實(shí)驗(yàn)5培養(yǎng)基的使用特點(diǎn)和微生物接種方法

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求 （p9/32)強(qiáng)調(diào)無菌操作概念，掌握無菌操作技術(shù)掌握微生物移植、純化的基本方法了解不同微生物在同一培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征，及同一微生物在不同培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征掌握幾種常用的鑒別、選擇培養(yǎng)基的使用了解顯微測微尺的構(gòu)造；掌握應(yīng)用顯微測微尺測量微生物細(xì)胞大小的方法與技術(shù) 第一頁，共二十八頁。微生物培養(yǎng)Culture：在一定的條件下培養(yǎng)、繁殖得到的微生物群體混合培養(yǎng)物：含有多種微生物的培養(yǎng)物；純培養(yǎng)物： 只有一種微生物的培養(yǎng)物；Pure culture通常情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以重復(fù)的結(jié)果純培養(yǎng)技術(shù)是進(jìn)行微生物學(xué)研究的基礎(chǔ)！第二頁，共二十八頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)培養(yǎng)基：液體培

2、養(yǎng)基；固體培養(yǎng)基； 1.5%-2.5%半固體培養(yǎng)基； 0.2%-0.75%瓊脂第三頁，共二十八頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)菌落（colony）： 單個（或聚集在一起的一團(tuán)）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、 有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長群體眾多菌落連成一片菌苔（lawn）第四頁，共二十八頁。無菌操作：火焰附近（酒精燈、煤氣燈）進(jìn)行第五頁，共二十八頁。 不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征（形狀、顏色等），可以成為對該微生物進(jìn)行分類、鑒定的重要依據(jù)第六頁，共二十八頁。菌落的描述：形態(tài)、表面和邊緣特征第七頁，共二十八頁。第八頁，共

3、二十八頁。同一細(xì)菌在不同的培養(yǎng)平板上形成不同的特征菌落第九頁，共二十八頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)使微生物在固體培養(yǎng)基平板上形成單個菌落的基本方法：1、稀釋倒平板法2、涂布平板法3、平板劃線法4、厭氧微生物的分離第十頁，共二十八頁。第十一頁，共二十八頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)1、稀釋倒平板法2、涂布平板法操作較麻煩，對好氧菌、熱敏感菌效果不好！使用較多的常規(guī)方法，但有時涂布不均勻！第十二頁，共二十八頁。利用L棒進(jìn)行涂布第十三頁，共二十八頁。3、平板劃線法第十四頁，共二十八頁。3、平板劃線法第十五頁，共二十八頁。一、用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)4、厭氧微生物的分離厭氧罐厭氧手套箱第十六頁，共二十

4、八頁。二、選擇培養(yǎng)分離 抑制大多數(shù)其它微生物的生長； 使待分離的微生物生長更快；對微生物群落中數(shù)量占少數(shù)的微生物的分離純化沒有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足自然界中一切生物 生長的要求，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的。第十七頁，共二十八頁。三、選擇培養(yǎng)分離1. 利用選擇平板進(jìn)行直接分離待分離的微生物生長，其它微生物的生長被抑制 高溫下培養(yǎng)：分離嗜熱細(xì)菌； 培養(yǎng)基中不含N：分離固氮菌； 培養(yǎng)基加抗生素：分離抗性菌；第十八頁，共二十八頁。1. 利用選擇平板進(jìn)行直接分離 顏色反應(yīng)：分離特定的菌株； 牛奶平板：分離蛋白酶產(chǎn)生菌；待分離的微生物的生長特征明顯不同于其它微生物第十九頁，共二十八頁。

5、2. 富集培養(yǎng)富集培養(yǎng)是微生物學(xué)家最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一。營養(yǎng)和生理?xiàng)l件的幾乎無窮盡的組合形式可應(yīng)用于從自然界選擇出特定微生物的需要。第二十頁，共二十八頁。組成成分：乳糖、膽鹽、檸檬酸鐵、檸檬酸納、煌綠、中性紅、硫代硫酸鈉等，強(qiáng)選擇性抑制大腸桿菌，分離沙門菌煌綠、膽鹽、檸檬酸納抑制非腸道菌大腸桿菌分解乳糖而產(chǎn)酸，使膽鹽析出，菌落中心渾濁呈深紅色，檸檬酸鐵可使產(chǎn)生硫化氫的菌落呈黑色硫代硫酸鈉緩和膽鹽對沙門氏菌的有害作用，中和煌綠、中性紅的毒性，使大腸桿菌的紅色菌落更加鮮艷S.S瓊脂（沙門氏菌、志賀氏菌分離用培養(yǎng)基）常用的選擇培養(yǎng)基第二十一頁，共二十八頁。麥康凱培養(yǎng)基乳糖、膽鹽，弱選擇性，中性紅,

