生化藥物的開發(fā)-PowerPointPresentat

1、生化藥物的開發(fā)基因工程技術(shù)生產(chǎn)L-天冬酰胺酶藥物唾液酸、唾液酸衍生物的研究、開發(fā)、應(yīng)用酶法制備低分子量肝素藥物鈔亞鵬 錢世鈞20061項目1:基因工程技術(shù)生產(chǎn)抗白血病藥物L(fēng)-天冬酰胺酶 L-天冬酰胺酶在臨床上已使用三十余年，但在治療白血病方面，該酶仍被認為是一個有效的藥物。應(yīng)用中存在的問題：作為異體蛋白的酶的長期使用會刺激免疫系統(tǒng)，對人體產(chǎn)生有害的免疫排斥反應(yīng)；酶在人體中的不穩(wěn)定性，半衰期短；更為重要的是，菌種產(chǎn)酶活性低而引起酶制劑成本太高，一般病人根本承受不起，這些問題不解決，就會大大限制酶的廣泛使用。解決途徑：通過現(xiàn)代育種技術(shù)，基因工程的方法來提高菌種產(chǎn)酶能力，是克服酶在應(yīng)用中的缺陷一個最

2、有力的途徑。2本實驗室工作基礎(chǔ)我們實驗室在1970年篩選出一株高產(chǎn)天冬酰胺酶的大腸桿菌，酶活力 達4.6IU/ml，經(jīng)過工廠中試、酶制劑純化、動物、臨床試驗，于1973年通過鑒定，在天津生化制藥廠獲準生產(chǎn)，在醫(yī)院里得到了應(yīng)用。在八十年代末，由于 酶活力低、成本高等原因，該廠停止了生產(chǎn)該酶。3工作進展用PCR技術(shù)從染色體DNA中釣取酶的基因，并將其轉(zhuǎn)入原始生產(chǎn)菌株，成功構(gòu)建工程菌。通過發(fā)酵條件優(yōu)化試驗，該菌產(chǎn)酶能力達到120-150U/ml,發(fā)酵液最高可超過200U/ml以上，比原生產(chǎn)菌株提高30-50倍。酶蛋白占菌體可溶性蛋白的50%左右。酶的純化步驟將比原來的工藝簡單有效。該工程菌穩(wěn)定性好，

3、培養(yǎng)50代以上，重組質(zhì)粒仍保留90%以上。中試規(guī)模上純化了該酶，純度達到以上。4開發(fā)目標(biāo)大規(guī)模生產(chǎn)較低成本的L-天冬酰胺酶藥物，滿足國內(nèi)臨床需求5項目:唾液酸、唾液酸衍生物的研究、開發(fā)、應(yīng)用唾液酸是一族神經(jīng)氨酸衍生物，是一個含有9個碳原子并具有吡喃糖結(jié)構(gòu)的酸性氨基糖，唾液酸的應(yīng)用：唾液酸具有阻礙病原體附著在細胞上以及使細胞產(chǎn)生免疫抗體作用;作為食品添加劑，適合用于嬰兒斷奶食品及住院患者營養(yǎng)品；作為藥物，對于中心或外周性神經(jīng)疾病以及脫髓鞘病有療效；以它為原料，能開發(fā)一系列重要糖藥物，在抗病毒、抗腫瘤、抗炎癥、治療老年性癡呆癥上均有非常好的效果。原料藥、藥物中間體、保健品添加劑6存在問題唾液酸用處

4、很大，但它的來源有限，一般從蛋清、牛的初乳、動物組織的粘蛋白中分離，難以大量制備，因此價格昂貴。雖能用化學(xué)方法合成唾液酸，但需復(fù)雜的基團保護和脫保護措施。而現(xiàn)在已能用微生物直接發(fā)酵和生物合成方法成功制備唾液酸。7工作進展科學(xué)院微生物所已篩選到一株優(yōu)良的產(chǎn)多聚唾液酸的菌種，完成了培養(yǎng)條件試驗，進行了發(fā)酵中試（200L罐）；并完成了多聚唾液酸制備以及進一步水解成單體唾液酸及純化試驗；在小試規(guī)模上獲得成功；合成了唾液酸膽固醇衍生物。8開發(fā)目標(biāo)在中試規(guī)模上微生物發(fā)酵法生產(chǎn)高純度唾液酸單體9項目:酶法制備低分子量肝素藥物定義:平均分子量低于8000Da的硫酸化葡糖胺聚糖的鹽；克服肝素臨床使用過程中帶來的副作用； 低分子量肝素的主要優(yōu)勢表現(xiàn)在: 1.抗血栓作用優(yōu)于肝素，而抗凝活性低于肝素； 2.生物利用度高； 3.體內(nèi)半衰期長; 4. 出血傾向??； 5. 口服易吸收。10試驗進展獲得一株產(chǎn)生肝素酶的新菌株,并進行了肝素酶的純化、酶學(xué)性質(zhì)、催化專一性等工作;確定了肝素酶裂解肝素制備低分子量肝素的條件,并制備了具有抗平滑肌細胞增生活性的肝素寡糖;在寡糖純化、結(jié)構(gòu)分析、寡糖蛋白相互作用方面做了大量基礎(chǔ)工作通過對寡糖的藥理學(xué)研究，明確了酶法得到的肝素寡糖的抗平滑