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1、關(guān)于核苷酸和核酸第一張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月一、核酸的化學(xué)反應(yīng) 1.脫氨基作用(脫氨,deamination) 次黃嘌呤5-甲基胞嘧啶黃嘌呤第二張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月2.脫氧核苷酸的水解 脫嘌呤第三張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月3.紫外線和一些化學(xué)因子、烷化劑對DNA的損傷第四張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月亞硝酸第五張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月烷化劑:乙基甲烷磺酸(EMS)第六張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月紫外線誘導(dǎo)胸腺嘧啶二聚體第七張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月4.與嵌合劑的反應(yīng)第八張,PPT
2、共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第九張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月溴乙啶丫啶橙 放線菌素D 第十張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月二、DNA的酶法甲基化(methylation)甲基供體: S腺苷甲硫氨酸甲基受體:被修飾堿基(A、C多于G、T)堿基的甲基化修飾不是隨機(jī)的,而是限于一定的順序或DNA的某一區(qū)域,在甲基化酶的作用下進(jìn)行,甲基化是可逆的。甲基化的意義:幫助細(xì)胞識別和區(qū)分自身DNA和外來DNA;調(diào)節(jié)基因表達(dá);幫助DNA修復(fù)等。第十一張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第八節(jié) 核酸酶和DNA限制性內(nèi)切酶第十二張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月一、核酸酶(
3、nuclease)能水解核酸的酶為核酸酶核酸酶都是磷酸二酯酶(phosphodiesterases)第十三張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月核酸酶的分類按底物專一性分類:核糖核酸酶(RNase)和脫氧核糖核酸酶(DNase)按作用方式分類:內(nèi)切核酸酶和外切核酸酶內(nèi)切核酸酶:從核酸的內(nèi)部切割核酸鏈,產(chǎn)生核酸鏈片段。外切核酸酶:從核酸鏈的一端逐個切斷磷酸二酯鍵,釋放單核苷酸。按磷酸二酯鍵斷裂方式:3-核酸酶和5-核酸酶第十四張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第十五張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月核酸酶對其底物的作用具有特異性第十六張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月
4、第十七張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月二、限制性內(nèi)切酶(restriction endonuclease) 限制性內(nèi)切酶是從細(xì)菌中分離的一類專門識別和水解特定核苷酸序列的內(nèi)切酶類。這類酶在原核生物體內(nèi),用于“防御”外來DNA的入侵,將外來DNA以獨(dú)特的方式切成無感染能力的片段,而自身不受損害(甲基化作用) 。第十八張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月1. 限制性內(nèi)切酶的分類、 基因工程技術(shù)中常用型第十九張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月不需要ATP參加;不對DNA進(jìn)行甲基化或其它方式修飾。專門識別和切割特定的核苷酸序列,這個序列一般含46 個核苷酸殘基,并具回文結(jié)構(gòu)“落
5、鶴島上島落鶴,垂柳岸邊岸柳垂” 。 2. II型限制性內(nèi)切酶 第二十張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月類酶識別序列特點(diǎn)回文結(jié)構(gòu)palindrome第二十一張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月切口(kerf):粘端,平端第二十二張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十三張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十四張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月3.限制性內(nèi)切酶的種類(約1000多種) 第二十五張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月Hin d 屬 系 株 序Haemophilus influenzae d株流感嗜血桿菌d株的第三種酶命名naming第一個字
6、母取自產(chǎn)生該酶的細(xì)菌屬(genus)名,用大寫;第二、第三個字母是該細(xì)菌的種(species)名,用小寫;第四個字母代表株(strain);用羅馬數(shù)字表示發(fā)現(xiàn)的先后次序(sequence)。第二十六張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月4.限制性內(nèi)切酶在基因重組中的應(yīng)用 第二十七張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十八張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月第二十九張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月三、限制片段的長度和限制圖1. 限制片段的長度識別4個核苷酸序列的限制酶產(chǎn)生DNA片段的平均長度:256(44)識別6個核苷酸序列的限制酶產(chǎn)生DNA片段的平均長度:4096(46)第三十張,PPT共三十三頁,創(chuàng)作于2022年6月2.制性內(nèi)切酶圖譜 限制性圖譜是各種限制性內(nèi)切酶切點(diǎn)在某一DNA分子或DNA片段上的排列,由于各酶切點(diǎn)之間的距離是以堿基對(kbp mbp)表示的,所以可計算出二切點(diǎn)間的絕對距離,因此限制
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