實驗一abo及rh血型鑒定20133

1、實驗一ABO血型鑒定和Rh血型鑒定臨床檢驗診斷學(xué)實驗室1實驗內(nèi)容一、5%紅細胞懸液的配制二、ABO血型鑒定（試管法、紙片法）三、Rh血型鑒定?2一、5%紅細胞懸液的配制原理：使用一定量的稀釋液（生理鹽水）稀釋壓積紅細胞，遵循抗原抗體結(jié)合的量比關(guān)系，獲出最佳結(jié)果。器材:小試管（玻璃及塑料皆可）、加樣槍、試管架、離心機、記號筆、顯微鏡。試劑:生理鹽水。標本:抗凝或非抗凝靜脈血。 3操作1、全血2ml 1000g離心5min，吸取分離上清至另一干凈試管（備用）；2、壓積加生理鹽水約23ml，充分搖勻或吸管輕輕吹打混勻，再次離心去掉上清液；3、重復(fù)離心（1000g，60s）洗滌紅細胞3次，去掉上清液制

2、備壓積紅細胞；4、取1滴壓積紅細胞于1支干凈的小試管中，在其中加入19滴生理鹽水，用小吸管輕輕吹打混勻，就是5%的紅細胞懸液。 4目的：掌握ABO正反定型的原理、方法。原理：紅細胞凝集試驗，通過正、反定型鑒定ABO血型。正定型：用已知血型特異性抗體（抗-A、抗-B）來測定紅細胞上有無相應(yīng)的抗原；反定型：用已知血型試劑紅細胞測定血清中有無相應(yīng)的抗體。二、ABO鑒定56器材:記號筆、小玻璃試管、滴管、試管架、離心機、鑒定紙板、顯微鏡。試劑:1. ABO血型抗體：抗A、抗B(-A、-B)；2試劑紅細胞：35Ac、Bc及Oc。 3. 生理鹽水。標本:抗凝或非抗凝靜脈血。7操作（試管法）(1)標記試管：

3、正定型：取潔凈小試管2支，分別標明A、B；反定型：取3支小試管，標記Ac、Bc、Oc。(2)配5%懸浮紅細胞：取靜脈血2滴于小試管中，加2ml生理鹽水，混勻，1000g離心60s，棄上清；重復(fù)3次。取管底1滴壓積加19滴生理鹽水，即為5%懸紅。(3)加樣：正定型管中分別加入1滴試劑和1滴懸紅，反定型管中分別加入2滴血清和1滴試劑紅細胞。（4）離心：1000g離心15秒。 (5)結(jié)果：輕搖試管,觀察有無凝集或溶血現(xiàn)象。8 4+ 紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 3+ 紅細胞凝集成大小塊，血清清晰。 2+ 紅細胞凝塊分散成許多小塊，血清清晰。 l+ 肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞。鏡下可見

4、數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞。mf 混合凝集外觀（mixed field）指鏡下可見少數(shù)紅細胞凝集，而極大多數(shù)紅細胞仍呈分散分布。 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。紅細胞凝集強度判斷標準9試管法結(jié)果判定10表l ABO血型正反定型結(jié)果試劑血清+受檢紅細胞 受檢血清+試劑紅細胞 （正定型） （反定型） -A -B 受檢血型 Ac Bc Oc A B O AB 判斷標準11操作：玻片法(鑒定紙板) (1)潔凈玻片(鑒定紙板)一張。標-A、-B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B試劑1滴，再加受檢者10紅細胞懸液l滴，混勻。 (2)另取潔凈玻片(或鑒定紙板)一張。標Ac、Bc、Oc，

5、各加受檢血清2滴，再分別滴加Ac、Bc、Oc懸紅1滴。 (3)室溫輕轉(zhuǎn)動玻片(或鑒定紙板) ，使血清與細胞充分混勻，約2min肉眼觀察凝集(溶血)反應(yīng)。玻片試驗時可用低倍鏡觀察結(jié)果。 12正定型 反定型13注意事項1.試劑 2.懸紅 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗體 6.老年、兒童 7.污染14目的 掌握Rh血型鑒定的原理、方法。原理 Rh血型系統(tǒng)，包括四十幾個抗原，通常使用相應(yīng)的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五種Rh分型血清來檢查紅細胞抗原。在臨床輸血中一般只做D抗原的鑒定，被檢紅細胞和抗D血清凝集者為Rh陽性，不凝集者為Rh陰性。三 、 Rh血型鑒定15器材 小試管、滴管、試管架、記號筆、鑒定紙板、顯微鏡、離心機。試劑1.Rh抗血清：常用的為IgM抗抗D（其他為抗C、抗c、抗E、抗e）。2.己知Rh陽性和陰性的5紅細胞懸液各1份3.生理鹽水。標本 靜脈血。16操作(鹽水試管測試法)1.取單克隆抗-D（IgM）-C、-c、-E、-e試劑各1滴到5支試管中。2.每管各加1滴35待檢紅細胞懸液。3.充分混勻，以1000 g離心15秒。4.觀察結(jié)果：輕搖散開試管底部的細胞扣，用肉眼觀看凝集。5.判定結(jié)果1718注意事項1用抗D血清進行Rh血型鑒別時，結(jié)果為陰性，不能直接報告Rh陰性，需進一步檢測弱D型還是部分D型。2Rh血型鑒定應(yīng)嚴格控制溫度與時間，因Rh抗原、