綿茵陳藥材高效液相色譜指紋圖譜研究

1、綿茵陳藥材高效液相色譜指紋圖譜研究【摘要】目的建立綿茵陳藥材的HPL指紋圖譜，為其質(zhì)量控制提供根據(jù)。方法采用反相高效液相色譜法，并進(jìn)展相應(yīng)的方法學(xué)考察，對(duì)不同產(chǎn)地和批次綿茵陳藥材進(jìn)展質(zhì)量評(píng)價(jià)。結(jié)果采用Krasil182504.6，5色譜柱，流動(dòng)相以乙腈和體積分?jǐn)?shù)為0.2的磷酸水溶液進(jìn)展梯度洗脫，柱溫35，流速1.0Lin-1，檢測波長327n；該方法穩(wěn)定性、精細(xì)度、重復(fù)性良好,可用于綿茵陳藥材的指紋圖譜測定；不同批次的綿茵陳藥材在圖譜上存在一定的差異。結(jié)論該結(jié)果可為綿茵陳藥材的質(zhì)量控制提供根據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】綿茵陳；高效液相色譜法；指紋圖譜Abstrat:bjetiveTestablishHPLf

2、ingerprintsfHerbaArteisiaespariaeandfferseinfratinfrthequalityntrlfHerbaArteisiaespariae.ethdsandResultsThefingerprintsfHerbaarteisiaespariaefrdifferenthabitatsandbathesereestablishedbyreversed-phasehighperfraneliquidhratgraphy.ThesapleasanalyzednaKrasil182504.6，5lunundergradientelutin.Thebilephasen

3、sistedfaetnitrileandH2(0.2%H3P4)andtheflrateas1.0Lin-1.Thedetetinavelengthas327n.Thestability,aurayandredibilityfthisethderegd.nlusinThisethdffersseinfratinfrthequalityntrlfHerbaArteisiaespariae.Keyrds:HerbaArteisiaespariae;HPL;HPL;fingerprints茵陳為菊科植物濱蒿Arteisiaspariaaldst.etKit.或茵陳蒿Arteisiaapillarie

4、sThunb的枯燥地上局部。其中春季采收的習(xí)稱“綿茵陳，具有清濕熱、退黃疸的成效1。文獻(xiàn)報(bào)道，不同產(chǎn)地和采收期的茵陳藥材質(zhì)量差異較大2-3。本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相色譜法對(duì)綿茵陳藥材建立指紋圖譜，并進(jìn)展相應(yīng)的方法學(xué)考察，初步考察市售不同批次綿茵陳藥材的質(zhì)量差異，為綿茵陳藥材的質(zhì)量控制提供根據(jù)。2方法與結(jié)果2.1品種鑒定指紋圖譜所用的不同批次綿茵陳藥材均購于廣州市藥材公司、廣州清平藥材市嘗廣州致信藥業(yè)，其產(chǎn)地分別為江西市售1、山西市售2、山東市售3、安徽市售4、河南市售5、山西市售6、陜西市售7、山東市售8、寧夏市售9、安徽市售10。根據(jù)?中國藥典?2022版一部茵陳性狀項(xiàng)下的規(guī)定，與?中華人民共

5、和國藥典中藥彩色圖譜集?、?新編中藥志?中照片與描繪，經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥鑒定教研室劉基柱教師鑒定為菊科植物濱蒿Arteisiaspariaaldst.etKit或茵陳蒿ArteisiaapillariesThunb春季采收的枯燥幼苗。2.2供試品溶液的制備取本品粉末約0.5g，精細(xì)稱定，參加體積分?jǐn)?shù)為80的乙醇100L，置水浴上加熱回流1h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)皿w積分?jǐn)?shù)為80的乙醇溶解，置25L棕色量瓶中，加體積分?jǐn)?shù)為80的乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.3對(duì)照品溶液的制備取綠原酸對(duì)照品適量，精細(xì)稱定,置棕色量瓶中，加甲醇制成每1L含40g的溶液，即得。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.

