食品中氯丙醇含量的測定（食品安全國家標準）

1、 食品安全國家標準食品中氯丙醇含量的測定范圍本標準規(guī)定了食品中氯丙醇和氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）的測定方法。本標準適用于食品中氯丙醇含量和氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）總含量的測定。第一法 食品中3-氯-1， 2-丙二醇含量的測定同位素稀釋氣相色譜質譜法原理本標準采用同位素稀釋技術，以d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCPD）為內標。試樣中加入內標溶液，以硅藻土（ExtrelutTM 20）為吸附劑，進行基質固相分散萃取，用正己烷-乙醚（9：1，體積比）淋洗去除非極性脂質組分，用乙醚洗脫3-氯-1，2-丙二醇（3-MCPD），以七氟丁?；溥蜻M行衍生化反應。采用氣相色譜質譜聯(lián)用儀進行測定，

2、以選擇離子監(jiān)測（SIM）模式進行質譜掃描，內標法定量。試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。 試劑乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。正己烷（C6H14）：色譜純。無水乙醚（C4H10O）：使用前需于60C重蒸。氯化鈉（NaCl）。無水硫酸鈉（Na2SO4）：使用前于120C烘烤4 小時。七氟丁?；溥颍–7H3F7N2O，CAS號：32477-35-3，縮寫為HFBI）。試劑的配制氯化鈉溶液（200 g/L）：稱取氯化鈉20 g，用水溶解并加水80 mL，混勻，使氯化鈉充分溶解。正己烷-乙醚溶液（9：1，體積比）：將450 mL正己烷與50 mL

3、無水乙醚混合均勻。標準品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）標準品（C3H7ClO2）：CAS號編號96-24-2，純度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）標準品（C3D5H2ClO2）：純度98%。標準溶液的制備標準溶液配制好后均需轉移至密閉性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C貯存。3-MCPD標準儲備液（1000 mg/L）：準確稱取3-MCPD標準品10 mg（精確至0.01 mg）于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，并定容至刻度，混勻。保存期為2年。3-MCPD標準中間液（10 mg/L）：準確移取3-MCPD儲備溶液0.5 mL于50 mL容量瓶中，用正己

4、烷稀釋至刻度，混勻。保存期為1年。3-MCPD標準工作液（1 mg/L）：準確移取3-MCPD中間溶液0.5 mL于50 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為6個月。d5-3-MCPD標準工作液（10 mg/L）：準確移取內標標準品d5-3-MCPD儲備溶液0.5 mL于50 mL棕色容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為1年。3-MCPD系列標準工作溶液：分別吸取3-MCPD標準工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃試管中，分別加入d5-3-MCPD標準工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2 mL，配

5、制成含3-MCPD質量分別10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和d5-3-MCPD質量為200 ng的系列標準工作溶液。臨用現(xiàn)配。材料ExtrelutTM 20硅藻土，或相當?shù)墓柙逋?。儀器和設備氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（GC-MS）。電子天平：感量為1 mg和0.01mg。旋轉蒸發(fā)儀。恒溫箱或其他恒溫加熱器。渦漩混合器。氣密針，1.0 mL。玻璃層析柱：柱長 40 cm，柱內徑 2 cm。分析步驟試樣制備液態(tài)試樣搖勻后直接進行提取，基質均勻的半固態(tài)試樣和粉狀固態(tài)直接進行提取， 其他試樣需勻漿后進行提取。試樣提取液態(tài)試樣稱取試樣4 g（精確到0.001g）于

6、50 mL燒杯中，加入d5-3-MCPD標準工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化鈉溶液（200 g/L）至8 g，超聲混勻5 min，待凈化。湯料、固體與半固體植物水解蛋白等稱取試樣4 g（精確到0.01g）于50 mL燒杯中，加入d5-3-MCPD標準工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化鈉溶液（200 g/L）6 g，超聲混勻5 min，待凈化。香腸、奶酪、面粉、面包、咖啡等稱取試樣4 g（精確到0.001g）于50 mL燒杯中，加入d5-3-MCPD標準工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化鈉溶液（200 g/L）10 g，超聲提取10 min，以5000 r/min離心1

