質(zhì)譜操作規(guī)程

1、TQD操作手冊2011-04-15日常操作步驟: 準備UPLC 設(shè)置樣品表 運行樣品 定量 打印報告注：如果一個星期內(nèi)不運行樣品請不要關(guān)質(zhì)譜儀，使其保持真空。建立新方法和project的操作步驟：準備UPLC 建立新的project 用標準品調(diào)諧 編輯質(zhì)譜方法 k編輯UPLC方法 設(shè)置樣品表 運行樣品 定量 打印報告開機打開電腦，打開質(zhì)譜電源和UPLC各電源，各部件通過自檢后，點擊 MaxvOJnk 進入工作站。選擇Instrument MS Tune進入調(diào)諧頁面。從調(diào)諧頁面選擇Vacuum pump，打開真空泵，開始抽真空。機械泵和分子渦輪泵開始 工作。質(zhì)譜上的真空燈開始閃爍，當(dāng)系統(tǒng)達到真空

2、狀態(tài)，燈變?yōu)榫G色，不再閃爍。如果達到 實驗狀態(tài)大約要抽真空12小時氣源壓力設(shè)置氮氣：90 - 120 psi 氬氣：7 psi準備UPLC系統(tǒng)準備流動相用0.22um的膜過濾緩沖液，所有的緩沖液和超純水都要新配制，超純水和緩沖液使用不得超過二天。所有樣品都要用流動相初始梯度比例的溶劑來溶解，并用0.22um的膜過濾。初始化UPLC泵 在Masslynx主頁面上選擇 將 出現(xiàn)下面的畫面。Inlet Method2.4,點擊進入UPLC控制臺，見下圖。2.5. 濕灌注 UPLC 泵 選擇 CONTROLPrime A/B solvent1313回區(qū)的 ACQUITY UPLC Console -

3、System二i ACQUITY UPLC System：+ Binary Solvent Manager i+ Sample ManagerSi TUV Detectori+ ColumnPlotsMaintenance Counters LogsSystem StatusControl | Configure Maintain Troubleshoot HelpSet flow.Stop HowPrime A/B solvents.flow0 psi0.000 mL/mintemperatureColumn 40.0。匚 40.046 1 。匚 SampleOffRoom 18.3 匚2.

4、6.選擇A1/B1或A2/B2輸入時間1min，如果更換了流動相則輸入3min，按star.2.7.初始化UPLC自動進樣器在UPLC控制臺上選擇Sample Manager2.8. 選擇 Control Prime syringes2.9.灌注進樣器和洗針系統(tǒng)。選擇Sample syringe and wash syringesPrime SyringesSample syringe only0 Sample syringe and wash syringesNumtier of cycles; 1|餡 neel參數(shù)Number of cycles平時選1,但在更換洗針溶液時選5。點擊OK開

5、始。完成后，UPLC可以正常的工作。0.3的流速，乙酸胺溶液：乙腈=5:95的條件下平衡色譜柱。準備進樣3.1在整個儀器穩(wěn)定以后（大約在平衡色譜拄之后半小時，壓力變化范圍小于50），從&Masslynx的主畫面選擇MS Turie，打開調(diào)諧頁面。在調(diào)諧頁面下，設(shè)置去溶劑氣流量為 800L/hr，按“Gas”按扭，打開氮氣。Wgi% TL? D?eCoiii -cjcbd!)46_fiht&LbdctioinsptolLNew打開一個新的樣品表。按下列方法調(diào)入一個新的樣品表格式，|口 MassLwn配-Qjatlro Mkro Qpegtiorai Traiinln口 - untitledlHe

6、 甘汕 Rui He字/| 口碧目 | 啻 I * LI QO | 310rtCUt 兔 gue 琴 StatusQueue $ EmptyI - X .Spectrum I - X .Spectrum Chromatogram Map EdltxFilHNanH FileTemf HS File Inlet FileSamples.AddDeleteFill，Clear#Column.Format*CustomIze.-uScwtkjad Number of Sampfes .aSav仕number of InjectlonSuu.Edit shutdown orStartupShutdow

