甲狀腺腫瘤檢測Bcl2的意義

1、甲狀腺腫瘤檢測Bcl-2的意義【摘要】目的討論bl-2的表達(dá)與甲狀腺癌的發(fā)生、開展及預(yù)后的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化方法，以單克隆抗體鼠抗人bl-2標(biāo)記77例甲狀腺癌、58例甲狀腺腺瘤、40例癌旁甲狀腺組織和28例正常甲狀腺組織。觀察不同甲狀腺組織中bl-2的表達(dá)，并比擬其陽性率。結(jié)果bl-2陽性反響見于甲狀腺癌、甲狀腺腺瘤及癌旁甲狀腺組織。在甲狀腺癌組織中bl-2陽性率為45.5，高于甲狀腺腺瘤組織(22.4)(p=0006)、癌旁甲狀腺組織(17.5)(p=0003)和正常甲狀腺組織(0)(p=0000)。甲狀腺未分化癌和濾泡狀癌組織中bl-2的陽性率明顯增高。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床、期病例中，

2、bl-2的陽性率明顯增高。結(jié)論bl-2過量表達(dá)可能與甲狀腺腫瘤的發(fā)生有關(guān)，癌組織中bl-2的表達(dá)可作為甲狀腺癌預(yù)后的參考指標(biāo)?！娟P(guān)鍵詞】甲狀腺腫瘤；bl-2基因；原癌基因；基因表達(dá)；免疫組化甲狀腺癌是常見的內(nèi)分泌腫瘤，女性發(fā)病率高。臨床甲狀腺腫瘤中有510為甲狀腺癌1。其中分化型甲狀腺癌占90，包括甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺濾泡狀癌，未分化癌較為少見，其惡性程度高、預(yù)后差。國內(nèi)資料顯示我國甲狀腺癌的發(fā)病率在明顯增加2。近年來，甲狀腺癌的相關(guān)基因和腫瘤標(biāo)志物研究進(jìn)展很快。研究證實(shí)3,4，bl-2基因是一種細(xì)胞凋亡抑制基因，最早發(fā)現(xiàn)于濾泡性b細(xì)胞性淋巴瘤中，其產(chǎn)物bl-2蛋白可抑制細(xì)胞凋亡，延長細(xì)胞生

3、存期。本研究采用免疫組化技術(shù)，通過檢測bl-2在甲狀腺癌組織、甲狀腺腺瘤組織、甲狀腺癌旁組織及正常甲狀腺組織中的表達(dá)程度，討論bl-2在甲狀腺癌組織中的發(fā)生開展過程中的作用，以提醒bl-2與甲狀腺癌的生物學(xué)行為的關(guān)系及其預(yù)后關(guān)系。1材料與方法1.1材料全部標(biāo)本取自北京大學(xué)深圳醫(yī)院普通外科2001年至2021年間手術(shù)治療的甲狀腺病例標(biāo)本，其中：甲狀腺癌77例(男28例，女8例，平均50歲)，58例甲狀腺腺瘤(男22例，女36例，平均36歲)，同時取癌旁甲狀腺組織40例(男10例，女30例，平均37歲，經(jīng)病理檢查確診均無甲狀腺癌浸潤)；取正常甲狀腺組織28例(男9例，女l9例，平均35歲)。對77

4、例甲狀腺癌按h標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)分類：乳頭狀癌55例，濾泡狀癌l4例，未分化癌8例，按aj標(biāo)準(zhǔn)臨床病理分期：i期30例，期23例，期16例，期8例；其中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者33例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者44例。標(biāo)本經(jīng)10福爾馬林液固定、石蠟包埋，常規(guī)切片，60烤片2h，37過夜備用。1.2免疫組化試劑bl-2鼠抗人單克隆抗體，為美國zyed公司產(chǎn)品。sp-9000通用型試劑盒為美國zyed公司產(chǎn)品。用bl-2陽性的扁桃體作陽性對照，以pbs代替一抗作陰性空白對照。1.3試驗(yàn)方法切片脫蠟水化后，3h22室溫處理15in，微波抗原修復(fù)，正常山羊血清室溫孵育30in，滴加一抗，4冰箱孵育過夜。滴加生物素標(biāo)志的二抗，室溫

5、孵育30in，滴加辣根過氧化酶標(biāo)記的鏈親和素室溫30in，dab顯色。經(jīng)蘇木精復(fù)染后，脫水、透明、封片。1.4判斷標(biāo)準(zhǔn)bl-2定位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色至深棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。無陽性細(xì)胞為bl-2陰性；有陽性細(xì)胞為bl-2陽性。所有標(biāo)本均由兩位病理醫(yī)師采用盲法閱片，結(jié)果不一致時協(xié)調(diào)統(tǒng)一判斷最終結(jié)果。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有數(shù)據(jù)采用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件包在電腦上進(jìn)展統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)展.2檢驗(yàn)，以p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1bl-2在不同甲狀腺組織中的表達(dá)情況,見表1。光鏡下bl-2陽性反響表現(xiàn)為細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)染成棕褐色，未見棕褐色顆粒為陰性。bl-2陽性率在甲狀

6、腺癌為45.5，高于甲狀腺腺瘤(22.4)(p0.01)及癌旁甲狀腺組織(17.5)(p0.01)，而正常甲狀腺組織染色陰性。見表1。2.2甲狀腺癌中bl-2表達(dá)與甲狀腺癌有關(guān)病理指標(biāo)的關(guān)系，見表2。bl-2的表達(dá)程度與甲狀腺癌組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和臨床病理分期有顯著關(guān)系。在惡性度較高的未分化癌和濾泡狀癌中，bl-2陽性率明顯高于惡性度較低的乳頭狀癌；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例或臨床、期病例，bl-2陽性率高于相應(yīng)的無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床i、期病例，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3討論細(xì)胞凋亡又稱細(xì)胞程序化死亡，受基因調(diào)控，調(diào)控基因大體分為凋亡抑制基因和凋亡促進(jìn)基因，二者此消彼長，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞的