7、0 min，移取上清液，待凈化。試樣凈化取ExtrelutTM20硅藻土5 g，加入制備好的提取液，充分混勻。另取5 g ExtrelutTM20硅藻土裝入層析柱中（層析柱下端填以玻璃棉）。將提取液與硅藻土的混合物裝入層析柱中，上層加1 cm高度的無水硫酸鈉。將10 mL無水乙醚倒入玻璃層析柱中，清洗整個層析柱，棄去 流出液。放置10 min后，用正己烷-乙醚溶液（9：1，體積比）40 mL淋洗非極性組分，并棄去。用150 mL乙醚洗脫3-MCPD（流速約為8 mL/min），收集流出液，加入15 g無水硫酸鈉，混勻以吸收水分，放置10 min后過濾。濾液于35 C下旋轉蒸發(fā)至近干，用2 mL

8、正己烷溶解殘渣，并轉移至密閉性好的透明具塞玻璃試管中。衍生化用氣密針向凈化液中加入七氟丁?；溥?.04 mL，立即密塞，渦旋混合30 s，于70 C保溫20 min。取出放至室溫，加入2 mL氯化鈉溶液（200 g/L），旋渦混合30 s，靜置使水相和正己烷相分層。取出正己烷相，加入約0.3 g無水硫酸鈉進行干燥，將溶液轉移至氣相進樣小瓶中，供GC-MS測定。同時做3-MCPD系列標準工作溶液的衍生化?？瞻自嚇尤芤褐苽浞Q取與試樣相同質量的氯化鈉溶液（200 g/L）或空白基質樣品于50 mL燒杯中，以下步驟按5.2、5.3和5.4與試樣同時處理。以考察系統(tǒng)空白。儀器參考條件氣相色譜質譜聯(lián)用儀

9、參考條件色譜柱：DB-5MS毛細管色譜柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。載氣：氦氣；載氣流速：1 mL /min。 進樣口溫度：250 C，進樣方式：不分流進樣；不分流時間：0.5 min；進樣體積：1 L。程序升溫：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min 。質譜參考條件電離方式：電子轟擊源（EI）；電離能量：70 eV。檢測方式：選擇反應離子檢測（SIM）。溶劑延遲時間：5 min。離子源溫度: 250 C；傳輸線溫度：280 C；四級桿溫度：150 C。電子倍增器電壓：1000 eV。監(jiān)測離子：3-MCPD

10、定量離子m/z 253，定性離子m/z 275、289、291；d5-3-MCPD定量離子m/z 257，定性離子m/z 278、294、296。標準曲線的制作將3-MCPD系列標準工作溶液經衍生化處理后的溶液分別注入氣相色譜質譜聯(lián)用儀中進行測定，得到3-MCPD和d5-3-MCPD的色譜峰峰面積，以3-MCPD系列標準工作溶液中的3-MCPD和d5-3-MCPD的質量比為橫坐標，以3-MCPD和d5-3-MCPD的峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入氣相色譜質譜聯(lián)用儀中進行測定，得到峰面積，根據(jù)標準曲線得到試樣溶液中3-MCPD的含量，平行測定次數(shù)不少于兩次。6 分析

11、結果的表述試樣中3-MCPD含量按公式（1）計算： （1）式中：X 試樣中3-MCPD的含量，單位為微克每千克（g/kg）或微克每升（g/L）；A 試樣溶液中3-MCPD色譜峰與d5-3-MCPD色譜峰的峰面積比值對應的3-MCPD的質量，單位為納克（ng）； F 試樣稀釋倍數(shù)；M 試樣的取樣量，單位為克（g）。以重復性條件下獲得的兩次獨立測XX果的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值不得超過算術平均值的20 %。其他按照本標準規(guī)定的取樣量，3-氯-1，2-丙二醇的檢出限為5 g/kg。第二法 食品中氯丙醇多組分含量的測定同位素稀釋氣相色譜

12、質譜法原理本標準采用同位素稀釋技術，以d5-3-氯-1， 2-丙二醇（d5-3-MCPD）、d5-2-氯-1， 3-丙二醇（d5-2-MCPD）、d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1，3-DCP）和 d5-2， 3-二氯-2-丙醇（d5-2，3-DCP）為內標。試樣中加入混合內標溶液，以氯化鈉溶液提取，采用硅藻土固相萃取小柱凈化，用正己烷淋洗去除非極性組分雜質，用乙酸乙酯醚洗脫氯丙醇。洗脫液濃縮后用七氟丁?；溥蜻M行衍生化反應。以氣相色譜質譜聯(lián)用儀測定，采用選擇離子監(jiān)測（SIM）模式進行質譜掃描，內標法定量。試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水