7、nStartupReadyJistrLmaTt Net FTesmft 切口aiy ReadyJistrLmaTt Net FTesmft 切口aiy Error Shufcdjur Ented 電4.2輸入樣品表中的信息：File Name原始數(shù)據(jù)的文件名（為了便于查找我們一般用日期）File Text樣品或標樣的細節(jié)MS File運行質(zhì)譜方法的文件名Inlet File運行UPLC方法的文件名MS Tune File運行時的調(diào)諧方法Bottle樣品所在位置Sample Type從下拉菜單中選擇樣品的類型Gone A標準品的濃度，如不必要可以不輸入g4.3選擇，或者在主菜單選擇File Sa

8、ve As，輸入這個樣品表的名稱（后綴為.SPL）。樣品表就已經(jīng)編好等待運行。樣品表的實例Spectrunn Chramategram Map Edit- Samples-Fie Namefile TaxiMS FieIdel FieBatiJehjeclVDluffie&irifL.nilrairridad.301HOOSij&nd&rd23珀仲RN2 M._tlllKllEl 莉口 L.nilraimdad.311HOOEij&nd&rd5qEDppbRNZM.h 峋 mi 莉lL.nilraimdazd.361HOOSijand&rd20EDppbRNZM.hiiNitni 出l： 口

9、L.nilrairridezd.371HOOij&nd&rd506adH5_1_2212IHlOOppbMZh 峋 mi 莉lL.nilraimdazd.381HOOSijand&rd100| 712GppbMZhiiNitni 出l： 口 L.nilrairridezd.391HOOij&nd&rd126S即H七1_貧1四4OOppbMZh 峋 mi 莉lL.nilraimdazd.401HOOSijand&rd2009日切加4H2OhiiNitni 出l： 口 L.nilrairridezd.261HOOBl&jik10FeedBk=nkEl_1_.E&irfde Bleuikh 峋 mi

10、 莉lL.nilraimdazd.331HOOBlemk11FBBdSpiCustomizeLoad并調(diào)出“quantify”列6.2.1按下圖格式輸入相關(guān)的信息。6.2.2選中中間濃度的標準品，點擊Chromatogram，出現(xiàn)總離子流色譜圖。Q MassLynx - Quantify - Quantify.splFile View Run Help U 祀 Shortcut弓言 QueueStatusQueue Is Emptylca)En藝 CI S-OO- XUA_ICOXLIA_lLJtJmLLXUA-JU 當(dāng)0 XUA-JmcudInstrument Inlet MethodMS

11、TuneEdit Shutdown or StartupShutdownReadySpectrum Chromatogram Map Edit Samples File Namelca)En藝 CI S-OO- XUA_ICOXLIA_lLJtJmLLXUA-JU 當(dāng)0 XUA-JmcudInstrument Inlet MethodMS TuneEdit Shutdown or StartupShutdownReadySpectrum Chromatogram Map Edit Samples File NameFile T extMS FileInlet FileBottleInject

12、VolumeSample TypeCone AMS Tune File1ASSAY01plasma blankDEFAULTDEFAULT110.000Blank0DEFAULT2ASSAYOS0.2pg/ml ：i：tdDEFAULTDEFAULT2Standard0.23ASSAY030.5pg/ml stdDEFAULTDEFAULT310.000Standard0.54ASSAY040.75pg/ml stdDEFAULTDEFAULT410.000Standard0.755ASSAYI：I51 pg/ml stdDEFAULTDEFAULT5Standard16ASSAYOE；2pg

13、/ml stdDEFAULTDEFAULT610.000Standard27ASSAY075pg/rnl stdDEFAULTDEFAULT710.000Standard58ASSAYOEl10pg/ml stdDEFAULTDEFAULT0Standard109ASSAY0915pg/ml stdDEFAULTDEFAULT910.000Standard1510ASSAY100.3pg/ml QCDEFAULTDEFAULT1010.000QC0.311ASSAY112pg/ml QCDEFAULTDEFAULT11QC212ASSAY12pg/ml QCDEFAULTDEFAULT1210