6、分離腸道致病菌中性紅指示劑pH感應(yīng)范圍6.8（紅色）到8.0（黃色）分解乳糖產(chǎn)酸，菌落顏色呈紅色沙門氏菌、志賀氏菌不分解乳糖，菌落顏色與培養(yǎng)基相同膽鹽有助于沙門氏菌的生長，抑制其他細(xì)菌常用的選擇培養(yǎng)基第二十二頁，共二十八頁。常用的選擇培養(yǎng)基沙門菌常用的培養(yǎng)基：亞硫酸鉍瓊脂平板(BS):含有煌綠、檸檬酸鉍銨、亞硫酸鈉、硫酸亞鐵，具有強(qiáng)選擇性，分離沙門氏菌HE（Heetoen)：檸檬酸鐵銨、去氧膽酸鹽、硫代硫酸鈉、麝香草酚藍(lán)和復(fù)紅，分離腸道致病菌第二十三頁，共二十八頁。三糖鐵瓊脂或克氏雙糖鐵三糖鐵瓊脂含有乳糖、蔗糖、和葡萄糖，蔗糖：區(qū)別普通變形桿菌（）、沙門氏菌（-）克氏雙糖鐵成分 蛋白胨； 牛肉

7、膏 ； 酵母膏 ；乳糖 ； 葡萄糖； 氯化鈉 ； 檸檬酸鐵銨 ；硫代硫酸鈉 ； 瓊脂 ；酚紅為指示劑，黃色為產(chǎn)酸，紅色為產(chǎn)堿觀察克氏雙糖接種后斜面、底層產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)H2S的情況，通常大腸桿菌斜面不產(chǎn)酸、底層產(chǎn)酸產(chǎn)氣、不產(chǎn)H2S第二十四頁，共二十八頁。微生物大小測量原理（P48）微生物細(xì)胞的大小是其形態(tài)特征之一，也是鑒定的依據(jù)之一。在研究工作中有時要測定顯微鏡下微生物細(xì)胞的大小，使用工具為顯微測微尺。顯微測微尺有鏡臺測微尺和目鏡測微尺。目鏡測微尺是一塊可放在目鏡內(nèi)的園形玻片。在玻片中央把5mm長度，刻成100等分的小格，其目鏡測微尺經(jīng)過鏡筒光學(xué)系統(tǒng)后，其每格尺寸隨鏡筒長度變化而變化，也隨放大倍

8、數(shù)而變化，因此必須選定顯微鏡及放大倍數(shù)。然后用已知長度的鏡臺測微尺來校準(zhǔn)，計(jì)算出物鏡下接目測微尺每小格的長度。然后才可用接目測微尺直接測量標(biāo)本的長度和寬度。鏡臺測微尺是一中央部分刻有精確等分線的載玻片，其每格長度為10um，是專用于校正目鏡測微尺每格長度的。第二十五頁，共二十八頁。操作步驟1，先將目鏡測微尺裝入目鏡中，方法是：先撥出目鏡，旋下目鏡上的透鏡，然后將目鏡測微尺的刻度朝下，旋好目透鏡，并裝上鏡筒。2，將鏡臺測微尺放在載物臺上，刻度朝上，觀察。3，先低倍再高倍觀察，旋轉(zhuǎn)目鏡測微尺，使其刻度與鏡臺測微尺刻度線平行。移動載物臺推動器使目鏡測微尺的0點(diǎn)與鏡臺測微尺的一條刻度線重合，然后于另一端找重合線，計(jì)算兩端重合線之間目鏡測微尺和鏡臺測微尺各有幾格，重復(fù)三次，按公式計(jì)算出目鏡測微尺每格實(shí)際長度。目鏡測微尺每格長度（微米）=（鏡臺測微尺兩重合線格數(shù)10 ） /目鏡測微尺兩重合線格數(shù)4，取出鏡臺測微尺，取酵母菌懸浮液1滴于載玻片上，蓋上蓋玻片，放在載物臺上，進(jìn)行測量菌體的大?。y20個菌體，求平均值）。第二十六頁，共二十八頁。今天的實(shí)驗(yàn)菌種：大腸桿菌、沙門菌、青霉采用無菌操作進(jìn)行移植學(xué)會分區(qū)劃線所有平皿和試管必須有標(biāo)記1824小時（