13、。試劑乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。正己烷（C6H14）：色譜純。氯化鈉（NaCl）。無水硫酸鈉（Na2SO4）。七氟丁?；溥颍–7H3F7N2O，CAS號：32477-35-3，縮寫為HFBI）。試劑的配制氯化鈉溶液（200 g/L）：稱取氯化鈉20 g，加入80 mL水，攪拌使氯化鈉充分溶解。標準品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）標準品（C3H7ClO2）：CAS編號96-24-2，純度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）標準品（C3D5H2ClO2）：純度98%。2-氯-1，3-丙二醇（2-MCDP）標準品（C3H7ClO2）：CAS編號497-04-1

14、，純度98%。d5-2-氯-1，3-丙二醇（d5-2-MCDP）標準品（C3D5H2ClO2）：純度98%。1，3-二氯-2-丙醇（1，3-DCP）標準品（C3H6Cl2O）：CAS編號96-23-1，純度98%。d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1， 3-DCP）標準品（C3D5HCl2O）：純度98%。2，3-二氯-1-丙醇（2，3-DCP）標準品（C3H6Cl2O）：CAS號編號616-23-9，純度98%。d5-2，3-二氯-1-丙醇（d5-2，3-DCP）標準品（C3D5HCl2O）：純度97%。標準溶液的配制 標準溶液配制好后均需轉移至密閉性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C貯

15、存。氯丙醇及氘代氯丙醇標準儲備液（1000 mg/L）：分別準確稱取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP、2，3-DCP、d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標準品10 mg（精確至0.01 mg）于8個10 mL容量瓶中，分別用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混勻。保存期為2年。氯丙醇標準中間液（10 mg/L）：分別準確移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP標準儲備溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻。保存期為1年。氯丙醇混合標準工作液（1 mg/L）：準確移取3-MCPD、2-MCPD、1，3

16、-DCP和2，3-DCP標準中間液各1 mL于10 mL容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為6個月。氯丙醇混合內標標準工作液（10 mg/L）：準確移取d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標準儲備溶液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷溶液稀釋至刻度，混勻。保存期為6個月。氯丙醇系列標準工作溶液的制備：分別吸取氯丙醇混合標準工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃試管中，分別加入混合內標標準工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2mL，混勻，配制成含各氯丙醇質量分

17、別10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和各氯丙醇內標質量為200 ng的系列標準工作溶液。臨用現(xiàn)配。材料硅藻土固相萃取小柱（規(guī)格為5 g或10 g），或相當?shù)漠a品。儀器和設備氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（GC-MS）。電子天平：感量為1 mg和0.01mg。旋轉蒸發(fā)儀。恒溫箱或其他恒溫加熱器。渦漩混合器。氣密針，1.0 mL。分析步驟試樣制備液態(tài)試樣搖勻后直接進行提取，基質均勻的半固態(tài)試樣和粉狀固態(tài)直接進行提取， 其他試樣需勻漿后進行提取。試樣提取液態(tài)試樣稱取試樣4 g（精確到0.001g）于50 mL燒杯中，加入氯丙醇混合內標標準工作液（10 mg/L）20

18、 L，超聲混勻5 min，待凈化。半固態(tài)及固態(tài)試樣稱取試樣4 g（精確到0.001g）于15 mL玻璃離心管中，加入氯丙醇混合內標標準工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化鈉溶液（200 g/L）4 g，超聲提取10 min，以5000 r/min離心10 min，移取上清液，再重復提取1次，合并上清液。試樣凈化將上清液全部轉移至硅藻土固相萃取小柱中，平衡10 min。以10 mL正己烷淋洗非極性雜質，棄去流出液，以15 mL乙酸乙酯洗脫氯丙醇，收集洗脫液于玻璃離心管中，以氮氣濃縮至近干（切忌濃縮至全干），以2 mL正己烷溶解殘渣，并轉移至密閉性好的透明具塞玻璃試管中，待衍生化。衍生化用氣

