DB2301∕T 104-2022 大豆根瘤菌固氮能力與共生匹配性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程

1、ICS 65.020.01CCS B 102301黑龍江省哈爾濱市地方標(biāo)準(zhǔn)DB2301/T 1042022大豆根瘤菌固氮能力與共生匹配性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程2022-07-18發(fā)布2022-08-17實(shí)施哈爾濱市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB 2301/T 1042022前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所農(nóng)業(yè)技術(shù)中心、哈爾濱市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站。本文件主要起草人：嚴(yán)君、王崇生、鄒文秀、陸

2、欣春、陳旭、許艷麗、居瀚尋、韓陽(yáng)。IDB 2301/T 1042022大豆根瘤菌固氮能力與共生匹配性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)程1范圍本文件規(guī)定了大豆根瘤菌固氮能力和共生匹配性評(píng)價(jià)的術(shù)語(yǔ)和定義，盆栽試驗(yàn)實(shí)施及評(píng)價(jià)原則，田間試驗(yàn)管理及評(píng)價(jià)原則和生產(chǎn)檔案。本文件適用于哈爾濱市行政區(qū)內(nèi)大豆種植區(qū)大豆根瘤菌固氮能力和共生匹配性評(píng)價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 9823糧油檢驗(yàn)植物油料餅粕總含氮量的測(cè)定GB 20287NY 410農(nóng)用微生物

3、菌劑根瘤菌肥料NY/T 1535肥料合理施用準(zhǔn)則微生物肥料NY/T 1536NY/T 1735DB2301/T 93微生物肥料田間試驗(yàn)技術(shù)規(guī)程及肥效評(píng)價(jià)指南根瘤菌生產(chǎn)菌株質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范高效大豆根瘤菌菌株篩選技術(shù)規(guī)程3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。根瘤菌共生固氮能力根瘤菌通過與豆科作物共生結(jié)瘤，將空氣中的氮?dú)廪D(zhuǎn)化為豆科植物可吸收利用的氨的能力。共生匹配性在大豆根系上形成具有固氮能力的有效根瘤。參比菌株已被認(rèn)可并廣泛使用的根瘤菌生產(chǎn)菌株，作為根瘤菌生產(chǎn)質(zhì)量控制的參照標(biāo)準(zhǔn)。4盆栽試驗(yàn)試驗(yàn)準(zhǔn)備基質(zhì)選用蛭石。蛭石過100目篩，去除大的顆粒和雜物，121條件下間歇性滅菌2次，每次1h，然后將滅菌

4、后的蛭石置于陰涼通風(fēng)處2d3d備用。盆缽用5%氯酸鈉或0.1%高錳酸鉀溶液消毒后用無菌水沖洗2次3次，將滅菌后的蛭石裝入盆缽中，澆適量無菌水備用。用無菌的蒸餾水將參比菌株和待測(cè)菌株，分別制備成菌體數(shù)量1.0109cfu/mL的接種液，接種液制備應(yīng)按照NY/T1735的規(guī)定1DB 2301/T 1042022執(zhí)行。選擇當(dāng)?shù)刂髟源蠖蛊贩N。大豆種子表面消毒后備用，大豆種子表面滅菌應(yīng)按照DB2301/T93的規(guī)定執(zhí)行。試驗(yàn)實(shí)施設(shè)置不接種、接種參比菌株和接種待測(cè)菌株處理。不接種處理：將已表面消毒的大豆種子播種于滅菌后的蛭石中，作為空白對(duì)照。接種參比菌株處理：將已表面消毒的大豆種子在參比菌株接種液中浸泡1

5、min2min后，移植到滅菌后的蛭石中。接種待測(cè)菌株處理：操作方法與接種參比菌株處理相同。每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。接種后每粒大豆種子上至少含有根瘤菌：小粒種子 10個(gè)，大粒種子10個(gè)，根瘤3 5菌活菌菌落計(jì)數(shù)應(yīng)按照NY410的規(guī)定執(zhí)行。大豆在晝溫/夜溫=25/20下培養(yǎng)，葉面光照強(qiáng)度7000lx8000lx，每天光照12h。每盆定植1株2株大豆。結(jié)瘤情況調(diào)查于大豆初花期，將大豆連根取出后用清水洗凈，觀察根系結(jié)瘤情況和根瘤菌的有效性。凡是肉眼可見的根瘤為結(jié)瘤，使用刀片將較大的根瘤切開，若根瘤內(nèi)部為粉紅色、紅色或褐色為有效瘤，白色或綠色為無效瘤。植株含氮量測(cè)定在完成4.3的同時(shí)，分別取不接種、接種參比菌

6、株和接種待測(cè)菌株處理下的大豆地上部分（即子葉痕以上），于105殺青5min10min，再在80 下烘干至恒重，測(cè)定每盆大豆地上植株干重和含氮量。計(jì)算植株總含氮量和待測(cè)接種菌株處理較不接種處理植株總氮量的增加量。植株含氮量測(cè)定應(yīng)按照GB/T9823中的規(guī)定執(zhí)行，植株含氮量計(jì)算應(yīng)符合NY/T1735中的規(guī)定。盆栽試驗(yàn)評(píng)價(jià)原則接種待測(cè)菌株處理與不接種處理相比，收獲大豆植株總氮量增加20%以上，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)達(dá)到顯著水平。總含氮量的增加量計(jì)算應(yīng)符合NY/T1735中的規(guī)定。5田間試驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)符合NY/T1536的規(guī)定。試驗(yàn)準(zhǔn)備試驗(yàn)地處理應(yīng)符合NY/T1536的規(guī)定，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)準(zhǔn)備所需的根瘤菌接種液的質(zhì)量應(yīng)符合 GB20287中的規(guī)定，大豆品種為當(dāng)?shù)刂髟源蠖蛊贩N。試驗(yàn)實(shí)施和田間管理試驗(yàn)實(shí)施、田間管理和計(jì)產(chǎn)等工作，應(yīng)按照NY/T1535和NY/T1536的規(guī)定執(zhí)行。田間試驗(yàn)評(píng)價(jià)原則接種待測(cè)根瘤菌菌株處理與不接種處理產(chǎn)量相比，籽粒產(chǎn)量增加10%以上，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)達(dá)到顯著水平；接種待測(cè)根瘤菌菌株處理與接種參比菌株處理相比，籽粒產(chǎn)量增加