14、.000QC1213ASSAY13Flat sample 01DEFAULTDEFAULT1310.000Blank014ASSAY14Flat sample 02DEFAULTDEFAULT1410.000Analyte015ASSAY15Flat sample 03DEFAULTDEFAULT1510.000Analyte016ASSAY16Flat sample 04DEFAULTDEFAULT1610.000Analyte017ASSAY17Flat sample 05DEFAULTDEFAULT1710.000Analyte018ASSAY18Flat sample 06DEFAUL

15、TDEFAULT1810.000Analyte019ASSAY19Flat sample 07DEFAULTDEFAULT19Analyte020ASSAY20Flat sample 08DEFAULTDEFAULT2010.000Analyte021ASSAY21Rat sample 09DEFAULTDEFAULT2110.000Analyte022ASSAY22Flat sample 10DEFAULTDEFAULT22Analyte023ASSAY23Flat sample 11DEFAULTDEFAULT2310.000Analyte024ASSAY24Flat sample 12D

16、EFAULTDEFAULT2410.000Analyte025ASSAY25Flat sample 13DEFAULTDEFAULT25Analyte026ASSAY26Flat sample 14DEFAULTDEFAULT2610.000Analyte027ASSAY27Flat sample 15DEFAULTDEFAULT2710.000Analyte0Instrument Not Present 0:0Only Error Shutdown Enabled6.3在總離子流色譜圖中選擇DisplayMass,出現(xiàn)以下窗口，選擇相應(yīng)的Function和Channels，選擇Replace

17、 trace和 select All之后出現(xiàn)各數(shù)據(jù)通道下的色譜圖。6.4點擊Edit Method出現(xiàn)以下頁面，在下面畫面中點擊Add New Compound按鍵6.4.1輸入化合物的名稱。6.4.2在出現(xiàn)的各通道的質(zhì)譜色譜圖上，按住右鍵拉過目標峰，定量離子的參數(shù)（定量離子、保留時間、及保留時間窗口）自動添加到方法編輯器內(nèi)。-|g|x|-|g|x|曹 Chromatogram - -|g|x|-|g|x|國 File Edit Display Process Window Tools Help芽|凰也|櫥勉煎圈| %叢盛|。a電國倉|aace|tic kNitrofuran 2 ppb070

18、504JJ610O-i%-I St痢口z|070504JJ610O-i%-I St痢口z|0-1 I I i 070504_06100-1MRM of 10 Channels ES+235.95 133.863.53e6MRM of 10 Channels ES+240 133.91.46e66.5在Compound Properties表中按下面的要求輸入相關(guān)的信息：Acquisition Function Number此選項可以從MS方法中得到，一定要和MS的方法對應(yīng)Concentration of Standards內(nèi)標法：對于內(nèi)標物選擇Fixed，并輸入1.0的濃度。對于標準品，選擇C

19、onc A，并保證樣品表中濃度是正確的。外標法：對于標準品，選擇Conc A，并保證樣品表中濃度是正確的。Time Window最大的保留時間窗口，一般輸入0.2Peak Selection通常設(shè)置Nearest.Response Type在使用內(nèi)標法定量時，內(nèi)標物應(yīng)選擇External (absolute)，標準品應(yīng)選擇Internal (relative)；在使用外標法定量時，標準品應(yīng)選擇External(absolute)主 SudanTL - TargetLynx Method EditorFile Edit View Compound Help遂8 I圜I。喈，I丑瞄卷I畫11: S

20、udan I2: Sudan II3: Sudan III4: Sudan IVropery Properties |11: Sudan I2: Sudan II3: Sudan III4: Sudan IVropery Properties |QuantiFication TraceInclude Primary Trace in Fiesponse?Use absolute mass v-Mow?Chrom-atogram mass wind(Da)Chromatogram mass window (PPM)Response TypeR.esponse UsesAcquisition Fu