19、密針向凈化液中加入七氟丁?；溥?.04 mL，立即密塞，渦旋混合30 s，于70 C保溫20 min。取出冷卻至室溫，加入氯化鈉溶液（200 g/L）2 mL，旋渦混合30 s，使水相和正己烷相分層。轉移正己烷相，加入約0.3 g無水硫酸鈉進行干燥，轉移溶液至進樣小瓶中，供GC-MS測定。同時做系氯丙醇列標準工作溶液的衍生化?？瞻自嚇尤芤褐苽浞Q取與試樣相同質量的氯化鈉溶液（200 g/L）或空白基質樣品，以下步驟按12.2、12.3和12.4與試樣同時處理。考察系統(tǒng)空白。儀器參考條件氣相色譜質譜聯(lián)用儀參考條件色譜柱：DB-5MS毛細管色譜柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。載氣

20、：氦氣；載氣流速：1 mL /min。 進樣口溫度：250 C；進樣方式：不分流進樣；不分流時間：0.5 min；進樣體積：1 L。程序升溫：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min 。質譜參考條件電離方式：電子轟擊源（EI）；電離能量：70eV。檢測方式：選擇反應離子檢測（SIM）。溶劑延遲時間：5 min。離子源溫度: 250 C；傳輸線溫度：280 C；四級桿溫度：150 C。電子倍增器電壓：1000 eV。監(jiān)測離子：3-MCPD定量離子m/z 253 ，定性離子m/z 275、89、 291；2-MCPD定量離子m/z

21、253 ，定性離子m/z 75、289、291；d5-3-MCPD定量離子m/z 257，定性離子m/z 278、294、296；d5-2-MCPD定量離子m/z 257，定性離子m/z 79、294、296；1，3-DCP定量離子m/z 75，定性離子m/z 77、275、277；2，3-DCP定量離子m/z 75，定性離子m/z 77、111、263；d5-1，3-DCP定量離子m/z 79，定性離子m/z 81、278、280；d5-2，3-DCP定量離子m/z 79，定性離子m/z 81、116、257。標準曲線的制作將氯丙醇系列標準工作溶液經衍生化處理后的溶液分別注入氣相色譜質譜聯(lián)用

22、儀中進行測定，得到3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP與d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的色譜峰峰面積，以各氯丙醇和其對應的氘代氯丙醇的質量比為橫坐標，以各氯丙醇和其對應的氘代氯丙醇的峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入氣相色譜儀中，測定3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP和和d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的色譜峰面積，平行測定次數(shù)不少于兩次。分析結果的表述試樣中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的含量

23、，按公式（2）計算含量： （2）式中：X 試樣中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的含量，單位為微克每千克（g/kg）；A 試樣色譜峰與內標色譜峰的峰面積比值對應的氯丙醇的質量，單位為納克（ng）； f試樣稀釋倍數(shù)；m試樣的取樣量，單位為克（g）。以重復性條件下獲得的兩次獨立測XX果的算術平均值表示，結果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測XX果的絕對差值不得超過算術平均值的20 %。其他按照本標準規(guī)定的取樣量，3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的檢出限均為5 g/kg。第三法 食品中氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）總含量的測定氣相色

24、譜質譜法原理試樣中加入氘代氯丙醇酯，以正己烷提取出試樣中的氯丙醇酯。向提取液中加入甲醇鈉/甲醇溶液進行酯鍵斷裂反應，使提取液中的氯丙醇酯轉化為氯丙醇和相應的脂肪酸甲酯，以冰醋酸終止反應。用正己烷萃取去除脂肪酸甲酯和其他脂溶性雜質，用氯化鈉溶液將反應生成的氯丙醇提取出來。提取液以硅藻土小柱進行凈化，用正己烷淋洗去除提取液中的非極性組分，以乙酸乙酯為洗脫液洗脫氯丙醇。以七氟丁?；溥蜻M行衍生化反應。采用氣相色譜質譜聯(lián)用儀檢測，采用選擇離子監(jiān)測（SIM）模式進行質譜掃描，內標法定量。試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。試劑甲醇（CH4O）。叔丁基甲基

25、醚（C5H12O）。甲醇鈉（CH3ONa）。冰醋酸（CH3COOH）：優(yōu)級純。乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。正己烷（C6H14）：色譜純。無水硫酸鈉（Na2SO4）。氯化鈉（NaCl）七氟丁?；溥颍–7H3F7N2O）：CAS編號32477-35-3。試劑的配制氯化鈉溶液（200 g/L）：稱取氯化鈉20 g，加入80 mL水，攪拌使氯化鈉充分溶解。10%硫酸鈉溶液：稱取無水硫酸鈉10 g，加水90 mL，攪拌并充分混勻00 mL。叔丁基甲基醚-乙酸乙酯溶液（8：2，體積比）：量取40 mL叔丁基甲基醚，加入10 mL乙酸乙酯，混勻。甲醇鈉-甲醇溶液（0.5 mol/L）：稱取2.7 g

