pbmc和非貼壁細胞的rnascope熒光分析樣本準備與預(yù)處理第一部分

1、 本技術(shù)說明為使用 RNAscope 檢測試劑盒檢測外周血單核細胞（PBMC） 試 本技術(shù)說明為使用 RNAscope 檢測試劑盒檢測外周血單核細胞（PBMC） 試Aldrich）、SuperFrost plus 載玻片（Fisher） 和PBMC固定液（10%NBF）nical-user-安全說明書（SDS），第 PBMC收8.上下10 次重懸細胞團，將細胞懸液轉(zhuǎn)移試劑準個新的 15 mL1.3mLHistopaque1077（或其Ficoll 溶液15mL離心管中，溶液溫度升至室溫（8:）15mL2.通過將50CellPrep 細液（儲備在 20冷凍保存）1PBSPBS5ml50mL10.

2、室溫250RCF 分鐘（制動）11. 在不碰到細胞團的前提下吸出上清液，留下盡PBMC純5mL液15mL心管中室溫下用水平轉(zhuǎn)子（頭端搖動式）800RCF心 分鐘（使用最小的加制動）4.用移液器或吸取裝50mL5.1mLPBMC6.室溫250RCF 分鐘（制動）離心 分鐘收集細胞3.800RCF 分鐘室溫下空氣干燥載玻片 分鐘50%室溫孵育 分鐘去掉50%離心 分鐘收集細胞3.800RCF 分鐘室溫下空氣干燥載玻片 分鐘50%室溫孵育 分鐘去掉50%70%室溫孵育 分鐘去掉70%100%室溫孵育 分鐘100%醇，用新100%醇代替，室溫孵育 分鐘。3.40mL1PBS懸細胞，然后在室溫下以RCF

3、離心4. 在不碰到細胞團的前提下吸去上清，留下盡可能注：載玻片可以于 20 ) 100%至 個月1.5mLPBMC定液重懸細胞，輕輕地上下吹10 次完全吹散細胞團2.37水浴鍋中孵育 小時第 部分：84YIUVK HybEZ雜交爐40C1.250RCF 分鐘2. 吸去上清液，不要攪動細胞團10mLPBMC洗滌液重懸細胞，250RCF離 10mLPBMC保存液（70%EtOH）重懸細胞上下吹吸 10 次完全吹散細胞團100%37干燥 分鐘Immedge2-4 次。讓疏水圈完全干透 1 分鐘5.室溫下孵育 分鐘4)可保存 天1.用PBMC液調(diào)整1106/mL Hettich 細胞甩片機。如果使用其

4、他細胞離心系HybEZ加 2-4 滴蛋白酶 III。使用足夠的溶液重要提示 RNAscope 320293）RNAscope nical-2（細manualsHybEZ雜交爐40C下孵育 分鐘HybEZ加 2-4 滴蛋白酶 III。使用足夠的溶液重要提示 RNAscope 320293）RNAscope nical-2（細manualsHybEZ雜交爐40C下孵育 分鐘：白酶 III（每次一片）。不得使樣本變干。1PBS1PBS1PBS，室溫分鐘84YIUVK 技術(shù)開啟揭示 RNASCOPE 2.5ASSAY- 用戶手冊， 了解限制使用證或免責(zé)信息。Advanced Diagnostics,Inc保留在任何時候改變其產(chǎn)品和服務(wù)的權(quán)利來配合技術(shù)發(fā)展。本手冊可變更，恕不另行通知。雖然這本手冊已經(jīng)做好