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1、食品中的菌落總數(shù)的測定第三組：胡婷、黃純、黃依潔1Contents1. 實驗目的與原理2. 實驗材料3. 實驗方法與步驟4.檢樣中細菌菌落總數(shù)的計算5. 室內空氣中細菌總數(shù)檢測實施細則2一、實驗目的與原理 目的1、學習和掌握測定食品中菌落總數(shù)的基本方法2、學會菌落總數(shù)的報告方式3、明確菌落總數(shù)測定對被檢樣品進行衛(wèi)生學評價的意義。原理平板菌落計數(shù)法又稱標準平板活菌計數(shù)法（standard plate count，簡稱SPC法），是最常用的一種活菌計數(shù)法。菌落總數(shù)可作為判定食品清潔程度（被污染程度）的標志，通常越干凈的食品，單位樣品菌落總數(shù)越低，反之，菌落總數(shù)就越高。因此，細菌菌落總數(shù)測定對檢樣進

2、行衛(wèi)生學評價提供依據(jù)。3二、實驗材料1、儀器與設備：恒溫培養(yǎng)箱、托盤天平、電爐、吸管、三角瓶、平皿、試管、試管架、酒精燈、滅菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蠟筆。2、培養(yǎng)基和試劑：75%乙醇、0.85%生理鹽水、瓊脂培養(yǎng)基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、瓊脂15.0g、蒸餾水1000mL、pH 7.00.2 3、檢樣：伊利包裝鮮牛奶250ml4三、實驗方法與步驟1、檢驗程序菌落總數(shù)檢驗程序：檢樣做成幾個適當倍數(shù)的稀釋液選擇2-3個適宜稀釋度各以1ml之量分別入滅菌平皿內每皿內加入4615-20ml營養(yǎng)瓊脂置361恒溫箱內培養(yǎng)（482）h取出 菌落數(shù)報告52、檢樣稀釋及培養(yǎng)

3、（1）以無菌操作，將檢樣包裝打開，用吸管取25ml鮮牛奶，放于含有225ml滅菌生理鹽水的500ml滅菌玻璃三角瓶內（瓶內預先置適當數(shù)量的玻璃珠），經充分振搖做成1：10的均勻稀釋液。（2）用1ml滅菌吸管吸取1：10稀釋液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml滅菌生理鹽水的試管內（注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液，下同），振搖試管混合均勻，做成1：100的稀釋液。（3）另取1ml的滅菌吸管，按上項操作順序作10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1ml滅菌吸管。6（4）根據(jù)食品衛(wèi)生檢驗標準要求和檢樣的菌落數(shù)量，選擇3個連續(xù)適宜稀釋度即10、10-1、102，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以

4、吸取該稀釋度的吸管移1ml稀釋液于滅菌平皿內，每個稀釋度作兩個平皿。（5）稀釋液移入平皿后，應及時將涼至46營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿15ml20mL，并轉動平皿使與稀釋檢樣混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1ml稀釋液（不含樣品）的滅菌平皿內作空白對照。 （6）等瓊脂凝固后，翻轉平板，置361恒溫箱內培養(yǎng)（482）h取出，計算平板內菌落數(shù)目乘以倍數(shù)，即得1mL樣品所含菌落總數(shù)。 7四、檢樣中細菌菌落總數(shù)的計算1、菌落計算方法（1）菌落計數(shù)方法做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。8公式計算：N = 樣品中菌落數(shù)

5、C = 含適宜范圍菌落數(shù)的平板菌落數(shù)之和n1 = 第一稀釋度（低稀釋度）平板個數(shù)n2 = 第二稀釋度（高稀釋度）平板個數(shù)d = 稀釋因子（第一稀釋度） 9實驗結果與記錄10五、室內空氣中細菌總數(shù)檢測實施細則一、范圍適用于室內空氣細菌總數(shù)測定。二、引用標準GB/T18883-2002 室內空氣中細菌總數(shù)檢驗方法 三、原理撞擊法：采用撞擊式空氣微生物采樣器采樣通過抽氣動力作用，使空氣通過狹縫或小孔而產生高速氣流，從而使懸浮在空氣中的帶菌粒子撞擊到營養(yǎng)瓊脂平板上，經37、48h培養(yǎng)后，計算每立方米空氣中所含的細菌菌落數(shù)的采樣測定方法。11四、儀器和設備 1高壓蒸汽滅菌器。2干熱滅菌器。3恒溫培養(yǎng)箱。

6、4冰箱。5平皿。（直徑9）6制備培養(yǎng)基用一般設備：量筒，三角燒瓶，pH計或精密pH試紙等。7撞擊式空氣微生物采樣器（FSC-IV便攜式浮游生物采樣器）。五、培養(yǎng)基1營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 1成分：蛋白胨 20g ，牛肉浸膏 3g ，氯化鈉 5g 瓊脂 15g20g ，蒸餾水 1000ml。 2制法：將上述各成分混合，加熱溶解，校正pH至7.4，過濾分裝，12120min高壓滅菌。營養(yǎng)瓊脂平板的制備參照采樣器使用說明。12六、選點要求 1采樣點的數(shù)量根據(jù)監(jiān)測室內面積大小和現(xiàn)場情況而確定，以期能正確反映室內空氣污染物的水平。原則上小于50的房間應設（13）個點；50100設（35）個點；100以上至少設5個點。在對角線上或梅花式均勻分布。2采樣點應避開通風口，離墻壁距離應大于0.5m。3采樣點的高度：原則上與人的呼吸帶高度相一致。相對高度0.5m1.5m之間。13七、采樣 將采樣器消毒，按儀器使用說明進行采樣。一般情況下采樣量為30L150L，應根據(jù)所使用儀器性能和室內空氣微生物污染程度，酌情增加或減少空氣采樣量。八、樣品培