肝細(xì)胞癌患者血清中生物標(biāo)記物研究

1、肝細(xì)胞癌患者血清中生物標(biāo)記物研究摘要目的：討論利用基于L-S技術(shù)的代謝組學(xué)方法診斷肝癌的可行性。方法：采用反向液相色譜-電噴霧質(zhì)譜RP-L/ESI-S檢測肝細(xì)胞癌(簡稱肝癌)患者和安康人血清中代謝物，利用主成分分析(priniplepnentanalysis,PA)對S數(shù)據(jù)進展形式識別。結(jié)果：與安康人相比，肝癌患者血清中牛磺酸和組氨酸含量減少，苯丙氨酸、酪氨酸含量增加。PA分析結(jié)果顯示肝癌患者可與安康人鑒別開來。結(jié)論：L-S代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合PA的方法具有靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好等優(yōu)點，有助于肝癌早期診斷。關(guān)鍵詞肝細(xì)胞癌；血清；代謝物組；L-S；主成分分析；形式識別中圖分類號R735.7文獻標(biāo)識碼文

2、章編號1674-4721202206a-085-02目前，臨床上診斷肝癌的主要方法為病理、影像和血清AFP檢查。這些檢測手段中，病理法屬于有創(chuàng)性檢查，對患者造成組織損傷，不能作為常規(guī)檢查方法；B超、T、磁共振成像對小肝癌灶檢出率較低；血清AFP檢查診斷肝癌靈敏度低，因此，建立一種無損、準(zhǔn)確、靈敏的肝癌診斷方法具有重要的臨床價值。代謝組學(xué)是一種通過考察生物體系受刺激或擾動后代謝產(chǎn)物隨時間的變化，并以此來研究生物體系代謝途徑的新技術(shù)1-2。代謝組學(xué)作為新興的學(xué)科，已成功應(yīng)用于疾病診斷、藥物作用模型的鑒別和確證、藥物作用機制研究等領(lǐng)域3-6。目前代謝組學(xué)分析中常用的兩種檢測手段是核磁共振NR技術(shù)和質(zhì)

3、譜S及其聯(lián)用技術(shù)。相比于NR靈敏度低、檢測動態(tài)范圍窄等弱點，現(xiàn)代S技術(shù)的優(yōu)勢是具有很高的靈敏度和專屬性，可以實現(xiàn)對多個化合物的同時快速分析與鑒定，現(xiàn)已成為生物分析中的首選方法。本研究采用L-S法檢測肝癌患者和安康人血清中代謝物，比擬分析兩組血清代謝物組的差異，同時利用PA對S數(shù)據(jù)進展形式識別，以期建立肝癌的診斷模型。1儀器與試劑1.1儀器Agilent1100型高效液相色譜儀，AgilentL/SDTrapXTPlus型質(zhì)譜儀、高壓二元梯度泵、二極管檢測器、自動進樣器、柱溫箱、hestatins化學(xué)工作站等美國Agilent公司，日立20PR-52D型高速冷凍離心機，電熱真空枯燥箱上海申光儀器

4、儀表，KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器昆山超聲儀器，illi-Q純化水制備系統(tǒng)(illipre公司)。甲醇、乙腈均為色譜純美國fisher公司。1.2樣品的采集分別采集30份男性肝癌患者以及30份安康男性無相關(guān)病史的安康人群)受試者靜脈血5l至促凝管中，室溫下靜置1h后在4、13000g離心10in，置-80貯存?zhèn)溆?。采血前禁?2h。肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)按照2001年中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會修訂的肝癌臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)8，上清液L-Sn分析。1.3L-S條件反向液相色譜RP-L，色譜柱：Prevail184.6250，5；流動相A：10甲酸銨緩沖液甲酸調(diào)PH4.0；B：0.1%甲酸乙腈，A與B梯度洗脫

5、：05in，B%1030，59in，B%3060，920in，B%6070，2025in，B%70100；柱溫：25；流速：0.8l/in；質(zhì)譜條件：ESI離子源，離子源溫度350，毛細(xì)管電壓3.5kV，霧化壓力285.8kPa，霧化壓力60.0Psi，枯燥氣流速11.0L/in，質(zhì)譜掃描范圍75800/z，正離子檢出形式。2結(jié)果2.1血清樣品檢測總離子流圖按照以上實驗方法，對血清樣本進展了分析測定，圖1中A、B分別是安康人和肝癌患者血清典型的L-S總離子流譜，圖中可見，正常人血清樣本的總離子流圖與肝癌患者血清樣本的總離子流圖有明顯區(qū)別。A為安康人血清；B為肝癌患者血清2.2肝癌的生物標(biāo)記物通

6、過L-S檢測，與正常人相比，肝癌患者血清中?；撬岷徒M氨酸含量減少，而苯丙氨酸、酪氨酸含量增加。?；撬崾侵匾目寡趸镔|(zhì)，曾有研究報道，其在肝硬化患者血清中含量增加，而肝癌患者血清中?；撬岷繘]有改變7，但筆者研究發(fā)現(xiàn)牛磺酸在肝癌患者血清中含量減少，推測牛磺酸的含量與肝癌病情程度有關(guān)，需要進一步研究。2.3形式識別分析利用PA對正常人和肝癌患者兩組血清L-S數(shù)據(jù)進展形式識別分析，得到相應(yīng)血清標(biāo)本的PA得分圖3DPASresplt)。得分圖中每一個點代表了一個標(biāo)本，見圖2。從圖2中可以直觀地看出各血清標(biāo)本在空間上的位置以及互相聚合程度，圖2中肝癌和安康人標(biāo)本顯著別離，說明兩者血清代謝物組確實存在顯

7、著差異。3討論為了討論利用代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合形式識別分析診斷肝癌的可行性，對肝癌患者血清L-S數(shù)據(jù)進展PA分析。結(jié)果說明肝癌患者可與安康人標(biāo)本100%區(qū)分開來，利用基于L-S代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合PA的形式識別方法診斷肝癌診斷結(jié)果可靠。有利于臨床早期診斷、早期治療肝癌。此外,由于代謝組學(xué)反響的是基因和蛋白表達(dá)終端的變化、是對基因組學(xué)和蛋白組學(xué)在代謝物研究上的放大，因此利用此技術(shù)診斷疾病更靈敏、快速。參考文獻1羅和古,丁杰,岳廣欣,等.大鼠肝郁脾虛證的代謝組學(xué)研究J.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報,2022,5(3):307-313.2JeffreyR,Idle1,FrankJ,GnzalezetablisJ.elletablis,2022,12(6):348-350.3laytn,T.A,Lindn,J.,lare,etal.PharaetabniphentypingandpersnalizeddrugtreatentJ.Nature,2022,440(7087):1073-1077.4黃成鋼.中藥研究的必然趨勢中藥復(fù)方系統(tǒng)研究J.中國藥學(xué)雜志,2000,35(7):4331.5周宏偉,譚鳳儀,鐘音,等.代謝組學(xué)及其在微生物領(lǐng)域的研究進展J.分析化學(xué),2022,35(2):309-314.6SgaT,hashiY,Ue