血漿內(nèi)氧化低密度脂蛋白在肺癌和血管損傷性疾病中特異性變化的實(shí)

1、血漿內(nèi)氧化低密度脂蛋白在肺癌和血管損傷性疾病中特異性變化的實(shí)【摘要】目的研究不同種氧化低密度脂蛋白X-LDL在肺癌a和動(dòng)脈硬化性血管損傷性疾病As病人血液中的特異性變化，討論不同種氧化低密度脂蛋白與腫瘤及動(dòng)脈硬化發(fā)病之間的互相關(guān)系。方法以臨床確診肺癌的16例患者為a組，12例患者為As組，選擇安康大學(xué)生20名作為正常對(duì)照組。分別檢測(cè)血漿內(nèi)LP含量、SD活性及各組氧化脂質(zhì)的峰線位置。結(jié)果a組、As組LP含量與正常組比擬差異有顯著性，As組SD活性與正常組比擬差異有顯著性；在薄層層析中a組、AS與正常組的過氧化低密度脂蛋白分布均有不同。結(jié)論a與As患者和正常人比擬其細(xì)胞氧化低密度脂蛋白代謝特征表現(xiàn)

2、為代謝率增強(qiáng)，過氧化低密度脂蛋白具有不同的特異性變化?！娟P(guān)鍵詞】氧化低密度脂蛋白；肺癌；動(dòng)脈硬化性血管損傷疾病Abstrat：bjetiveTstudythedistintivehangefdifferentperxidizedldensitylipprtEin(X-LDL)inthebldfarterislertidisease(As)andlunganer(a).TinvestigatetherrelatinfdifferentX-LDLinAsanda.ethdsbjetseredividedintthreegrups:patientsdiagnsedaslunganer(agrup);

3、patientsdiagnsedasarterislersis(Asgrup);20healthystudentsfuniversity(ntrlgrup).LdensitylipprtEIn(L-LDL)andhighdensitylipprtein(H-LDL)erelletedfrtheplasaithultraentrifugeethd.ThenentratinsfLPandSDinplasaereexained.AndthetplinepsitinsandtherughnentratinsfX-LDLereevaluated.Resultsparedtntrlgrup,theLPle

4、velsinAsgrupandagruperesignifiantlyinreased.TheSDlevelassignifiantlyhigherinAsgrupthaninntrlgrup.IntheRIA,thedistributinfagrupandAsgrupversusntrlgruperedifferent.paredtntrlgrup,signifiantstatistidiffereneserefundinbthfagrupandinAsgrup.ButthereasnstatistidifferenebeteenagrupandAsgrup.nlusinTheetablir

5、atesfX-LDLansignifiantlyinreaserebthinagrupandinAsgrupthaninntrlgrup,andthespeifihangesanbebserved.Keyrds：Perxidizedldensitylipprtein(X-LDL);Lunganer;Arterislertidisease多年來世界各國(guó)的科學(xué)家們?cè)谘芯啃难芗膊r(shí)對(duì)人體內(nèi)膽固醇H載體血漿內(nèi)低密度脂蛋白LDL的變化進(jìn)展了大量詳細(xì)的研究，并發(fā)現(xiàn)了氧化低密度脂蛋白X-LDL導(dǎo)致血管損傷，誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化性疾病發(fā)生的事實(shí)。但是，對(duì)消耗性疾勃腫瘤發(fā)生開展過程中的低密度脂蛋白和氧化低密度脂蛋

6、白的動(dòng)態(tài)變化以及互相影響卻研究甚少。在本課題的前期工作中發(fā)現(xiàn)氧化低密度脂蛋白在腫瘤病人和動(dòng)脈硬化性血管損傷性病人血液中具有不同變化，為進(jìn)一步研究不同X-LDL對(duì)人體血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷機(jī)理，研究腫瘤患者血漿內(nèi)X-LDL和動(dòng)脈粥樣硬化病人X-LDL構(gòu)成的特異性變化，本實(shí)驗(yàn)以肺癌病人和包括糖尿病的血管損傷性病人為對(duì)象，對(duì)上述各種疾病發(fā)生開展過程中的低密度脂蛋白、氧化低密度脂蛋白以及超氧化物歧化酶的變化進(jìn)展了研究。同時(shí)，我們還應(yīng)用薄層層析技術(shù)對(duì)上述各種疾病的血漿內(nèi)氧化脂質(zhì)進(jìn)展了分析。1材料與儀器1.1試劑-LP由日本協(xié)和株式會(huì)社提供，SD試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供。1.2儀器薄層層析板美國(guó)Si

7、ga公司,超低溫冰箱日本三洋SI-F124，高速離心機(jī)德國(guó)HeraeusSTRATSHAS15.94型，超速離心機(jī)瑞士entriknT-1055型，層析用自動(dòng)局部搜集器HELIRA瑞士LKB公司。2方法2.1分組以臨床上經(jīng)過各種檢查確定臨床診斷的肺癌患者和包括糖尿病的血管損傷性疾病患者作為研究對(duì)象，正常對(duì)照選擇了安康、體檢證明肝功能、腎功能、胸部X線及血尿常規(guī)均正常的20名大學(xué)生自愿者。分組如下：肺癌組16例，男9例，女7例，年齡為4268歲，平均51歲；血管損傷組12例，男9例，女3例，平均年齡4772歲，平均56歲；正常組20例，男10例，女10例，年齡2124歲，平均年齡22歲。2.2標(biāo)

