菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定課件

1、菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定主要內(nèi)容菌落總數(shù)測(cè)定大腸菌群測(cè)定MPN法原理（拓展內(nèi)容）菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定人有了知識(shí)，就會(huì)具備各種分析能力，明辨是非的能力。菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大主要內(nèi)容菌落總數(shù)測(cè)定大腸菌群測(cè)定MPN法原理（拓展內(nèi)容）菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定主要內(nèi)容菌落總數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定掌握菌落總數(shù)測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)原理 不同稀釋度的樣品，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，36 ，48h（水產(chǎn)品30 ，72h ），菌落數(shù)菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定掌握菌落總數(shù)測(cè)定方法菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)

2、定器材與試劑： 樣品，無菌生理鹽水，平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，1ml吸管，培養(yǎng)皿菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定器材與試劑：菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定傾注培養(yǎng)菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定傾注培養(yǎng)菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定培養(yǎng)結(jié)果菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定培養(yǎng)結(jié)果菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟 5.菌落計(jì)數(shù)： 肉眼觀察，可用放大鏡，可標(biāo)記 必要時(shí)分區(qū)計(jì)數(shù)，菌落成片者作廢計(jì)算方法 某稀釋度的菌落數(shù)：兩平板菌落數(shù)取平均值 選擇菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度 （1）僅有一個(gè)稀釋度在此范圍： 菌落數(shù)稀釋倍數(shù)菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)

3、定菌落總數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定計(jì)算方法： （2）有兩個(gè)稀釋度在30-300之間 菌落數(shù)之比2，選較小值 菌落數(shù)之比300 取稀釋倍數(shù)最大者 （4）所有稀釋度均30 取稀釋倍數(shù)最小者 （5）沒有任何稀釋度在30-300之間 選最接近該范圍者結(jié)果單位：CFU/ml（g）菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定計(jì)算方法：菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定注意事項(xiàng)： 1.無菌操作 2.標(biāo)記 3.何時(shí)更換吸管 4.吸吹混勻 5.瓊脂培養(yǎng)基保溫 6.安全常識(shí)菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)測(cè)定注意事項(xiàng)：菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)原理 36 ，48h，產(chǎn)氣（

4、小倒管） 三步法：初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵器材與試劑 樣品、無菌生理鹽水、LST肉湯，BGLB肉湯 1ml吸管、10ml吸管、試管、小倒管菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康木淇倲?shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定初發(fā)酵器材與試劑樣品、225ml無菌生理鹽水、9ml無菌生理鹽水、雙料LST肉湯，單料LST肉湯，10ml吸管、1ml吸管、吸球菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定初發(fā)酵器材與試劑菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟： 1.初發(fā)酵 菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟：菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定吸取

5、樣品方法菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定吸取樣品方法菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定加注樣品菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定加注樣品菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定初發(fā)酵結(jié)果右邊為陽性結(jié)果，小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生。菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定初發(fā)酵結(jié)果右邊為陽性結(jié)果，小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生。菌落總數(shù)與大腸實(shí)驗(yàn)步驟 3.復(fù)發(fā)酵 （1）選取產(chǎn)氣試管 （2）接種至10mlBGLB肉湯中 （3）培養(yǎng)：36，48h （4）觀察指標(biāo)：若產(chǎn)氣則報(bào)告大腸菌群陽性。菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟 2.分離培養(yǎng) （1）制備伊紅美藍(lán)平板： 45 ，無菌，傾注，15ml （2）選產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管 （3）接種至伊紅

6、美藍(lán)平板 分區(qū)劃線法 （4）培養(yǎng)： 36，48h菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定分離培養(yǎng)器材與試劑 初發(fā)酵結(jié)果（4只發(fā)酵管）、酒精燈、接種環(huán)、伊紅美蘭平板培養(yǎng)基菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定分離培養(yǎng)器材與試劑菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線分區(qū)劃線法操作要點(diǎn) 1.劃下一個(gè)區(qū)前必須滅菌接種環(huán) 2.劃線時(shí)接種環(huán)同平板呈30-40角 3.每次劃線應(yīng)該壓到上一個(gè)區(qū)域的2-3條線 4.用接種環(huán)的“面”而不是“弧”在平板上滑動(dòng)菌落

