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1、XX醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)報告專業(yè):XX醫(yī)學(xué) 年級:xxxx級 姓名:XXX 學(xué)號:xxxxxxxxxx實(shí)驗(yàn)三熒光光度法測定硫酸奎尼丁含量I實(shí)驗(yàn)三熒光光度法測定硫酸奎尼丁含量I三一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅簾晒夥止夤舛扔嫷幕窘Y(jié)構(gòu)及操作方法;熒光產(chǎn)生及測量的過程;熒光分析法的定量分析方法(標(biāo)準(zhǔn)曲線法);影響熒光強(qiáng)度的因素。二、實(shí)驗(yàn)原理:奎尼丁是抗瘧疾奎寧的右旋體,屬于生物堿類抗心律失常藥。主要用于陣發(fā)性心動過速、 心房顫動、早搏;預(yù)防室房性心動過速及對房室結(jié)折返性心動過速;還何以預(yù)防有癥狀的室 上性和室性早搏。奎寧丁的有效血藥濃度是36mg/L,8mg/L以上可發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)。硫酸奎寧丁的分子式為C20H24

2、O2N2 . H2SO4 . 2H2O,分子量為728.96,分子結(jié)構(gòu)式如 圖所示:一g H 一2其結(jié)構(gòu)分為喹琳環(huán)和喹琳堿兩個部分根據(jù)其喹琳環(huán)結(jié)構(gòu)部分具有產(chǎn)生熒光的特性,采用 熒光光度計測量其熒光強(qiáng)度,可以實(shí)現(xiàn)硫酸奎寧丁含量的測定。三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑:F93型熒光光度計硫酸奎寧丁標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100ug/ml)硫酸溶液(0.050mol/L)硫酸奎寧丁樣品溶液5.50ml容量瓶6個6.5ml移液管2個7.1cm石英熒光比色皿1個四、實(shí)驗(yàn)步驟:標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品溶液配制按照下表配制硫酸奎尼丁標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品溶液編號123456 (硫酸奎尼丁樣品溶液)100口 g/ml硫酸奎尼丁標(biāo) 準(zhǔn)溶液1.00

3、ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml2.50ml說明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中 用0.050ml/L硫酸溶液稀釋至刻度并搖勻系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度U g/ml2.004.006.008.0010.00專業(yè):XX醫(yī)學(xué) 年級:xxxx級 姓名:XXX 學(xué)號:xxxxxxxxxx測定靈敏度的選擇和熒光光譜的繪制(1)用1cm石英熒光比色皿,以5號溶液作為測定溶液,置于熒光光度計樣品室中,蓋上樣品室艙蓋,調(diào)節(jié)熒光光度計靈敏度,使其熒光強(qiáng)度讀數(shù)在100左右,測定測定的靈敏 度。(2)熒光波長調(diào)節(jié)為380nm,用1cm石英熒光比色皿,以5號溶液作為測定溶液,置 于熒光光度計樣品室中

4、,蓋上樣品室艙蓋,調(diào)節(jié)熒光光度計靈敏度,使其熒光強(qiáng)度讀數(shù)在 5以內(nèi),然后按照下表依次調(diào)節(jié)熒光波長,測定不同熒光波長下5號溶液的熒光強(qiáng)度;在坐 標(biāo)紙上以測定的熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo),熒光波長為橫坐標(biāo)制圖,繪制熒光光譜,并從熒光光譜曲線上找出做最大熒光波長。激發(fā)波長365nm熒光波長380nm390nm400nm410nm420nm430nm440nm450nm460nm熒光強(qiáng)度佰2.36.918.537.555.367.973.571.863.5激發(fā)波長365nm熒光波長470nm480nm500nm510nm520nm530nm540nm550nm560nm熒光強(qiáng)度佰55.749.428.819.7

5、13.08.35.03.02.0選擇的最大熒光長為:打440 (nm)熒光強(qiáng)度值(激發(fā)波長365nm)值度強(qiáng)光熒值度強(qiáng)光熒熒光波長(n m )專業(yè):XX醫(yī)學(xué) 年級:xxxx級 姓名:XXX 學(xué)號:xxxxxxxxxx標(biāo)準(zhǔn)曲線制作將激發(fā)波長,熒光波長分別調(diào)節(jié)為上面實(shí)驗(yàn)選擇的365nm,440nm,熒光光度計靈敏度 調(diào)節(jié)為上面實(shí)驗(yàn)選擇的靈敏度檔次,用1cm石英熒光比色皿,按照下表依次測定標(biāo)準(zhǔn)系列溶 液、樣品溶液、0.050mol/L硫酸溶液熒光強(qiáng)度,平行測定兩次,計算熒光強(qiáng)度的平均值; 在坐標(biāo)紙上以熒光強(qiáng)度的平均值為縱坐標(biāo),系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)制圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線。o o O o o O 0

6、0 7 6 o o O o o O 00 7 6 度強(qiáng)光熒g 4 a / 3 n 4 a a njn c c 4 nJD Q n i| n nJ a a a d|c ugugu 口卜 口口 d|c / dd a a ra aja a ra dd a編號123456 (樣品)7硫酸溶液熒光強(qiáng)度F117.132.47.360.673.618.10.3熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)曲線40.040.030.020.010.00.002.0 4.006.008.0010.0012.00系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度/ g/ml樣品6五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理:2皿 如1 .樣品溶液中的硫酸奎寧丁的含量根據(jù)6號樣品溶液熒光強(qiáng)度測定的平均值,在標(biāo)

7、準(zhǔn)曲線上采用作圖法求出其對應(yīng)的濃度值,采用下式計算樣品溶液中鐵的含量:_ C X 50.00讀取值 2.50Cx=2.15X50.00/2.50=43.00m g/ml六、注意事項(xiàng):測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液時,必須使用同一只比色皿。比色皿放入熒光光度計樣品室前,必須用吸水紙將表面擦拭干凈。比色皿在換裝不同濃度溶液時,必須用待測溶液潤洗至少三次。在比色皿未放入熒光光度計測定光路時,必須將樣品室艙蓋打開。專業(yè):XX醫(yī)學(xué) 年級:xxxx級 姓名:XXX 學(xué)號:xxxxxxxxxx七、討論與思考實(shí)驗(yàn)過程中,有一調(diào)零步驟,其作用是什么?答:調(diào)零是為了消除溶劑中離子發(fā)熒光而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果不進(jìn)行調(diào)零操作,對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有無影響?為什么?答:無影響。標(biāo)準(zhǔn)曲線不調(diào)零也可以讀出樣品溶液的濃度。什么情況下,

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