酶性質(zhì)-最適pH值測(cè)定

1、酶性質(zhì)一最適pH選擇姓名：俞華軍 班級(jí)：09級(jí)生科3班 學(xué)號(hào)：200900140157時(shí)間：2011/04/11實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私庹莆諟y(cè)定酶最適pH的實(shí)驗(yàn)原理和方法了解酶的一般特性和性質(zhì)實(shí)驗(yàn)原理酶的催化活性與環(huán)境PH有密切關(guān)系，通常各種酶只在一定PH范圍內(nèi)才有 活性，酶活性最高時(shí)的PH,稱為酶的最適PH。高于或低于此PH時(shí)酶的活性逐 漸降低。值得指出的是，不同的酶最適PH也不同，如胃蛋白酶的最適PH為 1.52.5,胰蛋白酶的最適PH為8。酶的最適PH不是一個(gè)特征性的物理常數(shù)，對(duì)于同一個(gè)酶，其最適PH因緩 沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。如唾液淀粉酶最適PH為6.8,但在磷酸緩沖 液中，其最適PH為6

2、.46.6，而在乙酸緩沖液中則為5.6。實(shí)驗(yàn)器材1.2.1.2.儀器：8支試管(15x15)、電磁攪拌器、水浴鍋、電磁加熱爐、沸水浴、 玻璃棒、錐形瓶(x9)、100ml容量瓶(x2)、吸管2ml (x2)、10ml (x2)、3ml (x3)、液槍 0.5ml (x2)、1.0ml (x2)、點(diǎn)樣板、吸管 (x2)、燒杯200ml (x2)、洗耳球、冰水??；3.材料：人口腔唾液淀粉酶。3.實(shí)驗(yàn)步驟1 .配制溶液A：配制0.2mol/L的磷酸氫二鈉溶液200ml，稱取143256g磷酸氫二鈉標(biāo)準(zhǔn) 試劑于300ml錐形瓶中，加入200ml蒸餾水充分溶解；B：配制0.1mol/L的檸檬酸溶液100

3、ml；稱取21g檸檬酸于200ml錐形瓶中， 加入100ml水充分溶解；C：配制0.3%氯化鈉0.5%淀粉溶液，稱取03g氯化鈉于200ml燒杯中，充 分溶解后，取出約20ml到100ml燒杯中，剩余的溶液放到電磁加熱爐上 加熱至沸，然后稱取05g淀粉加入到有20ml左右的少量氯化鈉溶液中， 用玻璃棒攪成糊狀后，加入到已煮沸的大量氯化鈉溶液中，充分?jǐn)嚢?，?淀粉完全溶解；D：配制唾液淀粉酶液，漱口后在嘴里含100ml蒸餾水30s1min后，倒于 200ml燒杯中，并置于冰水浴中保藏；E：用0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液和0.1mol/L檸檬酸溶液配制PH為5.4,6.0， 6.4，6.8，7.

4、2，7.6，8.0的緩沖液，分別置于錐形瓶中并貼上標(biāo)簽：表一配制不同pH緩沖液所加試劑量表PH值5.46.06.46.87.27.68.00.2mNa PO 2411.1512.6313.8561.817.3918.7319.450.1m檸檬酸8.857.376.1518.22.611.270.55總體積/ml20202080202020測(cè)定保溫時(shí)間取一支試管，加入0.3%氯化鈉0.5%淀粉溶液2毫升，加入pH6.8磷酸氫二鈉 一檸檬酸鈉緩沖液3毫升，放入37C水浴鍋中保溫5min，隨后加入稀釋 100-300倍的唾液2毫升，并開始計(jì)時(shí)。充分搖勻后，放入37度水浴中保溫，每隔1分鐘用滴管取1滴

5、混合液，至于 點(diǎn)滴板上，加1滴碘液，檢驗(yàn)淀粉水解程度，待呈橙黃色時(shí)，為進(jìn)一步確定保 溫時(shí)間，應(yīng)加1滴碘液至試管中，若為橙黃色表示反應(yīng)完全，記錄所需保溫時(shí) 間。若2-3分鐘內(nèi)，取出的保溫液與碘液作用呈橙黃色，則說(shuō)明酶活力太高，應(yīng) 再稀釋唾液淀粉酶，記錄稀釋倍數(shù)，若保溫時(shí)間超過(guò)15分鐘，說(shuō)明酶活力太 低，要提高酶的濃度。最佳保溫時(shí)間8-15分鐘以內(nèi)，因此要掌握好唾液淀粉 酶的稀釋倍數(shù)，確定準(zhǔn)確的保溫時(shí)間才能進(jìn)行下步實(shí)驗(yàn)。最適pH的測(cè)定根據(jù)第二步中的保溫時(shí)間，取7支試管編號(hào)并加入0.3%氯化鈉0.5%淀粉溶 液2毫升，再分別加入pH5.4、6.0、6.4、6.8、7.2、7.6、8.0磷酸氫二鈉一檸

6、 檬酸鈉緩沖液3毫升，放入37C水浴鍋中保溫5min；保溫后向1號(hào)試管內(nèi)加入有適宜保溫時(shí)間的唾液酶稀釋液2ml，充分搖勻后， 放入37度水浴中保溫，隨后每隔一分鐘向后一只試管加入唾液酶稀釋液2ml， 進(jìn)行同樣的操作。到保溫時(shí)間后(根據(jù)步驟2里的所測(cè)的保溫時(shí)間)，依次取出試管加入一滴碘 液檢測(cè)淀粉水解情況，從各管呈現(xiàn)的顏色，判斷不同PH對(duì)淀粉水解和淀粉酶 活性的影響,并確定其最適PH值。表二測(cè)定最適pH步驟表試劑(毫升)1234567PH值5.46.06.66.87.27.68.00.3%氯化鈉0.5%淀粉2222222相應(yīng)PH緩沖溶液3333333每隔1分鐘加入唾液淀粉酶液2222222充分搖

7、勻,37度水浴保溫，到達(dá)保溫時(shí)間后，每隔1分鐘依次取出立即加入碘液1滴，搖勻1111111記錄結(jié)果顏色深藍(lán)淡紫微紫偏黃淡黃微紫偏黃淡黃偏紫紫色實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋100倍后的酶在pH6.8條件下的保溫時(shí)間：12min17號(hào)試管的顏色分別為：深藍(lán)、淡紫、微紫偏黃淡黃、微紫偏黃、淡黃偏紫、紫色;所以，人唾液淀粉酶最適黃偏紫、紫色;所以，人唾液淀粉酶最適pH為68左右。2.實(shí)驗(yàn)圖片：六.實(shí)驗(yàn)分析及注意事項(xiàng)配制0.3%氯化鈉0.5%淀粉溶液時(shí)要注意不要把淀粉一下子全部加到氯化鈉溶 液中，而是先在少量氯化鈉溶液中變成糊狀后，加入到煮沸的大量氯化鈉溶液 中，否則不能溶解完全，影響時(shí)間結(jié)果。保溫時(shí)間指從加入酶液開始到從水浴中取出試管加入碘液的一段時(shí)間。摸準(zhǔn)保 溫時(shí)間是實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟之一，保溫時(shí)間一定要控制好，盡量控制在812分 鐘，原始酶液不能棄掉，