7、總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定分區(qū)劃線法操作要點(diǎn)菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟 2.分離培養(yǎng)： （5）菌落特征： 深紫黑色、有金屬光澤 紫黑色、無或略有金屬光澤 淡紫紅色、中心顏色深 （6）革蘭染色、鏡檢：選特征菌落菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定革蘭染色法器材與試劑 結(jié)晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、酸性復(fù)紅、生理鹽水、酒精燈、載玻片、濾紙菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定革蘭染色法器材與試劑菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定革蘭染色法涂片：接種環(huán)，挑取菌落， 生理鹽水一滴，涂勻熱固定：通過火焰若干次初染：結(jié)晶紫一滴，1min，水洗媒染：盧戈碘液一滴，1min，水洗脫色：

8、95%乙醇，30s或至無色為止復(fù)染：復(fù)紅一滴，30s菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定革蘭染色法涂片：接種環(huán)，挑取菌落，菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定涂片菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定涂片菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定熱固定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定熱固定菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定初染菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定初染菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定媒染菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定媒染菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定脫色菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定脫色菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定復(fù)染菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定復(fù)染菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定革蘭氏染色陰性革蘭氏染色陽性革蘭染色法菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定革蘭氏染色陰性革蘭氏染色陽性革蘭染色法菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)復(fù)發(fā)

9、酵器材與試劑 培養(yǎng)24小時(shí)后的伊紅美蘭平板、酒精燈、接種環(huán)、復(fù)發(fā)酵管菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定復(fù)發(fā)酵器材與試劑菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟 3.復(fù)發(fā)酵 （1）選取鑒定為無芽孢G-桿菌的菌落1-3個(gè) （2）接種至10ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 （3）培養(yǎng)：37，24h （4）觀察指標(biāo)：產(chǎn)酸，產(chǎn)氣菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)步驟菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定液體接種菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定液體接種菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定復(fù)發(fā)酵復(fù)發(fā)酵陽性結(jié)果，培養(yǎng)基變成黃色，小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定復(fù)發(fā)酵復(fù)發(fā)酵陽性結(jié)果，培養(yǎng)基變成黃色，小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生菌落大腸菌群數(shù)測(cè)定注意事項(xiàng)

10、： 1.無菌操作 2.吸管使用 3.洗去染液的方法 4.顯微鏡保養(yǎng) 5.液體接種菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定大腸菌群數(shù)測(cè)定注意事項(xiàng)：菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定MPN法原理MPN法（Most Probable Number Method）目的：對(duì)某種細(xì)菌進(jìn)行選擇性計(jì)數(shù)核心思想：泊松分布實(shí)施方法：多次稀釋直至無菌，每個(gè)稀釋度分別接種若干培養(yǎng)管，根據(jù)陽性管數(shù)估算MPN值菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定MPN法原理MPN法（Most Probable NumbeMPN法原理MPN法（Most Probable Number Method）1.細(xì)菌進(jìn)入發(fā)酵管的概率近似服從泊松分布: P(x=k)=e-x xk/k! x:細(xì)菌濃度，k:進(jìn)入發(fā)酵管的細(xì)菌數(shù)2.若在n管發(fā)酵中，令接種水樣量為Vi，陽性管數(shù)為Pi，陰性管數(shù)為Qi，則該檢驗(yàn)結(jié)果發(fā)生的概率為： 其中C為常系數(shù) V為總水樣量，x為細(xì)菌個(gè)數(shù)菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測(cè)定MPN法原理MPN法（Most Probable NumbeMPN法原理3.當(dāng)y(x)max，XMPN4.