漢恒生物-LipoFiter 3轉(zhuǎn)染試劑中文說(shuō)明書(shū)

1、LipoFiter 3.0 轉(zhuǎn)染試劑操作說(shuō)明TM產(chǎn)品編號(hào)規(guī)格HB-TRLF3-1000LipoFiter3.0 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑1ml保存條件：4保存，一年有效（避免反復(fù)凍融）。LipoFiter3.0 簡(jiǎn)介L(zhǎng)ipoFiter3.0 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑(LipoFiter 3.0LiposomalTransfectionReagent)TM是一種適合于把質(zhì)粒或其它形式的核酸,以及核酸蛋白復(fù)合物轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)的真核細(xì)胞中的高效陽(yáng)離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。LipoFiter3.0 優(yōu)點(diǎn)1、轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)單。2、無(wú)明顯細(xì)胞毒性，用LipoFiter3.0 轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞72 小時(shí)內(nèi)不更換培

2、養(yǎng)液無(wú)明顯細(xì)胞毒性。3、LipoFiter3.0 對(duì)于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞都適用，并且可以用于穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選。LipoFiter3.0 使用說(shuō)明1、細(xì)胞培養(yǎng)：以293T 細(xì)胞為例，轉(zhuǎn)染前一天(20-24 小時(shí))0.410 細(xì)胞(具體的細(xì)胞6數(shù)量據(jù)細(xì)胞大小和細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定)鋪到六孔板內(nèi)，使第二天細(xì)胞匯合度（confluent）能達(dá)到約70%80%。注 12、在進(jìn)行下述轉(zhuǎn)染步驟前，把六孔板每孔內(nèi)換成新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液。培養(yǎng)液的體積約為2ml。 3、把LipoFiter3.0 脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑輕輕混勻。4、對(duì)于待轉(zhuǎn)染的六孔板中一個(gè)孔的細(xì)胞，取一只潔凈無(wú)菌離心管，加入4 g 質(zhì)粒DNA（其他培養(yǎng)介質(zhì)D

3、NA 用量參見(jiàn)附表）到250 lDMEM 溶液，用槍輕輕吹打混勻。 5、取另一只潔凈無(wú)菌離心管，加入250 lDMEM 溶液，再加入6 lLipoFiter3.0,用槍輕輕吹打混勻,室溫放置5 分鐘。6、將步驟4 溶液與LipoFiter3.0 溶液混合，用槍輕輕吹打混勻。注意：不可Vortex 或離心。7、室溫孵育20 分鐘。有可能出現(xiàn)絮狀沉淀物，屬正常現(xiàn)象，不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。8、無(wú)論是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞，均把500 lLipoFiter3.0-DNA 混合物全部加入六孔板的一個(gè)孔內(nèi)。加入時(shí)注意盡量均勻加入到整個(gè)孔內(nèi)，隨后輕輕“8”字搖擺混勻。 29、細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)6-12 小時(shí)后，去除

4、含有LipoFiter3.0-DNA 的無(wú)血清培養(yǎng)液。每孔加入2ml 新鮮含血清的細(xì)胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。 10、轉(zhuǎn)染后續(xù)處理：1）對(duì)于基因表達(dá)，再培養(yǎng)24-40 小時(shí)后即可檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果，如轉(zhuǎn)染帶GFP 或者其他熒光基因的表達(dá)載體，可用熒光顯微鏡觀測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。2）用于篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染后24 小時(shí)即可加入適當(dāng)?shù)暮Y選藥物，例如G418 或Puromycin （嘌呤霉素）等，進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選。 3附錄：各種培養(yǎng)介質(zhì)下LipoFiter3.0 詳表類型對(duì)應(yīng)細(xì)胞培 溶劑DMEM 表面積/cm2 養(yǎng)液體積對(duì)應(yīng)體積/lDNALipoFiter3.0 222 4轉(zhuǎn)染效果5注意事項(xiàng)1、使用高純度的DNA （A260/A280 越好）有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。對(duì)于質(zhì)粒，推薦使用Qiagen 公司生產(chǎn)的質(zhì)粒大量抽提試劑盒進(jìn)行高質(zhì)量無(wú)內(nèi)毒素抽提。2、細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率，所以轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。3、需自備DMEM 培養(yǎng)基，其他培養(yǎng)基如1640 、MEM 、alpha-MEM ，F(xiàn)12，DMEM/F12、M199 也均可以用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。4、LipoFiter3.0 或離心，宜緩慢晃動(dòng)混勻。5、LipoFiter3.0 使用后請(qǐng)立即蓋好蓋子，避免長(zhǎng)時(shí)