26、甲醇鈉，加入50 mL甲醇，攪拌并充分混勻。標準品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）標準品（C3H7ClO2）：CAS編號96-24-2，純度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）標準品（C3D5H2ClO2）：純度98% 。2-氯-1，3-丙二醇（2-MCDP）標準品（C3H7ClO2）：CAS編號497-04-1，純度98%。d5-2-氯-1，3-丙二醇（d5-2-MCDP）標準品（C3D5H2ClO2）：純度98%。1，3-二氯-2-丙醇標準品（1，3-DCP）（C3H6Cl2O）：CAS編號96-23-1，純度98%。d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1， 3

27、-DCP）標準品（C3D5HCl2O）：純度98%。2，3-二氯-1-丙醇（2，3-DCP）標準品（C3H6Cl2O）：CAS號編號616-23-9，純度98%。d5-2，3-二氯-1-丙醇（d5-2，3-DCP）標準品（C3D5HCl2O）：純度97%。3-氯-1，2-丙二醇棕櫚酸酯（3-MCPD棕櫚酸酯）標準品（C19H37ClO3）：CAS編號30557-04-1，純度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇棕櫚酸酯（d5-3-MCPD棕櫚酸酯）標準品（C19 D5H32ClO3）：純度98%。標準溶液的制備 標準溶液配制好后均需轉移至密閉性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C貯存。氯丙醇標

28、準儲備液（1000 mg/L）：分別準確稱取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP、d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標準品10 mg（精確到0.01 mg）于8個10 mL容量瓶中，分別用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混勻。保存期為2年。氯丙醇標準中間液（10 mg/L）：分別準確移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP標準儲備溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻。保存期為1年。氯丙醇混合標準工作液（1 mg/L）：準確移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP

29、標準中間液各1 mL于10 mL容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為6個月。氯丙醇混合內標標準工作液（10 mg/L）：準確移取d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標準儲備液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷溶液稀釋至刻度，混勻。保存期為1年。氯丙醇酯標準儲備液（1000 mg/L，以氯丙醇計）：分別準確稱取3-MCPD棕櫚酸酯和d5-3-MCPD棕櫚酸酯標準品各32 mg（精確到0.01 mg）于2個10 mL棕色容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混勻。保存期為2年。氯丙醇酯標準工作液（10 mg/L，以氯丙醇計）：分別準確

30、移取3-MCPD棕櫚酸酯和d5-3-MCPD棕櫚酸酯標準儲備溶液0.1 mL于2個10 mL棕色容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為1年。系列標準工作溶液的制備：分別吸取氯丙醇混合標準工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃試管中，分別加入氯丙醇混合內標標準工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2 mL，混勻，配制成含各氯丙醇質量分別10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和各氯丙醇內標質量為200 ng的系列標準工作溶液。臨用現(xiàn)配材料硅藻土固相萃取小柱（規(guī)格為5 g），或相當?shù)?/p>

31、產品。儀器和設備氣相色譜-質譜聯(lián)用儀（GC-MS）。電子天平：感量為1 mg和0.01mg。旋轉蒸發(fā)儀。恒溫箱或其他恒溫加熱器。渦漩混合器。氣密針，1.0 mL。分析步驟試樣制備液態(tài)試樣搖勻后直接進行提取，基質均勻的半固態(tài)試樣和粉狀固態(tài)直接進行提取， 其他試樣需勻漿后進行提取。試樣提取植物油、動物油等油脂類試樣稱取試樣0.1 g （精確至0.001g），加入d5-3-MCPD棕櫚酸酯60 L、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標準工作液（10 g/ mL）各20 L。面包等烘烤類固體試樣稱取試樣4 g（精確至0.001g），加入d5-3-MCPD棕櫚酸酯標準工作液（

