蘇拉明聯(lián)合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤 的轉(zhuǎn)移

1、蘇拉明結(jié)合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤 的轉(zhuǎn)移張平，賀兼斌，王小華，歐立文【摘要】目的研究蘇拉明結(jié)合槲皮素對(duì)小鼠肺腺癌轉(zhuǎn)移的抑制作用。方法將40只接種高轉(zhuǎn)移性的LA795肺腺癌細(xì)胞T739小鼠隨機(jī)分成5組：對(duì)照組、順鉑DDP組、槲皮素組、蘇拉明組、蘇拉明+槲皮素組。實(shí)驗(yàn)3周后，處死全部小鼠，取出雙肺和剝離皮下腫瘤，計(jì)算肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率，計(jì)數(shù)各組小鼠肺外表轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)及算出肺外表結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移抑制率，測(cè)量各組小鼠肺濕重。免疫組化和圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)皮下移植瘤中微血管密度irvesseldensity，VD，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子vasularendthelialgrthfatr，VEGF的表達(dá)并定量分析。結(jié)果蘇拉明組

2、、槲皮素組與對(duì)照組相比肺外表轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)明顯下降，同時(shí)蘇拉明組中肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率、皮下腫瘤內(nèi)VD、VEGF的表達(dá)與對(duì)照組相比也明顯下降，相反順鉑組對(duì)此那么無(wú)明顯影響。結(jié)合用藥組那么顯著抑制肺外表轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)且具有協(xié)同作用。結(jié)論蘇拉明和槲皮素對(duì)LA795肺腺癌的肺結(jié)節(jié)轉(zhuǎn)移具有協(xié)同抑制作用，蘇拉明抑制LA795肺腺癌轉(zhuǎn)移與其抑制其腫瘤內(nèi)VEGF表達(dá)相關(guān)。【關(guān)鍵詞】蘇拉明；槲皮素；血管生成抑制劑；肺腺癌；轉(zhuǎn)移基金工程：湖南省衛(wèi)生廳科研基金資助工程(2022033)InhibitryEffetfSurainbinatinithQueretinntheetastasisfLungAdenarinainie目前肺

3、癌發(fā)病率和死亡率都有明顯增高趨勢(shì)，腺癌為其一主要組織學(xué)類(lèi)型，癌瘤內(nèi)血管豐富，部分侵潤(rùn)和血行轉(zhuǎn)移發(fā)生較早。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要特征，也是主要死因。自Flka1首先提出實(shí)體瘤生長(zhǎng)需要血管生成理論后，抗血管治療腫瘤轉(zhuǎn)移也成為了當(dāng)前腫瘤生物治療的研究熱點(diǎn)之一。本實(shí)驗(yàn)利用LA795肺腺癌細(xì)胞形成高轉(zhuǎn)移T739小鼠皮下腫瘤轉(zhuǎn)挪動(dòng)物復(fù)制模型2，應(yīng)用具有血管生成抑制作用的蘇拉明及槲皮素，以順鉑為對(duì)照，觀察單獨(dú)及結(jié)合用藥對(duì)LA795肺腺癌肺轉(zhuǎn)移的抑制作用，并討論其作用機(jī)制。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞株、藥品及試劑1.2動(dòng)物模型的建立處死兩只荷瘤鼠，剝離瘤塊，研磨成勻漿液，過(guò)360目鋼網(wǎng)，生成腫瘤細(xì)胞懸液，

4、鏡下調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為2106個(gè)/l，于每只小鼠右后腿根部外側(cè)皮下注射0.2l瘤液，形成小鼠高轉(zhuǎn)移性動(dòng)物腫瘤模型。1.3分組及用藥小鼠皮下移植處均成瘤，接種4d后隨機(jī)分成5組，每組8只。(1)對(duì)照組:丙二醇0.2l+生理鹽水0.2l/只腹腔注射iq，每天一次；(2)順鉑組:順鉑2g/(kgd)溶于生理鹽水0.2l中iq，于接種后第4、11、18d各一次，并予丙二醇0.2l/只每天腹腔注射一次；(3)槲皮素組:槲皮素50g/(kgd)溶于丙二醇0.2l中iq，每天一次；(4)蘇拉明組:蘇拉明10g/(kgd)溶于生理鹽水0.2l中iq，每天一次；(5)槲皮素+蘇拉明組:槲皮素及蘇拉明按3、4組用藥。

