流式細胞儀基礎(chǔ)簡介

1、流式細胞儀基礎(chǔ)簡介主要內(nèi)容流式細胞儀概要流式細胞儀的工作原理流式細胞儀測量的對象什么是流式細胞儀流式細胞儀實物BD FACSVantageBD-Calibur 流式細胞儀基本結(jié)構(gòu)FCM的定義 流式細胞儀是指，使細胞（或其他粒子）以單個方式依次高速通過激發(fā)光束，采集細胞被光照時產(chǎn)生的各種信號，對信號進行處理，并對各參數(shù)進行關(guān)聯(lián)分析的一種儀器。對比 流式細胞儀是一種特殊的顯微鏡 流式細胞儀 顯微鏡 流動的細胞 靜止的細胞樣本 數(shù)量大 數(shù)量少 高速分選 樣本難以再利用細胞群體特征量分布 可以揭示細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息流式細胞儀 蛋白膠 多參數(shù) 單參數(shù) 量化的分布 平均值 容易檢測各個參數(shù)間的相關(guān)性 不容易

2、功能特點 （1）多參數(shù)定量分析每一個細胞； （2）細胞分選； 高純度：99%以上； 可分析小于1/10000比例的稀有細胞群； 單細胞克隆等。 （3）高通量（分析分選） 分析150，000個/ 秒 分選100，000個/秒 應用領(lǐng)域 疾病診斷生物學基礎(chǔ)研究環(huán)境監(jiān)測海洋微生物研究農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應用等等 70年代美國為攻克癌癥而建造。廠商：Becton-DicksonCoulter-BeckmanDOCytomation 已成為一個幾十億美金的產(chǎn)業(yè)流式細胞儀工作原理流體動力學聚焦流動室激光聚焦液流與光源探測光路聚焦二色鏡 1 2 3帶通濾波片光電倍增管激光束細胞收集透鏡前向散射光側(cè)向散射光，熒光 光信號

3、分離，導向，各探測通道PMT接收并轉(zhuǎn)化為電信號。光信號收集數(shù)據(jù)處理FSC SSC FL1 FL2 FL3對數(shù) 線性 線性 線性 對數(shù)脈沖處理，模數(shù)轉(zhuǎn)換光信號電信號記錄數(shù)據(jù)，顯示結(jié)果（面積，峰高，寬度）流式細胞儀產(chǎn)生的信號非熒光信號顆粒度細胞大小散射光信號區(qū)分裂解后的外周血細胞群熒光信號 熒光染料被激發(fā)而發(fā)射的光信號。 定量染色 熒光信號大小 被標記組分含量的定量多熒光標記胞內(nèi)多種組分，實現(xiàn)多參數(shù)測量PIAnnexinV細胞凋亡檢測DNA含量-PIAnnexin-VCD45 FITC (log)R1=單核細胞 (CD14+ve) R2=淋巴細胞 (CD45單核細胞)R3=中性粒細胞 (CD45單

4、核細胞) CD14 PE (log)前向散射光 (linear)側(cè)向散射光(linear)PEFITC熒光標記檢測外周血裂解后細胞群細胞分選流式細胞儀的測量對象大小 懸浮在溶液中的相互離散顆粒。 大小范圍：。對象類型 細胞類型： （1） 高等真核細胞； （2）酵母； （3）細菌； （4）多細胞的聚集體，如胰島等。 非生命顆粒： 細胞核、染色體、和其它細胞器以及乳化微球等。流式細胞儀能夠檢測的細胞屬性和組分舉例 1）不需染色： 大小，胞漿顆粒度，細胞自發(fā)熒光，色素，細胞精確計數(shù)。 2）需染色或標記： 細胞組分： 細胞膜：流動性，通透性，膜電位 細胞內(nèi)離子：H+（可檢測PH值），Na+，K+，Ca

5、2+（結(jié)合的和 自由 的）。 核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)等 總蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)分子間相互作用 抗原 細胞骨架成分 受體功能屬性：酶活性細胞凋亡細胞壞死細胞活性氫硫基凝血素結(jié)合位點藥物動力學.經(jīng)驗之談：凡細胞內(nèi)能進行熒光標記的成分或者某種變化，都可用流式細胞儀進行檢測。G1S phaseG2MG112 1DNA含量 DNA 含量細胞周期時相G0/1G2/MS細胞數(shù)細胞周期分析Hoechst33258（AT）Chromomycin A3 （GC）白血病患者2456X89-127recip 9-221314151617Y 1820192221Ph1 / 3染色體組型測定13生物物理所現(xiàn)有流式細胞儀型號：BD FACSVantage SE參數(shù)：分析10