21、nction NumberConitrHon oF Standard: LevelConitration of Standard日 View Retention Time ParametersLocate Peak UsingPredicted Retention TimePredicted Relative Retention TimeRelative Retention Time ReferenRetention Time Window (mins) 土Lower Retention Time Tolerance (%)Upper Retention Time Tolerance (%)F

22、lag RT Tolerance?Late Peak 5ItionUpdate Method Times Using Multiple Samples?-|View Acceptance Flag ParametersMaximum Blank Acceptance FlesponseMaximum 1 entration LimitReporting Concentration LimitMinirnurn Fecovery Level (%)Maximum Recwety Level (%)Flag R-ecovery Level?+lview Internal StandardsF+lV

23、iBW TotalsSyrrimetry Threshold (%：iValueSudan I249 92.73 YE53 YESi：i.02i：ii：i10.0000External (absolute)AreaOneConc A1.0000R.etention Tirne2.84500.0000None0.1500Q3NE13 3.6000X 0.0000O.i：ii：ii：ii：iX NO90.000116 5.1 在 Calibration Properties 表中，設(shè)置以下參數(shù):Polynomial Type - Linear 選擇LinerPoint of Origin - Ex

24、clude 選擇 ExcludeFit Weighting通常選擇None，關(guān)注低濃度時選擇1/XAxis Transformation選擇NoneConcentration Units可以不輸入Calibration Reference Compound應(yīng)和化合物的名稱一樣6.6在Integration Properties表中輸入以下信息：建議使用 Smoothing Enabled 和 ApexTrack Peak IntegrationSmoothing method對于色譜圖-選擇Mean6.7在Targeting Properties中輸入以下信息：Update Ion Ratio

25、s Using Multiple Samples如選YES,樣品的平均離子比經(jīng)過計算并進行更新，但要在樣品表中Quan Ref列中標記。Ratio選擇后 Calculate Ion Ratio Tolerance 進行計算Quan/Target對 Target Ion Ratio Method 進行編輯Target Ion Trace輸入?yún)⑴c離子比計算的離子Target Ion Must Exist選擇后則定性離子峰被檢出后才對定量離子進行定量Target Ion Must Pass Ratio選擇后則離子比符合預(yù)設(shè)值后才對定量離子進行定量I C:MassLynxW10-2CK_Sampie

26、Analysis.Sudan Red_HK_210306.PROMethDBSudanTL.mdb - TargetLynx Method EditorFile Edit View Compound Help分 目1蚤1兮。，1丑 皤洛IIHICompound List履）| 尾I僵屜）1: Sudan I2: Sudan II3: Sudan III4: Sudan IVPropertyValueCiumpound P-JameSudan ITarget Ion RT Window (mins) 0.000Update Ion Ratios Using Multiple Samples?可

27、YESCalculate Ion Ratio Tolerance AsRatio田 View Quan/Target Ratio ParametersIview First Target Ion ParametersTarget I on Trace249 156Use trace in response calculation?W NOTarget Ion Ratio1.3640Target Ion Ratio Tolerance (%：i 土50.0000Target Ion Must Exist?NOT arget I on Must Pass Ratio?Calculate Ion R

28、atio As ( Target / Primary )? x 田 View Second Target Ion Parameters,國 View Third Target Ion Parameters| CalculateNONOIon Ratio As ( Target / Primary )?|田 View Fourth Target Ion ParametersReady6.8在Calculation Factors頁面中輸入以下信息Signal to Noise Method 選擇 Peak to PeakSignal to Noise Factor輸入1Noise Window

29、Start End指定的噪聲計算范圍Measure Peak Signal level From 選擇 Average Noise|嘉:蠟器阻電H)CompciLind List1: Sudan I|嘉:蠟器阻電H)CompciLind List1: Sudan I2: Sudan II3: 5udan III4: Sudan IVJUEn-SLJI -n-n-R w-EQdouRnoSpectrum Chromatogram Map Edit Samples File NameFile TextBottleSample TypeSample CroupCone AQuan Ref1Sudan Std_2403i：itA |SudanSudan 1Standard12Sudan Std_240306_BSudanSudan