6、2.4色譜條件Krasil182504.6，5色譜柱，流動(dòng)相采用二元體系，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為體積分?jǐn)?shù)為0.2的磷酸水溶液，梯度洗脫程序：0in5A,10in10%A，45in25A；柱溫35，流速1.0Lin-1，檢測波長327n。2.5指紋圖譜試驗(yàn)的方法學(xué)驗(yàn)證2.5.1綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取綠原酸對(duì)照品溶液40.8g/L，分別進(jìn)樣2、4、6、8、10、16、20L，按照上述色譜條件進(jìn)展測定，以綠原酸質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程為：Y=2553.1X+2.8847,r=0.9999，說明綠原酸在0.08160.816g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.5.2穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品溶

7、液，分別在0、1、2、4、8和12h進(jìn)展檢測，直觀指紋圖譜全貌無明顯變化，經(jīng)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件國家藥典委員會(huì)2022A，以下同計(jì)算，與對(duì)照?qǐng)D譜比擬，相似度均大于0.9，各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保存時(shí)間的RSD分別為1.41、1.22，說明在12h內(nèi)供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性。2.5.3精細(xì)度試驗(yàn)取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)展檢測，直觀指紋圖譜全貌無明顯變化，經(jīng)相似度評(píng)價(jià)，相似度均大于0.9，各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保存時(shí)間的RSD分別為0.42、0.31，說明該方法精細(xì)度良好。2.5.4重復(fù)性試驗(yàn)取同一種藥材樣品6份，按照供試品溶液的制備和檢測方法進(jìn)展檢測，直觀指紋圖譜全貌

8、無明顯變化，經(jīng)相似度評(píng)價(jià)，相似度均大于0.9，各共有峰相對(duì)峰面積和相對(duì)保存時(shí)間的RSD分別為1.13、1.20，說明該方法重復(fù)性良好。2.6HPL指紋圖譜建立與相似度評(píng)價(jià)取不同批次市售綿茵陳藥材共10批，按照供試品溶液的制備和檢測方法進(jìn)展檢測，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)展分析，以10批藥材的均值生成對(duì)照?qǐng)D譜，經(jīng)相似度評(píng)價(jià)軟件計(jì)算不同藥材與對(duì)照?qǐng)D譜之間的相似度。結(jié)果說明各批藥材相似度均在0.9以上，證明相似度良好見圖1。比擬獲得的色譜圖，共確定15個(gè)共有峰，其中4號(hào)峰為綠原酸峰，將其作為參照物峰，理論板數(shù)均不低于6000見表1。略3討論3.1綿茵陳藥材的化學(xué)成分主要包括香豆素類、色原酮類、黃酮類、香豆酸及其他有機(jī)

9、酸類等3，其中以綠原酸為主的有機(jī)酸類及香豆素類成分為主要有效成分，因此選擇這些成分為本品色譜指紋圖譜的分析對(duì)象。3.2檢測波長的選擇鑒于綿茵陳中的主要有效成分為綠原酸及香豆素類，均在327n左右有最大吸收，且其他一些黃酮類成分在該波長下也有一定的吸收，同時(shí)對(duì)不同波長(203、254、320、327n)的HPL圖譜進(jìn)展比擬，結(jié)果證明在327n波長下基線平，峰形較好，各峰峰面積值最大，因此確定檢測波長為327n。3.3柱溫的選擇考察了15、25、35柱溫對(duì)色譜別離效果的影響，結(jié)果說明，15時(shí)出峰較晚，基線不平，25和35時(shí)別離效果無明顯區(qū)別，35時(shí)別離效果佳，同時(shí)保存時(shí)間較短，因此最終確定柱溫為35。3.4實(shí)驗(yàn)中還考察了不同廠家和型號(hào)的色譜柱以及不同的HPL色譜儀器對(duì)綿茵陳藥材指紋圖譜的影響，結(jié)果各種色譜柱在不同的儀器上所測得的圖譜沒有明顯差異。說明該實(shí)驗(yàn)所建立的方法具有較好的系統(tǒng)適應(yīng)性和穩(wěn)定性。3.5實(shí)驗(yàn)中共對(duì)13批不同綿茵陳藥材進(jìn)展了考察，相似度計(jì)算結(jié)果發(fā)現(xiàn)有3批市售5、市售8和市售13相似度小于0.9。市售5綿茵陳各成分含量非常低且出峰個(gè)數(shù)較少；市售8和市售13綿茵陳在各峰比例上與對(duì)照?qǐng)D譜存在較大區(qū)別，而且綠原酸含量較低分別為0.10和0.03。結(jié)果提示不同批次的綿茵陳藥材在質(zhì)量上存在較大的差異。【參考文獻(xiàn)】1國家藥典委員會(huì).中