8、本制備每人清晨空腹采血16l參加乙二胺四乙酸終端濃度為0.05l/L抗凝、抗氧化，以3500r/in離心提取血漿，在冰箱0條件下保存?zhèn)溆?。用哈貝爾的重層超速離心別離法，以40000r/in離心26h別離血漿內(nèi)低密度d=1.0631.18，以40000r/in離心28h別離血漿內(nèi)高密度脂蛋白(d=1.181.21)。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3血漿內(nèi)LP的測(cè)定八木別法測(cè)定各組血漿的低密度脂蛋白內(nèi)過氧化脂蛋白含量。2.4血漿內(nèi)SD活性測(cè)定用放射免疫法測(cè)定各組血漿內(nèi)超氧化物歧化酶(SD)的活性。2.5標(biāo)本中各種脂類的薄層層析2.5.1脂類提取取標(biāo)本0.8l0.6l血漿+0.2l蒸餾水加甲醇2l，加三

9、氯甲烷1l混勻，加醋酸2滴混勻后再參加三氯甲烷1l，加蒸餾水1l混勻，高速離心2000rin，10in。汲取下層在真空泵內(nèi)連續(xù)吸引枯燥812h。2.5.2展開液的制作及薄層層析分析展開液由石油乙醚75l+乙醚25l+乙酸1l組成。薄層層析板先用三氯甲烷洗1次，在自然條件下枯燥12h后，在層析板上取一邊打5個(gè)格，用三氯甲烷100l溶解脂質(zhì)在薄層上滴注，以能吸干為度。將層析板放入含有展開液的展開槽中展開，展開至層析板頂部23時(shí)停頓展開，層析板進(jìn)展顯影。2.5.3顯影和攝影析板放入顯影槽碘化510in后取出進(jìn)展攝影。初步斷定各組氧化脂質(zhì)的峰線位置和大致濃度。2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟

10、件，數(shù)據(jù)以s表示，結(jié)果處理使用配對(duì)t檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1血漿內(nèi)LP測(cè)定如表1所示，正常對(duì)照組與血管損傷組比擬P0.01，與肺癌組比擬P0.05，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。氧化低密度脂蛋白含量在肺癌組與血管病變組之間有測(cè)定數(shù)值的變化，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表1血管損傷組和肺癌組血漿內(nèi)LP測(cè)定值略3.2血漿內(nèi)SD活性測(cè)定如表2所示，血管損傷組與正常對(duì)照組比擬有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0.05，說明在血管損傷性疾病發(fā)生時(shí)血漿內(nèi)SD值有明顯上升趨勢(shì)。表2血管損傷組和肺癌組血漿內(nèi)SD測(cè)定值略3.3薄層層析結(jié)果正常對(duì)照組血漿、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和極高密度脂蛋白的薄層層析板中幾乎看不到任何氧化物質(zhì)

11、，而肺癌組和血管損傷組的低密度脂蛋白與正常組有不同分布，可以初步推測(cè)在血管病變性疾病和肺癌發(fā)生過程中出現(xiàn)的氧化低密度脂蛋白可能來自不同的物質(zhì)。4討論過氧化低密度脂蛋白是低密度脂蛋白(LDL)被氧化修飾后的產(chǎn)物。當(dāng)體內(nèi)產(chǎn)生過多活性氧自由基時(shí)，LDL氧化修飾作用增強(qiáng)，極易轉(zhuǎn)化為氧化低密度脂蛋白，它是動(dòng)脈粥樣硬化最重要的致病因素1，2。同時(shí)，自由基也是導(dǎo)致癌癥發(fā)生的重要因素之一，它既可直接造成DNA鏈損傷致突變。也可通過脂質(zhì)過氧化作用影響DNA，引起基因DNA變化，合成出無活力或功能缺陷的SD，隨著SD活性降低，引起自由基進(jìn)一步堆積，最終誘發(fā)癌癥3。在本次實(shí)驗(yàn)中肺癌患者組SD活性出現(xiàn)增高，推測(cè)其原因

12、可能為代償性。本實(shí)驗(yàn)肺癌患者與血管損傷組和正常人比擬，其細(xì)胞氧化低密度脂蛋白代謝特征表現(xiàn)為代謝率增強(qiáng)，即單位時(shí)間內(nèi)細(xì)胞的氧化低密度脂蛋白結(jié)合、內(nèi)吞和降解量均顯著增加。提示過氧化低密度脂蛋白的增加可能是腫瘤致病或增強(qiáng)致病因素之一。脂質(zhì)是肺的重要成分,肺組織具有合成與分解血脂及脂蛋白功能,肺泡型上皮細(xì)胞及肺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)和外表具有脂蛋白脂酶,提示肺臟具強(qiáng)大脂質(zhì)代謝才能。肺癌時(shí)腫瘤細(xì)胞增生活潑并伴毛細(xì)血管的增多使肺的脂質(zhì)代謝異?；顫?。同時(shí)腫瘤組織的某些代謝產(chǎn)物和分泌的某些具有生物活性的物質(zhì)可直接或間接地影響細(xì)胞膜上感受器功能活性,從而形成肺癌時(shí)所特有的血脂及脂蛋白氧化修飾4，5。薄層層析實(shí)驗(yàn)說明

13、，肺癌和血管損傷性疾病形成過程中過氧化低密度脂蛋白具有不同特異性變化，因此推測(cè)兩種氧化低密度脂蛋白的產(chǎn)生來源可能不同，詳細(xì)機(jī)制在進(jìn)一步研究中。【參考文獻(xiàn)】1尹學(xué)哲，上村継道，金沢武道過酸化LDLPlateletEndthelialellAdhesinleule-1PEA-1発現(xiàn)及影響中西醫(yī)結(jié)合動(dòng)脈硬化癥血拴癥一次預(yù)防曲直部壽夫，陣紹武監(jiān)修、都島基夫，金恩源編集，1996：172.2Bnnefnt-RusseltD，TherndP，BeaudeuxJL，etal.HighdensitylipprtEin(HDL)andthexidativehypthesisfatherskersisJ.linialheistryandLabratryediine,1