7、凋亡，對其研究將是解決細(xì)胞凋亡機(jī)制的根本。但迄今為止其確切作用機(jī)制仍不完全清楚。bl-2基因家族在凋亡的調(diào)節(jié)中起重要作用，是研究熱點(diǎn)之一。bl-2基因即b細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因-2(b-elllypha/leukeia-2)，是tsujit等5于1984年首次在濾泡型b淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)，由此命名bl-2。正常位于18號染色體的長臂2區(qū)1帶，開場是通過染色體易位(14，18)斷裂點(diǎn)的分子克隆方法，從濾泡型淋巴細(xì)胞瘤中別離出來的，被人們認(rèn)為是人類濾泡型淋巴細(xì)胞瘤的細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)志，由2個外顯子組成，其基因產(chǎn)物在人類中的表達(dá)與細(xì)胞壽命長短相關(guān)。近年來，人們通過廣泛的研究發(fā)現(xiàn)，bl-2基因有阻滯細(xì)胞凋亡發(fā)生

8、的作用，故被認(rèn)為是抗細(xì)胞凋亡基因6。其抑制凋亡的機(jī)制，以前報(bào)道籠統(tǒng)說通過阻止細(xì)胞凋亡信號傳輸?shù)淖詈蠊餐范鹱饔谩Ｍㄟ^對bl-2結(jié)合蛋白和bl-2同源蛋白的研究，對bl-2家族調(diào)控凋亡的根本形式有了新的認(rèn)識。bl-2同源蛋白包括bl-2、bl-xl、bax、bad以及線蟲的ed-9，bl-2、bax可以以同二聚體形式存在，也可形成異二聚體，bax同源二聚體形成，誘導(dǎo)凋亡，bax-bl-2異二聚體形成，抑制凋亡；而當(dāng)bl-xs存在時，優(yōu)先與bl-2形成異二聚體，使bax得以游離形成同二聚體，誘導(dǎo)凋亡，因此，有時bl-2表達(dá)并不一定抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生。一般認(rèn)為，bl-2基因表達(dá)與瘤細(xì)胞的分化程度

9、及增殖才能有關(guān)，分化程度低，增殖才能強(qiáng)的瘤細(xì)胞，其bl-2呈現(xiàn)出過量表達(dá)趨勢。本研究中，作者系統(tǒng)地檢測了甲狀腺癌組織、甲狀腺腺瘤組織、甲狀腺癌旁組織及正常甲狀腺組織等多種甲狀腺組織中bl-2的表達(dá)情況，顯示在甲狀腺癌組織bl-2的表達(dá)率為45.5，顯著高于甲狀腺腺瘤組織(22.4，p=0.006)、甲狀腺癌旁的組織(17.5，p=0.003)及正常甲狀腺組織(0，p=0.000)，提醒出甲狀腺腺瘤的濾泡上皮細(xì)胞bl-2陽性染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)較正常甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞增強(qiáng)增多，甲狀腺癌又超過腺瘤，提示bl-2可能在調(diào)節(jié)甲狀腺上皮的凋亡中伴演重要角色，在甲狀腺癌中有更多的上皮細(xì)胞具有逃避凋亡的才能

10、，甲狀腺癌的發(fā)生可能與bl-2過量表達(dá)有關(guān)。研究說明，對于甲狀腺癌，腫瘤組織學(xué)類型、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及臨床病理分期是評估預(yù)后的主要指標(biāo)7、8。本組研究結(jié)果說明，在分化程度很低的未分化癌和相對較低的濾泡狀癌中，bl-2的表達(dá)率分別為100與78.6，明顯高于乳頭狀癌bl-2的表達(dá)率(29.1)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例或iii、iv期甲狀腺癌病例中，癌組織中bl-2的表達(dá)明顯增強(qiáng)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。bl-2在甲狀腺癌所有類型中均有表達(dá)，并且分化越差表達(dá)程度越高，因此，有理由認(rèn)為，bl-2陽性提示甲狀腺癌預(yù)后較差，并且表達(dá)程度越高預(yù)后也就越差。癌組織bl-2高表達(dá)與甲狀腺

11、癌的分化程度、組織學(xué)亞型、增值侵襲才能、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后有關(guān)，可作為判斷甲狀腺癌預(yù)后的一個重要參考指標(biāo)。因此，對于甲狀腺腺瘤患者，作腫瘤組織bl-2檢測并對陽性病例進(jìn)展親密隨訪可能具有重要意義。參考文獻(xiàn)1hegedusllinialpratie：thethyridndulenengljed，2022，351(17)：1764-17712關(guān)海霞，單忠艷，米小軼，等普通食鹽碘化前后甲狀腺癌發(fā)病變化的11年病理資料分析中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2022，35(3)：284-285.3sdag，antnaia，bsd，etalexpressinfbl-2，erb-2，p53，andp21(afl-ip)prteininthyridaeinajexplinanerres，1999，18(3)：3634sreelekhatt，pradeepv，vijayalakshik，etalinsituapptsisinthethyridthyrid，2000，10(2)：1175ullerhkerjiunreativityfp53ki67andbl-2innytiadenasandarinasfthyrid