32、10 g/ mL，以d5-3-MCPD計）60 L。加入4 mL正己烷，充分振搖混勻，超聲萃取20 min，靜置分層后，轉移出上層正己烷相。重復提起3次，合并正己烷相，加入d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標準工作液（10 g/ mL）各20 L，以氮氣濃縮至約1 mL。乳與乳制品、烹調加工后的膳食樣品等稱取試樣2 g（精確至0.001g），加入d5-3-MCPD棕櫚酸酯標準工作液（10 g/ mL，以d5-3-MCPD）60 L。用2 mL正己烷超聲萃取20 min，靜置分層后，轉移出上層正己烷相。重復提取3次，合并正己烷相，加入d5-2-MCPD、d5-1，3-

33、DCP和d5-2，3-DCP標準工作液（10 g/ mL）各20 L，以氮氣濃縮至約1 mL。酯鍵斷裂反應向試樣提取液中加入500 L叔丁基甲基醚-乙酸乙酯溶液（8：2，體積比）和1 mL 甲醇鈉-甲醇溶液（0.5 mol/L），蓋緊蓋子，渦旋振蕩30 s。室溫反應4 min 后，加入100 L 冰醋酸終止反應。加入3 mL 10%硫酸鈉溶液和3 mL 正己烷，渦旋振蕩30 s ，靜置1 min，棄去上層正己烷相，再用3 mL正己烷萃取一次，棄去上層正己烷相，下層的水相溶液待凈化。試樣凈化將水相溶液倒入5g 硅藻土小柱中，平衡15 min后，用15 mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，在洗脫液中加入

34、無水硫酸鈉4 g ， 放置10 min 后過濾，濾液轉移至12 mL透明玻璃瓶樣品瓶中，于35氮氣濃縮至近干（切忌濃縮至全干），用2 mL正己烷溶解殘渣，渦旋混勻，待進行衍生化反應。衍生化用氣密針向凈化液中加入七氟丁?；溥?.04 mL，立即密塞。渦旋混合后，于70保溫20 min。取出放至室溫，加氯化鈉溶液（200 g/L）2 mL，旋渦混合30 s，使兩相分層，取出上層有機相，加無水硫酸鈉0.3 g吸水干燥，將溶液轉移至樣品小瓶中，供GC-MS測定。同時做系列標準工作溶液的衍生化反應空白試樣溶液制備稱取與試樣相同質量的10%硫酸鈉溶液或空白基質樣品，以下步驟按19.2、19.3、19.4

35、和19.5與試樣同時處理，以考察系統(tǒng)空白。儀器參考條件氣相色譜參考條件色譜柱：DB-5MS柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。載氣：氦氣；載氣流速：1 mL /min。 進樣口溫度：250 ；進樣方式：不分流進樣，不分流時間為0.5 min；進樣體積：1 L。程序升溫：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min。質譜參考條件電離方式：電子轟擊源（EI）；電離能量：70 eV。檢測方式：選擇反應離子檢測（SIM）。溶劑延遲時間：5 min。離子源溫度：250 ；傳輸線溫度：280 ；四級桿溫度：150 。電子倍增器電壓

36、：1000 V。監(jiān)測離子：3-MCPD衍生物定量離子m/z 253 ；定性離子m/z 275、289、291；2-MCPD衍生物定量離子m/z 253 ；定性離子m/z 75、289、291；d5-3-MCPD衍生物定量離子m/z 257； 定性離子m/z 278、294、296；d5-2-MCPD衍生物定量離子m/z 257； 定性離子m/z 79、294、296；1，3-DCP衍生物定量離子m/z 75 ；定性離子m/z 77、275、277；2，3-DCP衍生物定量離子m/z 75；定性離子m/z 77、111、263；d5-1，3-DCP衍生物定量離子m/z 79；定性離子m/z 81

37、、278、280；d5-2，3-DCP衍生物定量離子m/z 79；定性離子m/z 81、116、257。標準曲線的制作將系列標準工作溶液分別注入氣相色譜質譜聯(lián)用儀中，測定3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP和d5-2，3-DCP和d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP相應的色譜峰面積，以標準工作液的質量比為橫坐標，以響應值峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入氣相色譜質譜聯(lián)用儀中，得到峰面積，根據(jù)標準曲線得到試樣溶液中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP 的含量，平行測定次數(shù)不少于兩次。分析結果的表述試樣中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP與d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的峰面積比作線性回歸，由回歸方程計算3-MCPD酯、2-MCPD酯、1，3-