5、1.4方法與觀察指標(biāo)141藥物對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響142移植瘤內(nèi)VEGF、VD的表達(dá)15統(tǒng)計(jì)處理根據(jù)數(shù)據(jù)類(lèi)型分別使用組間t檢驗(yàn)，2檢驗(yàn)和相關(guān)分析，用SPSS10.0軟件進(jìn)展統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2結(jié)果2.1移植瘤的肺轉(zhuǎn)移情況各組小鼠移植瘤的肺轉(zhuǎn)移發(fā)生率、肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)、肺濕重等情況,見(jiàn)表1。表1各組小鼠移植瘤的肺轉(zhuǎn)移情況3討論已發(fā)生轉(zhuǎn)移的中、晚期肺癌療效差。腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤治療的一大難題。本文用有血管抑制作用的蘇拉明結(jié)合槲皮素對(duì)肺腺癌的轉(zhuǎn)移進(jìn)展研究。結(jié)果顯示，結(jié)合組肺外表轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)比其他組明顯減少，有差異顯著性(P0.05)，說(shuō)明蘇拉明和槲皮素結(jié)合應(yīng)用有協(xié)同抑制轉(zhuǎn)移作用。槲皮素組、DDP組及對(duì)照組小鼠均發(fā)

6、生肺轉(zhuǎn)移，差異無(wú)顯著性P0.05；蘇拉明組6/8小鼠發(fā)生肺轉(zhuǎn)移，低于對(duì)照組，而結(jié)合組5/8小鼠發(fā)生肺轉(zhuǎn)移與對(duì)照組比差異有顯著性(P0.05)，進(jìn)一步顯示結(jié)合用藥協(xié)同作用。本實(shí)驗(yàn)蘇拉明組及槲皮素組與對(duì)照組轉(zhuǎn)移率相比無(wú)顯著性差異，可能是本研究樣本偏少，擴(kuò)大樣本可能會(huì)得出陽(yáng)性結(jié)果，5組肺濕重?zé)o差異顯著性，可能與肺外表轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)部分未明顯生長(zhǎng)有關(guān)，延長(zhǎng)喂養(yǎng)時(shí)間，隨著轉(zhuǎn)移灶部分生長(zhǎng)估計(jì)會(huì)導(dǎo)致各組肺濕重的差異性。亦可能系轉(zhuǎn)移瘤所占肺比重較小，如測(cè)轉(zhuǎn)移瘤重，亦可能出現(xiàn)差異性，但本研究中肺臟體積小，癌結(jié)節(jié)難以剝離。體外實(shí)驗(yàn)證明，缺乏血管生成，腫瘤只能長(zhǎng)到123，不發(fā)生轉(zhuǎn)移，血管形成是腫瘤生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移的根底，

7、新生血管提供腫瘤生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)，排泄代謝產(chǎn)物，促進(jìn)血管滲漏，大量癌細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)，是癌細(xì)胞播散的途徑。腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移需要新血管持續(xù)生長(zhǎng)4。血管形成過(guò)程的核心是血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，VEGF是最重要的血管生長(zhǎng)因子，是血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性致裂原，能選擇性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜上的兩種絡(luò)氨酸激酶受體，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂，增殖和血管構(gòu)建，誘導(dǎo)微血管生成，增加血管通透性，它還能降解血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)，削弱血管的屏障作用，使新生血管基底膜缺損加重，促進(jìn)腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移5,6。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)蘇拉明組、槲皮素組和結(jié)合組中VEGF的表達(dá)較對(duì)照組及DDP組低，有顯著性差異P0.01，VEGF的表達(dá)在腫瘤侵潤(rùn)的邊緣尤為增強(qiáng)，且和腫瘤內(nèi)VD有一致性，說(shuō)明蘇拉明和槲皮素可抑制腫瘤內(nèi)血管生成，切斷腫瘤營(yíng)養(yǎng)供給和腫瘤轉(zhuǎn)移通道，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移。我們同時(shí)觀察到蘇拉明與槲皮素結(jié)合能增強(qiáng)血管抑制作用，可能與槲皮素亦有抑制血管增殖的活性有關(guān)7，兩者具有協(xié)同作用。結(jié)合VEGF表達(dá)灰度值和肺外表轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.88,P0.01)，提示VEGF是監(jiān)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移的較好指標(biāo)。蘇拉明和槲皮素可通過(guò)下調(diào)這些蛋白質(zhì)表達(dá)而抑