說明其來源。如果某些試劑為自制或對采購的試劑進行了加工處理，則應詳述制備或處理過程。78（一）、分析方法的原理18（五）、標準品或參考品的配備（六）、供試品的配備：（七）、測試過程按實驗步驟詳述整個實驗過程，說明關鍵步驟的實驗條件。（八）、計算盡可能以表格的形式顯示所獲取的數(shù)據(jù)，說明數(shù)據(jù)的處理方法，提供計算公式，并說明計算方法的出處及采用依據(jù)。（九）、結果報告：說明結果報告的形式（十）、判定標準：提供判定標準，說明判定標準的制定依據(jù)。79（五）、標準品或參考品的配備19五、分析方法的驗證

質控分析方法的驗證就是根據(jù)方法的需要測定該方法的專屬性、準確性、精密度、線性、范圍、檢測限度、定量限度、耐用性等幾個指標中的一個或幾個，用于不同檢測目的的試驗方法需進行不同參數(shù)的測定，下表為各種檢測方法通常需測定的參數(shù)。80五、分析方法的驗證質控分析方法的驗證就8121（一）專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能夠準確測定被分析物質的特性的能力。通常鑒別、雜質檢查、含量測定方法中均應考察其專屬性。如采用的方法不夠專屬，應采用多個方法予以補充。82（一）專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質、降解物、輔料等）可1、鑒別反應專屬性試驗要求證明能與可能共存的物質或結構相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的樣品呈正反應（可與已知對照物比較），而不含被測成分的樣品呈負反應，以及結構相似或組分中的有關化合物，也應呈負反應。831、鑒別反應專屬性試驗要求證明能與可能共存的物質或結構相似化2、雜質檢查作為純度檢查，所采用的分析方法應確?？蓹z出被分析物中雜質的含量，如有關物質、重金屬、殘留溶劑等。因此雜質檢查要求分析方法有一定的專屬性。842、雜質檢查作為純度檢查，所采用的分析方雜質可獲得:可向供試品中加入一定量的雜質，證明雜質與共存物質能得到分離和檢出，并具適當?shù)臏蚀_度與精密度。雜質或降解產物不能獲得:將供試品用強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進行破壞（制劑應考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質個數(shù)和量。必要時可采用二極管陣列檢測和質譜檢測，進行色譜峰純度檢查。85雜質可獲得:253、含量測定含量測定目的是得到樣品中被分析物的含量或效價的準確結果。在雜質可獲得的情況下，對于主成分含量測定可在供試品中加入雜質或輔料，考察測定結果是否受干擾，并與未加雜質和輔料的試樣比較測定結果。863、含量測定含量測定目的是得到樣品中被分析物的含量或效價的準在雜質或降解產物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗證了的或藥典方法進行比較，比對兩種方法測定的結果。也可采用破壞性試驗（強光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質或降解產物的試樣，用兩種方法進行含量測定比較測定結果。必要時進行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。87在雜質或降解產物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗證了的或藥（二）準確度準確度系指用該方法測定的結果與真實值或認可的參考值之間接近的程度。有時也稱真實度。一般以回收率（％）表示。一定的準確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項目均需要驗證準確度，如含量測定、雜質定量試驗等。88（二）準確度準確度系指用該方法測定的結果與真實值或認可的參考準確度應在規(guī)定的范圍內建立。該指標的驗證一般以回收率試驗來進行，試驗設計需考慮在規(guī)定范圍內，制備3個不同濃度的樣品，各測定3

次，即測定9

次，報告已知加入量的回收率（％）或測定結果平均值與真實值之差及其可信限。（二）準確度89準確度應在規(guī)定的范圍內建立。該指標的驗證一般以回收率試驗來進回收率回收試驗可在幾份相同試樣中加入適量待測組分的純品，以相同條件進行測定，按下式計算回收率：回收率＝添加組分試樣測定值－原試樣測定值/組分添加量×１００％回收率越高則認為方法越可靠。90回收率回收試驗可在幾份相同試樣中加入適量待測組分的純品，以

1、含量測定

原料藥可用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。

制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進行測定。（二）準確度911、含量測定（二）準確度31

2、雜質定量試驗雜質的定量試驗可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。

如果不能得到雜質或降解產物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較，如藥典標準方法或經(jīng)過驗證的方法。當雜質的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應因子近似計算雜質含量（自身對照法）。并應明確單個雜質和雜質總量相當于主成分的重量比（％）或是面積比（％）。

922、雜質定量試驗329333（三）精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一均質樣品，經(jīng)多次取樣進行一系列檢測所得結果之間的接近程度（離散程度）。該指標目的是考察分析方法在不同的時間、操作人員、試驗室下，所得結果的重現(xiàn)性和重復性。涉及定量測定的項目考察方法的精密度。

94（三）精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。取樣測定次數(shù)應有統(tǒng)計學意義，至少用6次結果進行評價。精密度可以從三個層次考察：重復性、中間精密度、重現(xiàn)性。（三）精密度95精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差1、重復性重復性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內，由一個分析人員測定所得結果的精密度。重復性測定可在規(guī)定范圍內，至少用9次測定結果進行評價，如制備3

個不同濃度的樣品，各測定3

次，或采用同一批樣品（把被測物濃度當作100％），用至少測定6

次的結果進行評價。961、重復性重復性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內，由2、中間精密度中間精密度系指在同一試驗室，由于試驗室內部條件改變，如時間、分析人員、儀器設備、測定結果的精密度。驗證設計方案中的變動因素一般為日期、分析人員、設備。972、中間精密度37天數(shù)操作者儀器（或色譜柱）第一天AABB第二天ABBA第三天AB(或A)BB(或A)98天數(shù)操作者儀器（或色譜柱）第一天AABB第二天ABBA第三天3、重現(xiàn)性指不同實驗室之間不同分析人員測定結果的精密度。當分析方法將被法定標準采用時，應進行重現(xiàn)性試驗。993、重現(xiàn)性指不同實驗室之間不同分析人員測定結果的精密度。39（四）線性

線性系指在設計的范圍內，檢測結果與試樣中被分析物的濃度（量）直接呈線性比例關系的能力。線性是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質定量試驗和含量測定均需要驗證線性。做法:可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質濃度系列進行測定，至少制備5

個濃度。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性.100（四）線性40（五）范圍范圍系指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被分析物的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍通常用與分析方法的測試結果相同的單位（如百分濃度）表達。涉及到定量測定的檢測項目均需要對范圍進行驗證，如含量測定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質定量試驗等。101（五）范圍范圍系指能夠達到一定的準確度、精密度和線性，測試方1、含量測定范圍應為測試濃度的80％～100％或更寬。2、雜質雜質測定時，范圍應根據(jù)初步實測，擬訂出規(guī)定限度的±20％。如果含量測定與雜質檢查同時測定，用面積歸一化法，則線性范圍應為雜質規(guī)定限度的-20％至含量限度（或上限）的+20％。（五）范圍1021、含量測定（五）范圍42（六）檢測限檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。該驗證指標的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力。因此對雜質限度試驗，需證明方法具有足夠低的檢測限，以保證需要控制的雜質被測出。103（六）檢測限檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，1、直觀法直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。檢測限的測定是通過對一系列已知濃度被分析物的樣品進行分析，并以能準確（或被可靠）地檢測被測物的最小量或最低濃度來建立。（六）檢測限1041、直觀法（六）檢測限442、信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出